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云南紅豆杉紫杉烯合成酶基因克隆、序列分析與植物表達載體的構(gòu)建

2005-04-29 00:44:03梁素鈺和麗崗鄭學(xué)勤
生命科學(xué)研究 2005年1期

梁素鈺 和麗崗 鄭學(xué)勤

摘要:利用分段RT-PCR法成功地從云南紅豆杉葉片總RNA中分離出兩條長約1.4kb和1.5kb的cDNA片段,克隆到pUCm-T載體中,序列拼接分析表明,該cDNA片段與Wildung M R 等發(fā)表的紫杉三烯合成酶基因編碼區(qū)2568bp有41個核苷酸不同,同源性為98.42%,具有編碼862個氨基酸蛋白質(zhì)的能力。為了檢測所克隆的基因編碼產(chǎn)物是否具有活性,并進一步制備抗體以便于將來轉(zhuǎn)基因植物的檢測,構(gòu)建了一個酵母表達載體GAPA-T14;為了轉(zhuǎn)化植物構(gòu)建了兩個具有不同啟動子的植物表達載體,PBI121-T14(含35S啟動子)和pBIH-T14(在pBI121的基礎(chǔ)上以膠乳特異啟動子)。

關(guān)鍵詞:云南紅豆杉;紫杉烯合成酶;植物表達載體;cDNA克??;紫杉酶

中圖分類號:Q78

文獻標識碼:A

文章編號:1007-7847(2005)01-0024-05

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