周自桂，景瑞，金春，徐成，秦勇，*

(1.江蘇弘惠醫(yī)藥有限公司研發(fā)部，江蘇南京210008;2.江蘇神龍藥業(yè)有限公司，江蘇鹽城224260)

田基黃注射液是田基黃(又名地耳草，藤黃科金絲桃屬植物Hypericum japonicumThunb.)經(jīng)提取而成的滅菌水溶液，具有清熱利濕、散瘀消腫的功效，對治療急性、遷延性、慢性重癥肝炎及肝硬化具有良好療效，其有效成分主要是黃酮類化合物。生產(chǎn)過程中，廠家普遍反映產(chǎn)品存在質(zhì)量不穩(wěn)定、澄明度差等問題，并且醇沉成本高，生產(chǎn)周期長［1］。因此，積極探索其新的制備工藝尤顯重要。

膜分離是一種高效、節(jié)能、無污染的新型分離技術(shù)，其技術(shù)原理近似機(jī)械篩。當(dāng)溶液體系進(jìn)入膜過濾器時，在濾器內(nèi)的膜表面發(fā)生分離，溶劑(水)和其它小分子量溶質(zhì)透過具有不對稱微孔結(jié)構(gòu)的濾膜，大分子溶質(zhì)和微粒(如蛋白質(zhì)、病毒、細(xì)菌、膠體等)被濾膜阻留，從而達(dá)到分離的目的［2，3］。為了提高產(chǎn)品質(zhì)量，縮短生產(chǎn)周期、降低生產(chǎn)成本，將膜分離技術(shù)應(yīng)用于田基黃注射液生產(chǎn)，可進(jìn)一步改進(jìn)生產(chǎn)工藝，提高純度，顯著降低無藥理作用的雜質(zhì)。

1 實驗設(shè)備及藥品

FLT-U系列膜過濾系統(tǒng)(湖北菲爾特過濾工程有限公司)，LC-20AT高效液相色譜儀、SPD-20A檢測器(日本島津公司)，田基黃注射液(江蘇神龍藥業(yè)有限公司，批號070605)，槲皮苷對照品(中國生物制品檢定所，批號111538-200403)、異槲皮苷對照品(中國藥科大學(xué)天然藥化教研室，含量98.6%)。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 膜分離的工藝

2.1.1 水煎液制備

取田基黃4.5 kg，切斷，加水煎煮2次，第1次1 h，第2次45 min，加水量分別為藥材重的10倍、8倍，合并煎液，濾過，均分9份。按正交試驗表2的排列進(jìn)行實驗。

2.1.2 正交實驗設(shè)計

膜分離關(guān)鍵的工藝條件包括溫度、加水點(diǎn)、加水量、壓力及選擇合適分子量的膜等［3］。同樣條件下，溫度越高，膜通量越大(即單位時間，單位膜面積通過藥液的量)，考慮溫度較高時對有效成分有一定的破壞作用，故保持溫度不變，控制在40℃。同時考慮本藥品有效成分為黃酮類［4，5］，分子質(zhì)量均小于1 000，故選擇分子質(zhì)量為5 000的膜。本實驗主要考察其它三個因素，每個因素選擇3個水平，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.1.3 含量測定

取水煎液(原液)及膜過濾液，加甲醇稀釋成適宜的濃度，按文獻(xiàn)［6］測定槲皮苷及異槲皮苷含量，計算轉(zhuǎn)移率(轉(zhuǎn)移率=膜過濾液中槲皮苷與異槲皮苷的總量/原液中槲皮苷與異槲皮苷的總量)，結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表2 正交設(shè)計及統(tǒng)計分析表

2.1.4 結(jié)果

直觀分析結(jié)果表明:槲皮苷與異槲皮苷的轉(zhuǎn)移率影響因素大小順序為B>A>C，主要因素是加水量，其次是加水點(diǎn)，轉(zhuǎn)移率最高的組合為A3B3C1;方差分析結(jié)果表明:C因素對轉(zhuǎn)移率無顯著影響，合并到誤差項中，A、B因素有極顯著性意義。根據(jù)實驗結(jié)果，確定A3B3C1為最佳工藝。但壓力對轉(zhuǎn)移率的影響很小，而適當(dāng)增加壓力可以提高過膜速度，故選擇壓力為1.0 kg，則最優(yōu)工藝組合為A3B3C2，即水煎煮液濃縮到4倍時開始加水，加水煎煮液1.2倍量水，壓力為1.0 kg。

根據(jù)基本假定，孤石抗滑移力主要源于孤石B與周圍土體之間的摩擦力以及AC、OE段土體在受擠壓后的反力N1、N2。由于OE段所受為被動土壓力，而AC段受到的為主動土壓力，故N2> N1?；屏χ饕獮橥饬υ诮佑|面分量，孤石B的抗滑移安全系數(shù)：

表3 方差分析表

2.1.5 優(yōu)化工藝驗證實驗

按照選定的最佳工藝A3B3C2，即水煎煮液濃縮到4倍時開始加水，加水煎煮液1.2倍量水，壓力為1.0 kg，按正交實驗投料量放大10倍(5 000 g)進(jìn)行3次驗證實驗，槲皮苷與異槲皮苷的平均轉(zhuǎn)移率為94.8%，RSD為0.53%。

