汪思應(yīng)

(安徽(省)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，安徽 合肥 230032)

美國(guó)大學(xué)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)入制管理

汪思應(yīng)

(安徽(省)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，安徽 合肥 230032)

在美國(guó)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)管理早就進(jìn)入法制化軌道。任何大學(xué)、科研院所等部門進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都必須遵守美國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一系列法規(guī)和規(guī)定。比如經(jīng)美國(guó)國(guó)會(huì)授權(quán)，農(nóng)業(yè)部(USDA)首先制定的《動(dòng)物福利法》(Animal Welfare Act)、隨后衛(wèi)生部(PHS)制定的“檢驗(yàn)、研究和教學(xué)中飼養(yǎng)管理和使用脊椎動(dòng)物的法規(guī)”(US Government Principles for the Utilization and Care of Vertebrate Animals Used in Testing，Research and Training)及“人道使用和飼養(yǎng)管理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的法規(guī)”(Public Health Service Policy on Humane Care and Use of Laboratory Animals)。尤其政府部門如NIH、FDA、CDC及DoD等資助或批準(zhǔn)的科學(xué)研究、藥物研發(fā)等課題中的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，除遵守上述法規(guī)外，還必須符合這些部門頒布的一些規(guī)范如FDA的GLP規(guī)范(Good Laboratory Practice)及NIH“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理和使用指南”(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)等。上述法律法規(guī)的監(jiān)督主管部門還針對(duì)法規(guī)編寫(xiě)了相應(yīng)工作指導(dǎo)手冊(cè)指導(dǎo)各級(jí)管理機(jī)構(gòu)進(jìn)行具體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理。在這些管理機(jī)構(gòu)中，最基層、與科研人員關(guān)系最密切的就是各單位如大學(xué)、研究所等根據(jù)聯(lián)邦法規(guī)必須成立的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)(Institutional Animal Care and Use Committee，IACUC)(有些小的單位可以利用其上級(jí)單位的IACUC)。所以對(duì)于一所大學(xué)的科研人員，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)入的全部具體工作由IACUC管理。

IACUC一般由分管科研的副校長(zhǎng)負(fù)責(zé)，3～5人組成，隸屬學(xué)校，但根據(jù)聯(lián)邦法規(guī)開(kāi)展工作。其最基本的功能就是確定本單位所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都按照聯(lián)邦法律、條例和規(guī)則來(lái)進(jìn)行。主要工作包括:(1)接受審核并批準(zhǔn)PI動(dòng)物實(shí)驗(yàn)申請(qǐng)(Animal protocol)及年審(renewal);(2)制定動(dòng)物試驗(yàn)中各種 SOP、指南及規(guī)程;(3)強(qiáng)制執(zhí)行對(duì)操作人員進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前各種培訓(xùn)并發(fā)證;(4)討論并審核本單位研究人員進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)遇到的各種法規(guī)中不明確的特殊情況并對(duì)本單位動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指南等進(jìn)行修訂;(5)檢查本單位動(dòng)物設(shè)施及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)規(guī)范管理情況，接受本單位一切違反動(dòng)物實(shí)驗(yàn)規(guī)程的舉報(bào)并處罰等，有時(shí)也對(duì)本校研究人員(主要是PI)申報(bào)課題時(shí)標(biāo)書(shū)中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分進(jìn)行合理性規(guī)范性預(yù)審。所以，要在美國(guó)大學(xué)進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，PI必須熟悉三個(gè)人:第一是IACUC主任或執(zhí)行秘書(shū)獲得對(duì)課題及animal protocol有用信息;第二是單位或動(dòng)物中心獸醫(yī)師為你提供技術(shù)幫助;第三是動(dòng)物中心主任，在你獲得批準(zhǔn)后為你安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間和空間等。

筆者相繼在美國(guó) CaseWesternReserve University(CWRU，私立)及 University of Kentucky(UK，公立)大學(xué)進(jìn)行過(guò)小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，根據(jù)本人經(jīng)歷及與美國(guó)IACUC人員探討后認(rèn)為:要在美國(guó)進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，首先是 PI有經(jīng)費(fèi)且其 animal protocol獲準(zhǔn)通過(guò)，隨后就是實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行一系列培訓(xùn)并獲得通過(guò)，最后才能進(jìn)入相應(yīng)的動(dòng)物室進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。本文就PI的animal protocol及強(qiáng)制培訓(xùn)等部分內(nèi)容做簡(jiǎn)單介紹，僅供國(guó)內(nèi)同行參考并歡迎批評(píng)指正。

