甘君學等

摘要

將雌性豚鼠４０只隨機分成５組，每組８只。正常對照組，每日只喂正常顆粒飼料；造模對照組，每日喂成石飼料，連續(xù)喂養(yǎng)６０日；針刺治療組，造模后，每日電針"膈俞""肝俞""陽陵泉"穴；肌肉注射組，造模后隔日非穴位肌肉注射復方當歸注射液０.２ｍｌ；穴位注射組，造模后隔日在"膈俞""肝俞""陽陵泉"穴穴位注射復方當歸注射液。結果，造模組成石率大于正常組、穴注組，穴注組成石率最低；肝總酶各組均明顯低于正常組，只有穴注組對Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻富钚越險常組高；同時穴注組對降低ＡＬＴ、ＡＫＰ、５′玻危約案巫櫓β玻恰⒌ㄖβ玻切Ч最好。

主題詞膽結石／穴位療法膽色素類肝／酶學當歸注射液／投藥和劑量

膽石病是臨床常見病，多發(fā)病。結石雖發(fā)生于膽道系統(tǒng)，但膽汁由肝臟生成，而肝臟分泌的膽汁成分比例異?；蚰懼贉?，導致膽汁成石力增高，是產(chǎn)生膽石病的重要因素之一。本實驗采用具有活血化瘀作用的復方當歸注射液對膽色素結石模型豚鼠作穴位注射，以便通過對豚鼠肝臟和血清中部分酶類變化的觀察，了解該法經(jīng)改善肝膽系統(tǒng)血液循環(huán)和代謝狀況，從肝細胞水平調節(jié)膽汁生成和分泌，減少膽汁淤滯，逆轉成石趨勢的機理。

１材料與方法

１.１實驗分組

取實驗用雌性豚鼠(月齡２～３月，體重２５０±２０ｇ，南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供)４０只，隨機分成５組，每組８只，豚鼠每籠飼養(yǎng)４只，先籠養(yǎng)1周以適應環(huán)境，然后進入實驗狀態(tài)。藥品復方當歸注射液(四川雅安制藥廠生產(chǎn))。

(１)正常對照組：每日每只喂正常顆粒飼料５０ｇ，喂養(yǎng)１２０日，分上下午喂，并每日喂適量青飼料。

(２)造模對照組：每日每只喂成石飼料５０ｇ(含正常飼料４５.４３ｇ，致石藥物４.５７ｇ--其中酪蛋白１ｇ，蔗糖１.５ｇ，纖維素１ｇ，豬油１ｇ，膽酸０.０２ｇ，膽固醇０.０５ｇ)喂養(yǎng)６０日，后改用正常顆粒飼料喂養(yǎng)６０日，并每日喂適量青飼料。

(３)針刺治療組：喂養(yǎng)方式同造模對照組，第６１日起，每日用固定器固定豚鼠，針刺一側"膈俞""肝俞""陽陵泉"穴，連接脈沖電針儀通電１５ｍｉｎ，用連續(xù)波，頻率１６０次／ｍｉｎ，左右側穴位交替使用，每日１次，１０天為一療程，療程間隔２天。

(４)肌肉注射組：喂養(yǎng)方式同造模對照組，第６１日起，每日用固定器固定１５ｍｉｎ，隔日１次用復方當歸注射液非穴位肌肉注射０.２ｍｌ。

(５)穴位注射組：喂養(yǎng)方式同造模對照組，第６１日起，每日用固定器固定１５ｍｉｎ，隔日１次用復方當歸注射液穴注一側"膈俞""肝俞""陽陵泉"穴，每穴０.２ｍｌ，兩側交替使用。

１.２標本處理

實驗結束禁食２４小時，眼眶注射空氣處死豚鼠，迅速剖腹取出膽囊，觀察有無結石、沉淀及絮狀物，用注射器吸出全部膽汁；另抽取心臟血液；低溫下切取部分肝臟組織勻漿離心，各標本均置于低溫冰箱保存待檢。

