高 偉，李連宏

(1．大連市中心醫(yī)院 普外三科,遼寧 大連116033；2.大連醫(yī)科大學 病理與法醫(yī)學 教研室,遼寧 大連 116044)

胰島素樣生長因子2(insulin-like growth factor 2，IGF-2)基因是第一個被證實的內(nèi)源性印跡基因，它的印記丟失已經(jīng)在乳腺癌等20多種腫瘤細胞中被發(fā)現(xiàn)。IGF-2作為一類多功能細胞生長調(diào)控因子,對細胞的增殖、分化、凋亡和轉化起著調(diào)節(jié)作用，也可以與其他因素一起在乳腺癌發(fā)生機制中協(xié)同發(fā)揮作用。

本研究通過采用免疫組織化學SP法檢測IGF-2在乳腺癌中的表達情況，以及與Ki-67表達的相關性，分析其與乳腺癌發(fā)生、轉移及與腫瘤細胞增殖的關系。

1 材料和方法

1.1 材 料

收集2005年～2007年大連市中心醫(yī)院病理科乳腺組織送檢標本，乳腺癌、乳腺纖維腺瘤和乳腺增生組織石蠟包埋標本各40例，乳腺癌中浸潤性導管癌29例，浸潤性小葉癌11例，患者年齡30～73歲，平均年齡51.3歲。所有病例術前均未接受放療或化療。

IGF-2、Ki-67(鼠抗，單克隆，MID-1)、DAB顯色劑及檢測試劑盒均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.2 方 法

采用免疫組化SP法檢測IGF-2、Ki-67的表達。所有標本均經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，4 μm層厚連續(xù)切片，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，抗原修復后血清濕盒內(nèi)孵育，再陸續(xù)加入一抗(IGF-2，1∶75稀釋；Ki-67，工作液)，二抗(即用型生物素標記的IgG)，三抗(鏈霉素抗生物素蛋白—過氧化酶液)，DAB顯色，蘇木素復染。每批染色均設置已知陽性對照，陰性對照以PBS替代一抗。

結果判斷：在高倍鏡下隨機觀察5個視野，IGF-2陽性表達部位在胞質，取陽性細胞占全部腫瘤細胞的百分比計數(shù)：按Kawamato的標準[1]，陽性細胞< 30%計為(-)，31%～50%為(+)，51%～80%為(++)，≥81%為(+++)，(++～+++)為強陽性。Ki-67陽性表達部位在胞核，陽性細胞占全部腫瘤細胞的百分比<5%計為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為(++)，≥50%為(+++)。

1.3 統(tǒng)計學方法

實驗結果應用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件包分析處理，樣品率的比較用四格表及行×列χ2檢驗，相關性用Spearman等級相關分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 IGF-2和Ki-67在不同乳腺病變中的表達

與對照組比較，雖然乳腺癌的IGF-2陽性表達率差異無顯著性意義(P>0.05)；但是，強陽性表達率明顯升高，差異有顯著性意義(P<0.05)。見表1。IGF-2在不同乳腺病變中的強陽性表達見圖1；Ki-67在不同乳腺病變中的表達見圖2。

圖1 IGF-2在不同乳腺病變中的表達

圖2 Ki-67在不同乳腺病變中的表達

++～+++為強陽性，3組間強陽性表達比較，P<0.05

2.2 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中表達的相關性

在乳腺癌組中，IGF-2和Ki-67二者表達呈正相關性。見表2。

表2 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中表達的相關性

P<0.01,rs=0.433

2.3 IGF-2、Ki-67在乳腺癌中的表達與臨床病理學特征的關系

IGF-2和Ki-67二者在不同年齡、不同組織學類型及不同受體情況中的表達差異無顯著性意義(P>0.05)。二者在原發(fā)灶大小不同和淋巴結有無轉移組間表達差異有顯著性意義(P<0.05)。其中，淋巴結有轉移組的陽性表達率明顯高于無轉移組；原發(fā)灶直徑>2 cm組的陽性表達率明顯高于原發(fā)灶直徑≤2 cm組。見表3。

