穆志杰

[摘要]目的：探索阿托伐他汀對缺血再灌注損傷大鼠血腦屏障的作用。方法：制備腦缺血再灌注模型，用阿托伐他汀規(guī)律治療，觀察腦組織的通透性改變以及腦組織中基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的表達(dá)情況。濕重-干重法測量腦含水量的變化。結(jié)果：腦缺血再灌注提高了大鼠血腦屏障的通透性，用阿托伐他汀治療后大鼠腦含水量明顯降低，同時MMP-9表達(dá)減少。阿托伐他汀對血腦屏障具有保護(hù)作用。

[關(guān)鍵詞]腦缺血再灌注 血腦屏障 基質(zhì)金屬蛋白酶9

中圖分類號：R3文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1671－7597（2009）0310003－01

在臨床中，常見的腦組織的病變例如腦腫瘤，腦缺血等病變都會影響到血腦屏障的通透性，致使血腦屏障對腦組織的保護(hù)作用受損，因此維護(hù)血腦屏障的結(jié)構(gòu)和功能完整是當(dāng)今神經(jīng)保護(hù)研究中的熱點，他汀類藥物具有改善血管內(nèi)皮功能，抗炎作用和免疫調(diào)節(jié)等作用，本試驗主要是用阿托伐他汀干擾缺血再灌注模型的大鼠，來觀察這種藥物在病理情況下對基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的表達(dá)情況及對血腦屏障通透性的影響。

一、材料與方法

（一）實驗動物

動物雄性SD大鼠，體重（200±20）g，由山西醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。隨機(jī)分為缺血再灌注模型組和阿托伐他汀治療組，各組內(nèi)又按不同時間點分2h，4h，6h，12h，24h，48h小組，每小組10只。每小組中5只用于免疫組化試驗，其余5只用于測定腦組織含水量。

（二）動物模型的制作

參照文獻(xiàn)方法［1,2］，用10%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定，常規(guī)消毒皮膚，頸部正中切開，鈍性分離右側(cè)頸總動脈、頸外動脈和頸內(nèi)動脈。沿頸內(nèi)動脈向下分離出翼腭動脈，并電凝。用動脈夾夾閉頸總動脈，于頸內(nèi)動脈上近頸總動脈向下分離出翼動脈，并電凝。用動脈夾夾閉頸總動脈，于頸內(nèi)動脈上近頸總動脈分叉處剪一切口，將一魚線（直徑約0.30mm）沿頸內(nèi)動脈緩慢插入至大腦中動脈口，略感阻力時停止，插入長度約（18.0±0.5）mm，結(jié)扎固定魚線。結(jié)扎頸內(nèi)動脈近心端，取下動脈夾，恢復(fù)頸外動脈血流。定時抽掉魚線恢復(fù)灌注。

（三）觀察指標(biāo)

神經(jīng)癥狀評分參照文獻(xiàn)方法［3,4］，按受損程度擬定神經(jīng)癥狀評分等級。無神經(jīng)損傷癥狀為Ⅰ級；不能完全伸展左側(cè)前爪為Ⅱ級；不能完全伸展左側(cè)前爪，向左側(cè)轉(zhuǎn)圈為Ⅲ級；不能完全伸展左側(cè)前爪，向左側(cè)傾倒為Ⅳ級；不能自發(fā)行走，意識喪失為Ⅴ級。按上述標(biāo)準(zhǔn)，于造模后24h，采用單盲法對各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)癥狀評分。

（四）阿托伐他汀規(guī)律治療

在制作模型前一周，腹腔注射阿托伐他汀5毫克每千克每天。

（五）免疫組化法測定MMP-9的表達(dá)

石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，3mL?L-1過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶，熱修復(fù)抗原后，100mL?L-1正常山羊血清封閉非特異性抗原滴加一抗（1∶100稀釋）（購自武漢博士德生物公司），4℃過夜滴加生物素標(biāo)記的二抗；37℃孵育30min；滴加辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液；DAB顯色，封片。

（六）腦組織稱重

按照適當(dāng)?shù)臅r間點斷頭取腦，稱重，（精確到0.1mg），然后置入100℃恒溫箱，24h后稱干重。腦含水量（%）=（濕重-干重）/濕重×100。

（七）數(shù)據(jù)處理

各測定值用.x ±s表示，用SPSS 10.0統(tǒng)計學(xué)軟件作單因素方差分析。

二、結(jié)果

（一）免疫組化結(jié)果

大鼠在腦缺血再灌注4小時后，在腦組織中出現(xiàn)了MMP－9的表達(dá)，治療組與模型組相比，每個時間點所得到的切片顯示其陽性率明顯下降（P <0.05）。

（二）腦組織含水量

本實驗?zāi)X組織含水量在腦缺血后4小時增加（P <0.05），但治療組增加的幅度比模型組的小。

三、結(jié)論

他汀類藥物因與羥甲基戊二酰輔酶A結(jié)構(gòu)相似，且與HMG2CoA還原酶的親和力高出HMG2CoA數(shù)千倍，故可對該酶產(chǎn)生競爭性抑制作用。通過阻止從HMG2CoA合成甲羥戊酸，不但能有效調(diào)節(jié)血脂，而且還可通過抑制GTP結(jié)合蛋白Rho和Rac而上調(diào)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitricoxide synthase，eNOS）的表達(dá)，并作用于NADH/NADPH氧化酶系統(tǒng)，降低NADPH的氧化活性[5]。抑制低密度脂蛋白的氧化和降低細(xì)胞內(nèi)的氧化強(qiáng)度，直接抑制超氧化物的產(chǎn)生并有效清除氧自由基，減輕內(nèi)皮損傷。從而維持血腦屏障的完整性。但他汀類藥物對MMP-9的影響至今尚未得到公認(rèn)。

本試驗顯示腦缺血再灌注時。血腦屏障的完整性受損，腦組織水含量增加，但用阿托伐他汀治療后，腦水腫得以緩解，同時MMP-9的表達(dá)明顯下降，說明MMP-9的表達(dá)與腦水腫的發(fā)生密切相關(guān)，提示阿托伐他汀可通過降低血清MMP-9水平，減少血腦屏障的開放，減輕水腫，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，為ICH的治療提供了一個新思路。

參考文獻(xiàn)：

[1]Longa EZ,Weinstein PR,Carison S,et al.Reversible middle cer ebralartery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84.

[2]徐淑云、卞如濂、陳修，藥理實驗方法學(xué)，第3版[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1066.

[3]Lundy EF,Solik BS,Frank RS,et al.Morphometric evalu tion of braininfarcts in rats and gerbils[J].pharmacolmethods,1986,16(3):201.

[4]Bederson JB,Pitts LH,Germano SM,et al.Evaluation of 2,3,52triphe2 nyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats[J].stoke,1986,17:1304.

[5]Glorioso N,Troffa C, Filigheddu F,et al. Effect of the HMG2CoA reductase inhibitors on blood p ressure in patients with essential hypertension and p rimary hypercholesterolemia.Hypertension,1999,34:1281-1286.