１.３觀察指標及方法

１.３.１按協(xié)和醫(yī)院法作膽石定性并比較各組豚鼠成石情況。

１.３.２肝質膜ＡＴＰ酶活性測定采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒檢測。

１.３.３血清谷丙轉氨酶(ＡＬＴ）采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒檢測。

１.３.４血清堿性磷酸酶（ＡＫＰ）、５′埠塑賬崦(５′玻危)采用上海榮盛生物技術有限公司提供的試劑盒檢測。

１.３.５肝組織、膽汁β財咸煙僑┧彳彰(β玻)按２舶被酶葡萄糖醛酸法檢測。

２實驗結果

２.１各組豚鼠成石情況

見表１。

造模組成石率大于正常組(Ｐ＜０．０１）、穴注組(Ｐ＜０.０５)；針刺組和肌注組均大于正常組(Ｐ＜０.０５)；與造模組差異無顯著性意義(Ｐ＞０.０５)；穴注組與正常組差異無顯著性意義(Ｐ＞０.０５)。只有穴注組的成石率降低有統(tǒng)計意義。

豚鼠膽囊結石外形不規(guī)則，呈棕褐色，碾碎后涂在白色濾紙上留有明顯的棕黃色素，經(jīng)紅外光譜定性是膽色素為主要成分的膽色素結石。

２.２對豚鼠肝質膜ＡＴＰ酶活性的影響

見表２。

肝總酶(Ｋ＋Ｎａ＋Ｍｇ２＋玻粒裕忻)：各組均明顯低于正常組，其中以造模組最低。Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻福航鱸炷Ｗ槊饗緣陀謖常組(Ｐ＜０.０５)；穴注組與針刺組均比造模組提高(Ｐ＜０.０５)，但與正常組比較，僅穴注組明顯高于正常組(Ｐ＜０.０５)。Ｍｇ２＋玻粒裕忻福焊髯榫明顯低于正常組(Ｐ＜０.０１)。故各組豚鼠肝質膜ＡＴＰ酶活性比較，只有穴注組Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻富钚緣奶岣呔哂兄瘟埔庖濉

２.３對豚鼠血清ＡＬＴ、ＡＫＰ、５′玻危緣撓跋

見表３。

ＡＬＴ：造模組顯著高于其余4組(Ｐ＜０.０１)，但正常組、針刺組、肌注組、穴注組之間無顯著差異。ＡＫＰ：造模組亦顯著高于其余4組(Ｐ＜０．０１）；但針刺組低于正常組(Ｐ＜０.０５)。５玻危裕涸炷Ｗ橄災高于正常組與穴注組(Ｐ＜０．０１)，也高于肌注組(Ｐ＜０.０５)，與針刺組無顯著差異；穴注組顯著低于正常組、針刺組和肌注組，降低５玻危緣男Ч最好。綜合判斷，穴注組降低ＡＬＴ、ＡＫＰ、５玻危緣男Ч較好。

２.４對豚鼠肝組織β玻恰⒌ㄖβ玻塹撓跋

見表４。

肝組織β玻牽涸炷Ｗ橄災高于正常組(Ｐ＜０.０１)，也高于穴注組(Ｐ＜０.０５)，但與針刺組和肌注組無顯著差異(Ｐ＞０.０５)。膽汁β玻牽涸炷Ｗ橄災高于其余４組(Ｐ＜０.０１)，但穴注組、針刺組和肌注組仍高于正常組水平(Ｐ＜０.０１)。綜合判斷，穴注組降低肝組織β玻?、胆枝虏q男Ч較好。