3 討 論

IGF-2是一類小分子單鏈多肽類，其基因定位于染色體11P15，有研究已證實該基因的缺失會導致乳腺癌的發(fā)生[1]，而且IGF-2轉基因小鼠的乳腺癌發(fā)生率明顯增高[2]，說明IGF-2在基因水平對乳腺癌發(fā)生有十分重要的意義。研究顯示，早期乳腺癌患者血清中游離IGF-2水平較正常人明顯升高[3]，說明IGF-2與乳腺癌的發(fā)生關系密切。本研究顯示，IGF-2在乳腺增生、乳腺纖維腺瘤和乳腺癌組織中的表達逐漸升高，在乳腺癌組中的強陽性表達明顯高于另外兩組，提示IGF-2與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關。這可能是由于IGF-2可以刺激細胞增殖，刺激組織器官的生長、分化，因此腫瘤細胞的生長隨著IGF-2表達的升高而有所促進[4]。

表3 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中的表達與臨床病理學特征的關系

分組nIGF-2陽性陽性率(%)Ki-67陽性陽性率(%)年齡(歲) ≤358675.0675.0 >35322784.42475.0原發(fā)灶直徑(cm) ≤210550.0330.0 >2302893.32790.0淋巴結轉移 有262492.32284.6 無14964.3857.1受體情況 ER+PR+11981.8872.7 ER+PR-131184.6969.2 ER-PR+8787.5787.5 ER-PR-8675.0675.0類型 浸潤型導管癌292689.72379.3 浸潤型小葉癌11763.6763.6

ER：雌激素，PR：孕激素

Ki-67是一種與細胞增殖有關的核抗原，也是目前較常用的核增殖標記物。本實驗選用該指標與IGF-2在乳腺癌中聯(lián)合檢測，發(fā)現(xiàn)IGF-2、Ki-67在原發(fā)灶≤2 cm的乳腺癌組中表達明顯低于原發(fā)灶>2 cm組 (P<0.05)，二者表達情況與原發(fā)灶的大小密切相關。二者在有淋巴結轉移的乳腺癌中的表達明顯高于無淋巴結轉移組(P<0.05)。提示IGF-2不僅與乳腺癌的發(fā)展密切相關，而且參與乳腺癌的淋巴結轉移。IGF-2必需與其受體結合才能發(fā)揮生物學作用[5]，有研究顯示，IGF-2與IGF-1受體結合的多少與腫瘤在原發(fā)部位及遠處轉移部位的生長能力有關[6]。很多因素可以影響這種結合能力。本研究中IGF-2和Ki-67分別在不同乳腺癌患者年齡組和雌孕激素受體情況組中的表達差異無顯著性意義(P>0.05)，提示年齡和雌孕激素受體對這種結合能力的影響不大，即對腫瘤的原發(fā)生長和遠處轉移的影響不大。

[1] Wu HK,Squire JA,Catzavelos CG,et al. Relaxation of imprinting of human insulin-like growth factor II gene,IGF2,in sporadic breast carcinomas[J]. Biochem Biophys Res Commun,1997,235(1):123-129.

[2] Sun FL,Dean WL,Kelsey G,et al.Transactivation of Igf2 in a mouse model of Beckwith- Wiedemann syndrome [J].Nature,1997,389:809-815.

[3] Espelund U,Cold S,Frystyk J,et al. Elevated free IGF2 levels in localized,early-stage breast cancer in women[J]. Eur J Endocrinol,2008,159(5):595-601.

[4] Ito Y,Koessler T,Ibrahim AE,et al. Somatically acquired hypomethylation of IGF2 in breast and colorectal cancer[J]. Hum Mol Genet,2008,17(17):2633-2643.

[5] Pacher M,Seewald MJ,Mikula M,et al. Impact of constitutive IGF1/IGF2 stimulation on the transcriptional program of human breast cancer cells[J].Carcinogenesis,2007,28(1):49-59.

[6] Slipicevic A,Y GF,Askidt IC,et al.Diagnostic and prognostic role of the insulin growth factor pathway members insulin-like growth factor-2 and insulin-like growth factor binding protein-3 in serous effusions[J].Hun Pathol,2009,40(4):527-537.