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詹氏甲烷球菌DNA連接酶在大腸桿菌中的表達(dá)純化及連接活性鑒定

2009-04-29 00:44:03謝響明劉建華
生命科學(xué)研究 2009年2期
關(guān)鍵詞:劉建華耐熱性球菌

張 洋 謝響明 劉建華

摘要:對一種耐熱性古茵——詹氏甲烷球茼(Methanocaldococetis jennaschii)的DNA連接酶進(jìn)行了克隆、表達(dá)、純化,并對其生物化學(xué)特性和酶學(xué)活性進(jìn)行了初步研究.詹氏甲烷球菌DNA連接酶重組蛋白在ATP及Ma2+二價陽離子存在的條件下具有連接酶活性,能夠封閉DNA鏈上的切割.通過不同溫度下的測試,50~80℃為較適合連接溫度,其耐熱性強,甚至在90℃下加熱5 min后仍有連接酶活性;其發(fā)揮活性的pH值范圍比較寬泛,最適pH值為6.0~9.0.這是國際上對詹氏甲烷球菌DNA連接晦的首次報導(dǎo)。

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