張永梅 李 霞 盧兵遠(yuǎn) 李 芬 李豐宜

摘要于2008年秋季進(jìn)行了日照市亞I-O型口蹄疫疫苗免疫效果檢測(cè),結(jié)果表明,日照市牛亞I型口蹄疫和O型口蹄疫免疫合格率都達(dá)到80%以上;而豬O型口蹄疫免疫合格率偏低,剛達(dá)到農(nóng)業(yè)部70%以上的要求。對(duì)豬O型口蹄疫免疫合格率偏低的原因進(jìn)行了分析,建議要針對(duì)檢測(cè)情況抓緊時(shí)間組織補(bǔ)免,確保免疫程度達(dá)到1 000%。

關(guān)鍵詞豬O型口蹄疫;牛亞I型口蹄疫;牛O型口蹄疫;免疫效果;檢測(cè)

中圖分類號(hào)S858.28文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739(2009)08-0175-01

2008年11月,日照市秋季重大動(dòng)物疫病防疫結(jié)束后,為及時(shí)對(duì)免疫效果進(jìn)行檢測(cè),筆者按照《山東省2008年高致病性禽流感、口蹄疫等主要?jiǎng)游镆卟”O(jiān)測(cè)方案》要求,對(duì)全市的種畜禽場(chǎng)、養(yǎng)殖場(chǎng)、活禽交易市場(chǎng)、豬屠宰場(chǎng)進(jìn)行集中采樣檢測(cè)。隨機(jī)抽查了16個(gè)場(chǎng)(戶),采集血清樣品232份,其中7個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)、6個(gè)奶牛場(chǎng)、3個(gè)屠宰場(chǎng)。

1檢測(cè)方法

采用蘭州獸醫(yī)研究所研制的亞州I型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào):2008052802)、O型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)2008052801)進(jìn)行檢測(cè)。

2器材的準(zhǔn)備

亞I-O型口蹄疫液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)試劑盒,5～50μL移液器:多道與單道各數(shù)把,37℃溫箱,酶標(biāo)儀,其他試驗(yàn)耗材。

3試驗(yàn)操作步驟

3.1包被固相

用包被緩沖液稀釋兔抗血清至工作濃度,在ELISA板每孔加50μL。室溫振蕩30min,然后置濕盒中室溫過(guò)夜。

3.2抗原-抗體(對(duì)照和待檢血清)的預(yù)告結(jié)合(液相阻斷)

各對(duì)照和待檢血清在LB-ELISA中的布局,在第1行1～10孔加入不同樣品,按12.5μL樣品+87.5μL PBST工作液,按列倍比稀釋。封板后室溫振蕩30min,然后置濕盒中4℃過(guò)夜。

3.3轉(zhuǎn)移抗原-血清混合液

將包被的ELISA板取出,洗滌5次,扣干。將抗原-血清混合液反應(yīng)板取出,室溫放置20～30min。將抗原-血清混合液轉(zhuǎn)移到ELISA板相應(yīng)各孔中,每孔50μL,置37℃溫箱1h。

3.4加檢測(cè)抗體

將裝有抗原—血清混合液的ELISA板取出,洗滌5次,扣干。以豚鼠抗血清稀釋液將豚鼠抗血清稀釋至工作濃度,混勻后每孔加50μL,置37℃溫箱1h。

3.5加酶結(jié)合物

取出ELISA板,洗滌5次,扣干。以PBST工作液將酶結(jié)合物稀釋至工作濃度,混勻后每孔加50μL,置37℃溫箱1h。

3.6加底物溶液

取出ELISA板,洗滌5次,扣干。加入底物溶液,每孔加50mL,置37℃溫箱15min。

3.7加終止液

如表1所示,每孔加50μL終止液,輕輕振蕩混勻,在酶標(biāo)儀上讀數(shù)。

4檢測(cè)結(jié)果

如表1所示,本次集中檢測(cè),共抽查了16個(gè)場(chǎng)戶,采集血清樣品232份。其中7個(gè)種豬場(chǎng)、3個(gè)屠宰場(chǎng),采樣105份,進(jìn)行O型口蹄疫檢測(cè),合格81份,免疫合格率為77.1%;6個(gè)牛場(chǎng),采樣127份,進(jìn)行O型口蹄疫檢測(cè),合格118份,免疫合格率為92.9%;進(jìn)行亞I型檢測(cè),合格107份,免疫合格率為84.3%。

5檢測(cè)結(jié)果分析

根據(jù)本次檢測(cè)結(jié)果,日照市牛亞I型和O型口蹄疫免疫合格率都能達(dá)到80%以上;而豬O型口蹄疫免疫合格率偏低,剛達(dá)到農(nóng)業(yè)部70%以上的要求,明顯低于2007年,屠宰場(chǎng)的表現(xiàn)尤其明顯。其主要原因可能有:①在秋防集中免疫過(guò)程中,4種強(qiáng)制免疫疫苗,有3種是豬用疫苗,3種疫苗的免疫必須間隔一定的時(shí)間;加上近幾年來(lái)高致病性豬藍(lán)耳病危害性已經(jīng)引起了養(yǎng)殖場(chǎng)戶的高度重視,豬藍(lán)耳、豬瘟疫苗大都優(yōu)先免疫,而將口蹄疫疫苗免疫拖后,免疫時(shí)間距離采樣時(shí)間太短。②本次抽查加大了豬屠宰場(chǎng)的比重,而屠宰場(chǎng)豬的來(lái)源多是農(nóng)村的散養(yǎng)戶,其免疫密度低于養(yǎng)殖場(chǎng)。③奶牛場(chǎng)戶的免疫質(zhì)量較好,但免疫效果不平衡。目前,日照市注射的都是亞I-O型口蹄疫二聯(lián)苗,但二者的免疫效果卻不一樣,O型疫苗的免疫效果明顯好于亞I,可能是兩毒株的免疫原性有差異或由于常期使用O型口蹄疫疫苗有關(guān)。另外,本次抽查的牛場(chǎng)除1個(gè)肉牛場(chǎng)外,其他都是奶牛場(chǎng)戶,說(shuō)明日照市奶牛場(chǎng)戶的免疫質(zhì)量比較好。

6建議

根據(jù)本次檢測(cè)結(jié)果,日照市豬O型、牛亞I-O型口蹄疫免疫合格率雖然都能達(dá)到農(nóng)業(yè)部70%以上的要求,但有關(guān)區(qū)縣應(yīng)針對(duì)各養(yǎng)殖場(chǎng)的檢測(cè)情況抓緊時(shí)間組織補(bǔ)免,確保免疫密度達(dá)到100%,以達(dá)到重大動(dòng)物疫病的防控效果。