盤日海 陳文靜 張江宇

甲狀腺結(jié)節(jié)是甲狀腺細(xì)胞局部異常生長導(dǎo)致的病變,該疾病較為常見,有甲狀腺結(jié)節(jié)家族史以及放射暴露史患者更易患病,根據(jù)病情嚴(yán)重程度可將其分為良性結(jié)節(jié)和惡性結(jié)節(jié)。大約5%～7%的患者可經(jīng)過觸診檢出,大約20%～76%的患者經(jīng)過超聲檢查檢出［1］。目前超聲引導(dǎo)下甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查是診斷此類疾病的有效手段,但受到取材、制片以及閱片人員能力等多方面的限制,導(dǎo)致診斷結(jié)果可能出現(xiàn)誤差［2］。分子標(biāo)志物檢測能在一定程度上提高甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)的診斷準(zhǔn)確度。Galectin-3 在低分化甲狀腺癌的診斷中效果較好。甲狀腺乳頭狀癌中BRAF V600E 基因突變較為常見,大約80%左右的基因突變?yōu)樵摶蛲蛔兦揖哂刑禺愋?。TPO 在甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞內(nèi)大量存在,近10 年來,該分子標(biāo)志物的表達水平檢測能有效診斷甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)。神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(CD56)在神經(jīng)外胚層腫瘤組織中大量存在,其表達水平與惡性腫瘤疾病病變以及預(yù)后有密切聯(lián)系,目前被當(dāng)作診斷甲狀腺結(jié)節(jié)的新型免疫標(biāo)志物［3］。本研究探究Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和CD56 聯(lián)合檢測的診斷效果,確定其診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以簡單隨機抽樣法選取2018 年1 月～2020 年12 月病理科488 例甲狀腺術(shù)后患者的病理標(biāo)本,其中186 例患者的病理標(biāo)本為良性結(jié)節(jié),設(shè)為良性組；262 例患者的病理標(biāo)本為甲狀腺乳頭狀癌,設(shè)為惡性組。良性組患者中男50 例,女136 例；年齡23～68 歲,平均年齡(50.12±9.05)歲；病程3～14 個月,平均病程(7.98±2.55)個月；其中甲狀腺腺瘤32 例、亞急性甲狀腺炎27 例、結(jié)節(jié)狀甲狀腺腫98 例、橋本甲狀腺炎29 例。惡性組患者中男70 例,女192 例；年齡25～70 歲,平均年齡(50.30±8.44)歲；病程2～15 個月,平均病程(7.91±2.47)個月；腫瘤直徑0.2～2.5 cm,平均腫瘤直徑(1.48±0.54)cm。兩組患者年齡、性別及病程等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法 采用免疫組化法進行檢測。用10%中福爾馬林固定液固定兩組標(biāo)本,脫水處理、石蠟包埋、切片(厚度4 μm),以EnVision 兩步法進行免疫組化染色。試劑選擇自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和CD56 抗 體,嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3 觀察指標(biāo) ①對比兩組Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 陽性表達率。光鏡觀察切片染色情況,無著色記為0 分、淡黃色著色記為1 分、棕黃色著色記為2 分、棕褐色著色為3 分；陽性細(xì)胞百分比<5%記為0 分,介于5%～25%之間記為1 分,介于25%～50%之間記為2 分,>50%記為3 分。兩項分?jǐn)?shù)乘積介于0～1 分則表示陰性(-),介于2～3 分則表示弱陽性(+),介于4～6 分表示中等陽性(++),>6 分則表示強陽性(+++)［4］。②對比Galectin-3、BRAF V600E、TPO和 CD56 4 種蛋白單一檢測和聯(lián)合檢測效能。靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%。準(zhǔn)確度=(真陽性+真陰性)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 陽性表達率對比 惡性組Galectin-3、BRAF V600E 陽性表達率明顯高于良性組,TPO、CD56 陽性表達率明顯低于良性組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 陽性表達率對比(n,%)

2.2 兩組Galectin-3 和BRAF V600E 同時陽性、TPO和CD56 同時陽性對比 良性組、惡性組Galectin-3和BRAF V600E 同時陽性分別有2 例(1.08%)、198 例(75.57%),惡性組Galectin-3 和BRAF V600E 同時陽性率明顯高于良性組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=244.282,P=0.000<0.05)。

良性組、惡性組TPO 和CD56 同時陽性分別有170 例(91.40%)、17 例(6.49%),惡性組TPO 和CD56同時陽性率明顯低于良性組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=322.493,P=0.000<0.05)。