３討論

３.１本實驗結果表明，致石食物促成結石的主要環(huán)節(jié)在于肝細胞水平，造模對照組豚鼠肝質膜ＡＴＰ酶活性降低，調節(jié)膽汁形成的作用下降，由于肝臟的受累，血清ＡＬＴ、ＡＫＰ、５玻危曰钚隕高，說明肝細胞毛細膽管有膽汁淤積現(xiàn)象；肝組織β玻墻入膽汁，將結合型膽紅素水解成游離膽紅素，與鈣離子結合形成膽紅素鈣石沉積于膽道系統(tǒng)。

３.２穴位注射能提高肝質膜Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻傅幕钚裕在肝細胞水平調整膽汁的生成與分泌，阻斷致石病理膽汁的形成，發(fā)揮阻止結石形成和溶解已有結石的作用。肝質膜ＡＴＰ在調節(jié)膽汁的形成和分泌中起重要作用，無論是膽汁酸依賴性或非依賴性膽汁，從攝入肝細胞到分泌入毛細膽管都是一個耗能過程，所以產(chǎn)能過程及ＡＴＰ酶活性就顯得非常重要。從表２可知，穴注組肝質膜Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻傅幕钚栽齦擼與造模組和正常組比較Ｐ＜０.０５，穴位注射提高肝質膜ＡＴＰ酶的活性，增強調節(jié)膽汁生成與分泌的能力，這可能是起效的重要因素之一。

３.３穴位注射能降低造模組升高的ＡＬＴ、ＡＫＰ、５玻危曰钚裕減輕肝細胞的損傷，改善膽汁淤滯現(xiàn)象，保持膽道通暢，防止膽汁中有形成分的沉積。ＡＬＴ是反映肝臟損害的比較敏感的指標；ＡＫＰ與５玻危允鞘粲詰ǖ老低車拿福分布于肝細胞毛細膽管一側的微絨毛及上皮細胞上，膽汁淤滯時，這些酶的生成亢進，逆流入血，使血清ＡＫＰ、５玻危隕高。從表３發(fā)現(xiàn)，穴位注射可使致石飼料引起的豚鼠血清ＡＬＴ、ＡＫＰ、５玻危砸斐Ｔ齦叩幕钚越檔橢琳常水平，穴注組與造模組比較各項指標均有非常顯著性差異(Ｐ＜０.０１)，而針刺組與造模組比較，５玻危曰钚暈廾饗圓鉅(Ｐ＞０.０５)。說明穴位注射能較好地調整肝臟疏泄功能，消除膽汁淤積而發(fā)揮消溶結石的作用。

３.４穴位注射能明顯降低造模組豚鼠肝臟、膽汁β玻腔盍Γ降低病理性膽汁的成石力，逆轉成石趨勢。肝組織的炎癥、損傷可使細胞釋放內源性β玻仟［３］，使進入膽汁的β玻腔钚栽齦擼水解結合性膽紅素，再與鈣離子結合產(chǎn)生膽色素結石。從表４可知，穴注組肝組織β玻嗆偷ㄖβ玻腔钚越顯炷Ｗ槊饗韻陸(Ｐ＜０.０５，Ｐ＜０.０１)。說明穴位注射能穩(wěn)定內環(huán)境，提高肝細胞抗損傷能力，減少了內源性β玻塹氖頭牛抑制了肝組織和膽汁中β玻塹幕钚裕減少了膽石的生成。至于穴位注射如何改善肝細胞代謝，穩(wěn)定肝細胞內環(huán)境，從肝細胞水平阻斷致石性的病理性膽汁的形成與分泌，抑制膽石形成并消溶結石的過程，有待進一步研究。

６參考文獻

１陳元方，等．丙谷胺對豚鼠膽色素結石生成的影響．中華消化雜志，１９９０；２９(２)：４６６

２徐叔云，等．藥理實驗方法學．第２版，北京：人民衛(wèi)生出版社，１９９１：４９７

３ＯｙａｂｕＨ：ＤｉｇＤｉｓＳｃｉ，１９８４；３２９：８０９

（修回日期：２０００玻埃氮玻保叮齊淑蘭發(fā)稿）