肖琛聞 鮑國連 韋 強 劉 燕 季權(quán)安

鴨疫里氏桿菌病又稱鴨傳染性漿膜炎，是由鴨疫里氏桿菌(RA)引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類的一種急性或慢性傳染病。1～8周齡鴨敏感，惡劣環(huán)境條件可以促發(fā)感染。發(fā)病率為5%～90%，病死率高達80%，慢性耐過鴨主要表現(xiàn)神經(jīng)性癥狀，導致殘鴨和僵鴨。RA疫苗分滅活苗、弱毒活苗和亞單位菌苗等。高福等在研制RA福爾馬林滅活苗的基礎(chǔ)上，制得了礦物油佐劑滅活苗，最低保護率為75%，但注射部位有微弱的不吸收硬結(jié)。蘇小運等研制的鋁膠滅活苗一免后7～10d保護率為50%，20d后保護率為75%，保護率出現(xiàn)較慢。弱毒苗的缺點是容易造成細菌在被免動物體內(nèi)返毒，危害更大；亞單位菌苗雖然能夠提供較好的保護力，但其存在潛在的不確定性，因而暫時仍不能推廣?，F(xiàn)在還沒有理想的鴨疫里氏桿菌疫苗。

很多研究報道中藥復方也可作為佐劑，有增強疫苗免疫的效果，例如當歸補血湯、四君子湯、玉屏風散、小柴胡湯等。本研究試圖將玉屏風散、四君子湯以及兩者之合方玉風君子湯用于鴨疫里氏桿菌滅活濕苗中，觀察其免疫佐劑效果，為新型鴨疫里氏桿菌疫苗的開發(fā)提供新的思路。

(1)玉屏風散的水煎劑(YPF)

取黃芪90g、白術(shù)60g、防風30g，加水540ml(按每克生藥加水3ml)，冷水浸泡30 min。煮沸后90℃慢煎40

min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，二煎加水360 ml(按每克生藥加水2 ml)，煮沸后，90℃慢煎40 min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至150ml，濃度為1.2g／ml。

(2)四君子湯的水煎劑(SJZ)

取黨參40g、白術(shù)18g、茯苓18g、甘草12g，混合加水264ml，煮沸后90℃慢煎40min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，二煎加水176 ml，煮沸后，90℃慢煎40 min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至100ml，濃度為0.88g／ml。

(3)玉風君子湯(YFJZ)

黃芪90g、白術(shù)60g、茯苓30g、防風30g、黨參30g、甘草10g，混合加水750ml，煮沸后90℃慢煎40 min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，二煎加水500ml，煮沸后，90℃慢煎40min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至250ml，濃度為1 g／ml。

試驗結(jié)果表明在免疫后3周，合方組能夠顯著提高鴨對于鴨疫里氏桿菌的抗體水平。玉屏風散能夠提高鴨對于RA抗體的產(chǎn)生水平，但無統(tǒng)計學差異，四君子湯似乎對細菌苗的免疫并無佐劑作用。

有文獻報道玉屏風散或四君子湯能夠提高動物特異性或特異性免疫反應(yīng)，本研究所得結(jié)果與文獻報道并不符。分析原因可能有以下幾點：①本研究中所使用的為細菌性疫苗，玉屏風散或四君子湯的佐劑效果不佳或許與此有關(guān)，兩方對于病毒性疫苗的免疫效果更佳；②服用劑量不一樣可能是造成佐劑效果不明顯的原因之一。

本研究中只有合方對鴨RA抗體產(chǎn)生起顯著性作用，研究發(fā)現(xiàn)，合方對于鴨疫里氏桿菌疫苗的免疫主要在體液免疫方面發(fā)揮佐劑作用，在細胞免疫作用并不十分明顯，然而在流式細胞研究中我們發(fā)現(xiàn)了一個有趣的現(xiàn)象：即所有試驗組（除四君子湯組外）CD4+、CD8+細胞百分比同對照組相比有所下降但試驗組CD4+／CD8+比值卻高于對照組，無統(tǒng)計學差異。CD4+／CD8+的比值增高，說明受免動物的細胞免疫有增強趨勢。但為什么絕對百分比有所下降，分析原因可能與本研究中受免動物在5日齡時就給藥有關(guān)，雛鴨在生長初期免疫系統(tǒng)并沒有完全發(fā)育，在這時給雛鴨服用具有免疫調(diào)節(jié)功能的中藥或許反而對雛鴨的免疫系統(tǒng)發(fā)育造成一種負影響。免疫系統(tǒng)的生長在其后階段對于中藥具有某種依賴性，因此如何選擇一個給藥最佳時間成為今后研究的又一課題。

體重試驗表明，所有試驗組方劑對于鴨的生長無副作用。因此，可以對本研究中的合方玉風君子湯在鴨疫里氏桿菌疫苗上的佐劑運用方面作進一步研究。