国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

高效液相色譜法測(cè)定注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4∶1)含量及有關(guān)物質(zhì)

2009-07-17 09:50周衛(wèi)民李健和彭六保曹俊華
中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2009年9期
關(guān)鍵詞:西林本品供試

周衛(wèi)民 李健和 彭六保 曹俊華 羅 霞

[摘要] 目的:建立高效液相色譜法測(cè)定注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4∶1)含量及有關(guān)物質(zhì)。方法:色譜柱為Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流動(dòng)相為甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨溶液(600∶400∶20)(用磷酸調(diào)節(jié),pH值為3.5);檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;流速為0.8 ml/min,柱溫為25℃,進(jìn)樣量為20 μl。結(jié)果:6批樣品中有關(guān)物質(zhì)最大單個(gè)雜質(zhì)的平均含量為0.746%,總雜質(zhì)的平均含量為2.482%。哌拉西林和他唑巴坦檢測(cè)濃度的線性范圍分別為53.92~215.70 μg/ml(r=0.999 9)和12.72~50.86 μg/ml(r=0.999 8),平均回收率分別為99.9%(RSD=0.51%)和99.8%(RSD=0.40%)。結(jié)論:本檢測(cè)方法靈敏、快速、結(jié)果準(zhǔn)確,可用于注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4∶1)的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] HPLC;注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4∶1);含量測(cè)定;有關(guān)物質(zhì)

[中圖分類號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1674-4721(2009)05(a)-007-04

Determination of piperacillin sodium and tazobactam sodium (4∶1) for injection and its related substances by HPLC

ZHOU Weimin1, LI Jianhe2*, PENG Liubao2, CAO Junhua2, LUO Xia2

(1.Department of Pharmacy, Liangang Hospital of Loudi, Loudi 417009, China; 2.Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 410011, China)

[Abstract] Objective: To establish a high performance liquid chromatagraph(HPLC) method for the determination of piperacillin sodium and tazobactam sodium (4∶1) for injection and its related substances. Methods: Thechromatographic separation was performed on a PhenomenexC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)with mobile phases constisted of methanol-water- 10%tetrabutylammonium hydroxide solution(adjust pH to 3.5 with phosphoric acid)(600:400:20) and the flow rate at 0.8 ml/min. The detection wavelength was 230 nm. The column temperature was 25℃ and the sample size was 20 μl. Results: The average contents of the largest single impurity and the total impurities in six batches of samples was 0.746% and 2.842%, respectively. The linearity ranges of piperacillin and tazobactam were 53.92-215.70 μg/ml(r=0.999 9)and 12.72-50.86 μg/ml(r=0.999 8), respectively. The average recovery were 99.9%(RSD=0.51%) and 99.8%(RSD=0.40%),respectively. Conclusion: The method is sensitive, rapid,accurate,and suitable for the quality control of piperacillin sodium and tazobactam sodium (4∶1) for injection.

[Key words] HPLC;Piperacillin sodium and tazobactam sodium (4∶1) for injection;Content determination;Related substance

哌拉西林屬酰脲類青霉素,抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng),尤其對(duì)銅綠假單胞菌有強(qiáng)大抗菌作用,是目前國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用并被認(rèn)為是最有價(jià)值的一類青霉素,但其對(duì)β-內(nèi)酰胺酶不穩(wěn)定[1-2]。他唑巴坦是一個(gè)新的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑,屬于青霉烷,在舒巴坦結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上增加了1個(gè)三氮唑環(huán),是舒巴坦的衍生物,具有廣譜的抑酶活性[2-3]。哌拉西林與他唑巴坦聯(lián)合后具有良好的協(xié)同作用,可增加哌拉西林的抗菌活性,并擴(kuò)大其抗菌譜,比常用的酶抑制聯(lián)合制劑,如哌拉西林/舒巴坦、氨芐西林/舒巴坦及替卡西林/克拉維酸的抗菌作用強(qiáng)[4-7]。哌拉西林他唑巴坦復(fù)方制劑中,哌拉西林與他唑巴坦的配比有8∶1和4∶1兩種。配比為8∶1的復(fù)方制劑,由日本大鵬公司研究,1992年后相繼在法國(guó)、英國(guó)、西班牙、德國(guó)和美國(guó)上市,國(guó)內(nèi)于1999年批準(zhǔn)上市。配比為4∶1的復(fù)方制劑,由日本富山公司和大鵬公司共同開(kāi)發(fā),于2001年6月在日本批準(zhǔn)上市。文獻(xiàn)[8-9]報(bào)道哌拉西林/他唑巴坦的最適配比為4∶1。鑒于目前國(guó)內(nèi)未見(jiàn)有4∶1品種開(kāi)發(fā)上市,故研究開(kāi)發(fā)了療效確切、副反應(yīng)少、治療費(fèi)用相對(duì)較低、適用人群更廣(不僅適用于成人,而且適用于12歲以下兒童)、使用更為方便(有靜脈滴注和推注兩種給藥方式)的規(guī)格為2.5 g的注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4∶1)。采用高效液相色譜法對(duì)其含量測(cè)定以及降解產(chǎn)物的檢查進(jìn)行研究,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下:

1儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津LC-10A高效液相色譜儀;SPD-10A紫外檢測(cè)器;上海精密科學(xué)儀器有限公司FA1004N型電子分析天平。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4∶1)(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院藥劑科研制,批號(hào):080105、080106、080107、080108、080109、080110);哌拉西林對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):134215-200711,含量:90.7%);他唑巴坦對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):129501-200712,含量:99.3%)。甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)

2.1.1色譜條件

2.1.1.1流動(dòng)相選擇:參照文獻(xiàn),適當(dāng)調(diào)節(jié)各組分比例,選用甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨溶液(600:400:20)(用磷酸調(diào)pH值為3.5)為流動(dòng)相。

2.1.1.2檢測(cè)波長(zhǎng)確定:取本品適量,加流動(dòng)相溶解,并稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林10 μg的溶液,照紫外-可見(jiàn)分光光度法(《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄Ⅳ A),在200~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描;另分別精密稱取哌拉西林和他唑巴坦對(duì)照品適量,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1毫升中分別約含哌拉西林和他唑巴坦10 μg的溶液,同法操作。結(jié)果兩種主藥均只有紫外末端吸收??紤]到高效液相色譜儀和紫外檢測(cè)器的靈敏度與穩(wěn)定性,參照文獻(xiàn)中檢測(cè)波長(zhǎng),將230 nm作為本品有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取本品適量,精密稱定,加流動(dòng)相溶解,并定量稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林0.4 mg的溶液,作為供試品溶液。另取流動(dòng)相適量,作為空白溶液。分別取兩種溶液各20 μl注入液相色譜儀,試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果哌拉西林主峰保留時(shí)間為9.883 min,理論板數(shù)為6 480,他唑巴坦主峰保留時(shí)間為4.263 min,理論板數(shù)為4 666。兩主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5??瞻谉o(wú)干擾。參考文獻(xiàn)[1],規(guī)定系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中理論板數(shù)按哌拉西林峰及他唑巴坦峰計(jì)算均應(yīng)不低于1 600。

2.1.3破壞性試驗(yàn)

精密稱取本品適量,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林0.4 mg的溶液,作為供試品溶液。①酸破壞試驗(yàn):取供試品溶液10 ml,加濃鹽酸1滴,混勻,過(guò)濾,取續(xù)濾液作為酸破壞供試品溶液;另取濃鹽酸1滴,加10 ml流動(dòng)相稀釋,作為酸破壞空白溶液。②堿破壞試驗(yàn):取供試品溶液10 ml,加飽和氫氧化鈉溶液1滴,混勻,過(guò)濾,取續(xù)濾液作為堿破壞供試品溶液;另取飽和氫氧化鈉溶液1滴,加10 ml流動(dòng)相稀釋,作為堿破壞空白溶液。③氧化破壞試驗(yàn):取供試品溶液10 ml,加高錳酸鉀試液1滴,立即過(guò)濾,取續(xù)濾液作為氧化破壞供試品溶液;另取高錳酸鉀試液1滴,加10 ml流動(dòng)相稀釋,作為氧化破壞空白溶液。④熱破壞試驗(yàn):取供試品溶液10 ml,置沸水中加熱10 min,取出,放冷,過(guò)濾,取續(xù)濾液作為熱破壞供試品溶液。⑤光破壞試驗(yàn):取供試品溶液5 ml,于4 500 lx照度下放置24 h,取出,過(guò)濾,取續(xù)濾液作為光破壞供試品溶液。分別取上述各種溶液各20 μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。本品在酸、堿、氧化劑、高溫和強(qiáng)光照射作用下均發(fā)生降解,各條件下雜質(zhì)峰與兩主成分峰均能達(dá)到良好的分離。故本色譜條件能夠滿足有關(guān)物質(zhì)考察的要求。

2.1.4 精密度試驗(yàn)

取本品適量,加流動(dòng)相溶解,并定量稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林0.4 mg的溶液,作為供試品溶液。精密量取20 μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。如此連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果哌拉西林和他唑巴坦的峰面積分別為10 028 347和820 209,其RSD分別為0.82%和0.80%。本方法精密度良好。

2.1.5 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品適量,加流動(dòng)相溶解,并定量稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林0.4 mg的溶液,作為供試品溶液。分別于0、1、2、4、6、8 h精密量取20 μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以兩成分峰面積的變化為指標(biāo)考察供試品溶液在8 h內(nèi)的穩(wěn)定性。結(jié)果見(jiàn)表1。供試品溶液8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.6 檢測(cè)限試驗(yàn)