2.2 不同生產(chǎn)工藝的田基黃注射液質(zhì)量對比試驗

2.2.1 田基黃注射液原生產(chǎn)工藝［7］

取田基黃(批號070412)10 kg，切斷，加水煎煮2次，第1次1 h，第2次45 min，加水量分別為藥材重的10倍、8倍，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至2.5 L。加乙醇至含醇量達(dá)60%，靜置24 h，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至適量，加乙醇至含醇量達(dá)75%，同上法處理后，加水至5 L，搖勻，靜置24 h，濾過，濾液加新制的明膠溶液，邊加邊攪拌，冷藏24 h，濾過，濾液濃縮至適量，加乙醇至含醇量達(dá)85%，靜置48 h，濾過，濾液加20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0，靜置，濾過，濾液再用鹽酸調(diào)pH值至7.0，靜置，濾過，濾液減壓濃縮至適量，加水至2 L，冷藏24 h，濾過，濾液加活性炭10 g，煮沸15 min，濾過，濾液加注射用水至10 L，攪勻，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.5～7.5，0.45 μm濾膜精濾，灌封，115℃濕熱滅菌30 min，燈檢，即得。

2.2.2 應(yīng)用膜分離技術(shù)改進(jìn)田基黃注射液生產(chǎn)工藝

取田基黃(批號070412)10 kg，切斷，加水煎煮2次，第1次1 h，第2次45 min，加水量分別為藥材重的10倍、8倍，合并煎液，濾過，濾液經(jīng)FLT-U系列膜過濾系統(tǒng)按正交優(yōu)選工藝A3B3C2D2過濾(膜分子質(zhì)量為5 000)，濾液濃縮至2 L，加活性炭10 g，煮沸15 min，濾過，濾液加注射用水至10 L，攪勻，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.5～7.5，0.45 μm濾膜精濾，灌封，115℃濕熱滅菌30 min，燈檢，即得。

2.2.3 破壞性實驗

將兩種工藝生產(chǎn)的田基黃注射液，于115℃、30 min再次濕熱滅菌后，檢查可見異物。

2.2.4 加速實驗

將兩種工藝生產(chǎn)的田基黃注射液，于(40±2)℃放置，分別于0、1、2、3、6個月取樣檢查可見異物、按文獻(xiàn)［6］測定槲皮苷及異槲皮苷含量。

2.2.5 長期留樣實驗

將兩種工藝生產(chǎn)的田基黃注射液，于室溫條件下放置，分別于0、3、6、9、12月取樣檢檢查可見異物、按文獻(xiàn)［6］測定槲皮苷及異槲皮苷含量。

2.2.6 結(jié)果

總的質(zhì)量對比見表4，含量測定結(jié)果見表5。

表4 兩種工藝產(chǎn)品質(zhì)量對比

表5 兩種工藝產(chǎn)品含量對比

結(jié)果表明:應(yīng)用膜分離技術(shù)生產(chǎn)的田基黃注射液，藥液顏色較淺，有效成分轉(zhuǎn)移率高，成品檢驗各項指標(biāo)均合格，說明此法能有效提高產(chǎn)品質(zhì)量。經(jīng)破壞性實驗、加速實驗及長期留樣實驗，證明比原生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品更具穩(wěn)定性。

3 討論

本實驗研究了膜分離技術(shù)用于田基黃注射液的可行性以及通過工藝優(yōu)化獲得較高的轉(zhuǎn)移率，同時對產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行了對比研究。與原醇沉方法比，膜分離技術(shù)能提高有效成分轉(zhuǎn)移率、提高產(chǎn)品質(zhì)量、縮短生產(chǎn)周期、簡化生產(chǎn)工藝，由原來的8天縮為2天，更利于工業(yè)化大生產(chǎn)。

應(yīng)用膜分離技術(shù)制備中藥注射液是提高中藥注射液質(zhì)量的一個重大突破，通過選擇不同孔徑和截留不同分子量的膜對中藥進(jìn)行分子量分段分離，達(dá)到提純富集有效成分、除去雜質(zhì)的目的。膜分離技術(shù)在中藥的分離、純化中，將越來越被廣泛應(yīng)用。

致謝:感謝中國藥科大學(xué)天然藥化教研室提供異槲皮苷對照品。

［1］易醒，肖小年，邵思華，等.田基黃注射液采用吸附澄清法新工藝的研究［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，13(1):24-25.

［2］岑琴，周麗莉，禮彤.膜分離技術(shù)及其在中藥領(lǐng)域中的應(yīng)用［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2008，25(1):77-80.

［3］孔煥宇，楊麗平，陳玉武，等.復(fù)方中藥銀黃口服液有效成分膜分離工藝及正交實驗研究［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2006，12(3):1-3.

［4］傅芃，李廷釗，柳潤輝，等.田基黃黃酮類化學(xué)成分的研究［J］.中國天然藥物，2004，2(5):283-284.

［5］張琳，金媛媛，田景奎.田基黃的化學(xué)成分研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2007，42(5):341-344.

［6］林煥澤，吳秀榮.高效液相色譜法同時測定田基黃注射液中槲皮苷、異槲皮苷的含量［J］.中國藥房，2006，17(10):777-778.

［7］WS-10078(ZD-0078)-2002，田基黃注射液［S］.