杞少華　彭芳芳　張百芳　沈　晗　吳少波　武棟成

摘要：構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒PHLCX Nflag3／小窩蛋白-1，并在293T細(xì)胞中表達(dá)。用PCR的方法擴(kuò)增cDNA文庫中的人小窩蛋白-1基因，連接在真核表達(dá)載體PHLCX Nflag3的短肽標(biāo)簽flag的下游，用限制性酶切和測序的方法鑒定；將重組質(zhì)粒以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，Western blotting法檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)。結(jié)果顯示，雙酶切出現(xiàn)兩個(gè)片段，分別與空載體和人小窩蛋白-1的cDNA分子質(zhì)量大小相符，測序結(jié)果符合人小窩蛋白-1的cDNA序列；Western blotting顯示構(gòu)建的新載體能夠在293T細(xì)胞中表達(dá)小窩蛋白-1／flag融合蛋白，表明已成功構(gòu)建了能在293T細(xì)胞中高效表達(dá)小窩蛋白-1／falg融合蛋白的真核表達(dá)載體PLHCX Nflag3／小窩蛋白-1。

關(guān)鍵詞：小窩蛋白-1；基因表達(dá)；293T細(xì)胞

中圖分類號(hào)：Q782

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007—7847(2005)04—0331—05