精密稱取哌拉西林對(duì)照品11.18 mg與他唑巴坦對(duì)照品12.26 mg,置100 ml量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。然后從上述溶液中精密量取1 ml,置100 ml量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。精密量取1ml,置10 ml量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。分別取20、10、5 μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖。當(dāng)進(jìn)樣量為10 μl時(shí),哌拉西林峰與他唑巴坦峰信噪比均為3,哌拉西林和他唑巴坦的最小檢出量分別為1.0 ng和1.2 ng。

2.1.7 測(cè)定法

取本品適量,精密稱定,加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林0.4 mg的溶液,作為供試品溶液;精密量取適量,用流動(dòng)相定量稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林16 μg的溶液,作為對(duì)照溶液。照上述色譜條件下的方法試驗(yàn),取對(duì)照溶液20 μl注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)儀器靈敏度,使哌拉西林峰高為滿量程的20%~25%。再取上述兩種溶液各20 μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖至哌拉西林峰保留時(shí)間的2倍,供試品溶液如顯雜質(zhì)峰,量取各雜質(zhì)峰面積,其中最大單個(gè)雜質(zhì)峰的峰面積不得大于對(duì)照溶液中哌拉西林和他唑巴坦兩主成分峰面積和的一半(2.0%);各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液中哌拉西林和他唑巴坦兩主成分峰面積的和(4.0%)。各批樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

同有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下。

2.2.2 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密稱取哌拉西林對(duì)照品148.96 mg和他唑巴坦對(duì)照品32.08 mg,置50 ml量瓶中,加流動(dòng)相溶解,并稀釋至刻度。分別精密量取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0 ml,置50 ml量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,取20 μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以哌拉西林峰面積A1為縱坐標(biāo),哌拉西林濃度C1(μg/ml)為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:A1=25 663 C1+5 487.8,r=0.999 9。以他唑巴坦峰面積A2為縱坐標(biāo),他唑巴坦?jié)舛菴2(μg/ml)為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:A2=8 436.1 C2-291.02,r=0.999 8。試驗(yàn)結(jié)果表明:哌拉西林溶液在53.92~215.70 μg/ml濃度范圍內(nèi),他唑巴坦溶液在12.72~50.86 μg/ml濃度范圍內(nèi)均與相應(yīng)峰面積呈良好的線性關(guān)系。色譜圖見(jiàn)圖3。

2.2.3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取本品適量,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林和他唑巴坦分別為0.100 mg和0.025 mg的溶液,作為供試品溶液,分別于0、1、2、4、6、8 h精密量取20 μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。含量測(cè)定供試品溶液在8 h內(nèi)較為穩(wěn)定。

2.2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱取本品適量,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1毫升中約含哌拉西林和他唑巴坦分別為0.100 mg和0.025 mg的溶液,作為供試品溶液,精密量取20 μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果哌拉西林和他唑巴坦的峰面積分別為2 415 379和198 180,其RSD分別為1.29%和0.71%。本方法精密度良好。

2.2.5 回收率試驗(yàn)

分別精密稱取哌拉西林對(duì)照品約80、100、120 mg各3份,分別精密稱取他唑巴坦對(duì)照品約20、25、30 mg各3份,各分別置于9個(gè)100 ml量瓶中,按處方分別加入相應(yīng)量的哌拉西林鈉和他唑巴坦鈉原料藥適量,各制成模擬樣品共9份。取各份模擬樣品,分別加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,搖勻。分別精密量取5 ml,置50 ml量瓶中,加流動(dòng)相溶解,并稀釋至刻度。另取哌拉西林對(duì)照品適量和他唑巴坦對(duì)照品適量,精密稱定,用流動(dòng)相溶解并稀釋制成約含哌拉西林和他唑巴坦分別為0.1 mg/ml和0.025 mg/ml的溶液。分別精密量取上述各種溶液20 μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,即得。結(jié)果見(jiàn)表4和表5。本方法回收率良好。

猜你喜歡
西林本品供試
小麥全程綠色防控用藥試驗(yàn)分析
小麥全程防控應(yīng)用拜耳公司農(nóng)藥產(chǎn)品試驗(yàn)
基于STM32的智能門鎖設(shè)計(jì)
仙鶴草:止血 止咳 補(bǔ)氣力
“含氨基酸水溶肥料”在生姜上的肥效試驗(yàn)
題西林壁
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)里的無(wú)用忠告
蘇東坡題西林壁的故事
中成藥外治足癬
含腐殖酸水溶肥料在大蒜上的肥效試驗(yàn)