2.3 Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 單一診斷及聯(lián)合診斷的診斷效能對比 Galectin-3 單一診斷靈敏度為93.51%(245/262)、特異度為91.40%(170/186)、準(zhǔn)確度為92.63%(415/448)；BRAF V600E 單一診斷靈敏度為81.68%(214/262)、特異度為98.92%(184/186)、準(zhǔn)確度為88.84%(398/448)；TPO 單一診斷靈敏度為14.89%(39/262)、特異度為0(0/186)、準(zhǔn)確度為8.71%(39/448)；CD56 單一診斷靈敏度為7.63%(20/262)、特異度為1.08%(2/186)、準(zhǔn)確度為4.91%(22/448)；Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 聯(lián)合診斷靈敏度為95.80%(251/262)、特異度為99.46%(185/186)、準(zhǔn)確度為97.32%(436/448)。Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 聯(lián)合診斷的靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度均高于各項指標(biāo)單一診斷。

3 討論

甲狀腺結(jié)節(jié)可發(fā)生于各年齡階段,男女發(fā)病率之比約為1∶3.83,大多數(shù)情況下,患者無明顯癥狀且甲狀腺功能正常,但隨著病情進展,可能出現(xiàn)咽喉異物感、頸部疼痛等,若出現(xiàn)囊內(nèi)自發(fā)性出血,則會加重疼痛感［5］。甲狀腺乳頭狀癌分化較好,其與甲狀腺乳頭增生和正常甲狀腺濾泡的容易混淆,難以區(qū)分,因為以上疾病在毛玻璃樣核、乳頭狀結(jié)構(gòu)改變方面相似。另外甲狀腺結(jié)節(jié)在炎癥的影響下會出現(xiàn)纖維化,誤以為出現(xiàn)浸潤,進而增加了確診難度。

免疫組化是目前臨床應(yīng)用廣泛的一種診斷技術(shù),而甲狀腺結(jié)節(jié)病理組織中有有效且可靠的免疫組化標(biāo)記物能輔助診斷甲狀腺良性結(jié)節(jié)和甲狀腺乳頭狀癌［6］。Galectin-3 在正常細(xì)胞和癌性細(xì)胞中都存在,且主要存在于細(xì)胞質(zhì)中,主要生物學(xué)功能包括調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化、凋亡、炎癥以及腫瘤轉(zhuǎn)移、浸潤,該物質(zhì)在免疫細(xì)胞、甲狀腺上皮細(xì)胞、成纖維母細(xì)胞以及巨細(xì)胞中均有表達［7］。BRAF V600E 是在甲狀腺乳頭狀癌中高表達的一種抑癌基因,可激活P21 表達,且能有效修復(fù)損傷的基因,防止受損細(xì)胞進入下一周期［8］。BRAF V600E 基因表達位置改變時其抑癌作用會明顯減弱,進而引起甲狀腺癌變。本次研究中,惡性組Galectin-3、BRAF V600E 陽性表達率明顯高于良性組,惡性組Galectin-3 和BRAF V600E 同時陽性率明顯高于良性組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。TPO 是一種免疫球蛋白,其主要作用是促進甲狀腺激素合成。正常情況下在濾泡上皮細(xì)胞中表達,且為陽性表達,但在甲狀腺乳頭狀癌中會出現(xiàn)異常表達,降低抗TPO 抗體親和力,從而降低其表達［9］。CD56 在自然殺傷細(xì)胞、星形細(xì)胞、活化T 細(xì)胞、神經(jīng)元以及施萬細(xì)胞中正常表達。此蛋白在多種甲狀腺疾病診斷中的研究較多,在甲狀腺乳頭狀癌中主要表現(xiàn)為表達缺失,且多呈陰性表達,在甲狀腺良性結(jié)節(jié)中持續(xù)性陽性表達。本研究顯示,惡性組TPO、CD56 陽性表達率明顯低于良性組,惡性組TPO和CD56同時陽性率明顯低于良性組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

本研究顯示,Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和CD56 聯(lián)合診斷的診斷效能高于單一診斷,靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度均超過95%。說明多項指標(biāo)聯(lián)合診斷效果更好。郭宏義等［10］研究中發(fā)現(xiàn)多項免疫組化標(biāo)記物聯(lián)合診斷能明顯提高甲狀腺乳頭狀癌診斷準(zhǔn)確性,這一結(jié)果與本次研究相似。說明這一項研究內(nèi)容具有可信度。

綜上所述,Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和CD56 是甲狀腺良、惡性病變鑒別診斷的重要輔助指標(biāo),Galectin-3 和BRAF V600E 陽性表達、TPO 和CD56 陰性表達是診斷甲狀腺乳頭狀癌的特異性標(biāo)志物,形態(tài)學(xué)診斷聯(lián)合檢測4 種標(biāo)志物有助于提高甲狀腺乳頭狀癌的診斷準(zhǔn)確性。