1 PI的Animal Protocol

Animal Protocol表格可以由學(xué)校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室網(wǎng)頁(yè)上獲得，填好后網(wǎng)上遞交，時(shí)限根據(jù)研究課題一般為2～3年，但每年必須 renewal。主要內(nèi)容包括:(1)Protocol Title:即動(dòng)物實(shí)驗(yàn)名稱，必須與本單位已經(jīng)存在的名稱不同，防止重復(fù)實(shí)驗(yàn)(renewal的除外);(2)PI Contact Record:PI的信息，除了聯(lián)系信息外，還要提供 PI有多長(zhǎng)時(shí)間的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)歷;(3)Funding:經(jīng)費(fèi)來(lái)源情況包括你在學(xué)校的賬號(hào);(4)Synopsis:研究摘要，要求簡(jiǎn)明扼要的寫(xiě)出研究目標(biāo)、主要研究?jī)?nèi)容及研究意義，要求科普化，因?yàn)槿魏蜪ACUC成員中必有一名外行人員，必須讓他們看懂。不允許將研究標(biāo)書(shū)中的摘要復(fù)制過(guò)來(lái)。要強(qiáng)調(diào)你將在動(dòng)物身上做些什么，怎樣有效人道地使用動(dòng)物及保證其福利。(5)Background:研究背景，主要是簡(jiǎn)短介紹本研究的必要性和研究假設(shè)(Hypothesis)形成的主要論據(jù)。Renewal的 protocol還必須包括已經(jīng)取得進(jìn)展。(6)Literature Search:這部分相當(dāng)于查新，要求至少檢測(cè)2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)并在一定范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)查，提供出三個(gè)方面的信息即本研究是否是不必要的重復(fù);是否可以用其他研究方法替代動(dòng)物實(shí)驗(yàn);能否有方法讓實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免受或少受痛苦。(7)Experimental Design:實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，主要介紹課題標(biāo)書(shū)中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)部分，包括怎樣的步驟及何時(shí)來(lái)處理動(dòng)物，對(duì)動(dòng)物怎樣操作。不要敘述研究目的及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量。文字多少依賴于實(shí)驗(yàn)的復(fù)雜程度。(8)Hazardous Agents:生物危害物，主要闡明動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中試劑等是否對(duì)人或動(dòng)物產(chǎn)生危害，如有無(wú)放射性物質(zhì)、有無(wú)重組核酸類物質(zhì)、有無(wú)人類及動(dòng)植物病原體、有無(wú)急性毒物或化學(xué)致癌物及其他有害物。如果有需要分別填寫(xiě)相應(yīng)的等級(jí)表。(9)Species Usage:動(dòng)物種類的使用，這部分要求填寫(xiě)的內(nèi)容很多，包括選哪種脊椎動(dòng)物;動(dòng)物是否通過(guò)公共區(qū)域運(yùn)輸及其運(yùn)輸方式;是否在臨床區(qū)使用動(dòng)物及其組織器官等;種類選擇及使用動(dòng)物數(shù)的依據(jù);動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室具體地點(diǎn)及是否對(duì)動(dòng)物進(jìn)行手術(shù);活體動(dòng)物是否帶離動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室12或24 h，如果是，說(shuō)明理由及措施;對(duì)動(dòng)物有害的試劑或藥物包括麻醉劑的用量等詳細(xì)信息(每種藥物包括麻醉劑或試劑均需分別填寫(xiě));動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能遭受的痛苦及解決方案;動(dòng)物的安樂(lè)死等。(10)Personnel Information:實(shí)驗(yàn)人員信息，包括 PI在內(nèi)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人員詳細(xì)信息，其中要說(shuō)明已有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)歷及本次實(shí)驗(yàn)中任務(wù)等。一份Animal Protocol提交后，經(jīng)過(guò)IACUC的審核，到通過(guò)約需1～3個(gè)月時(shí)間。如果動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人員違反操作規(guī)程被發(fā)現(xiàn)或被人舉報(bào)(網(wǎng)上設(shè)有匿名舉報(bào)免費(fèi)電話)被證實(shí)，將被取消實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資格或趕出大學(xué)，PI的Animal Protocol將被取消。重新申請(qǐng)的審核時(shí)間是6～12個(gè)月。

2 網(wǎng)絡(luò)化的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)培訓(xùn)

當(dāng)一名研究人員如博士后進(jìn)入一所大學(xué)或其他研究機(jī)構(gòu)，辦完必須的手續(xù)獲得 ID后，第一件事就是進(jìn)行生物安全培訓(xùn)，獲得通過(guò)后，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，需要進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的，就必須通過(guò)強(qiáng)制性的網(wǎng)上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物培訓(xùn)和考核(這時(shí)你的電子鑰匙即key將自動(dòng)激活，能夠進(jìn)入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室大門)，最后進(jìn)入動(dòng)物房實(shí)地培訓(xùn)。獲得動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室人員認(rèn)可即可以進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。如果涉及動(dòng)物輻照或特殊危害性處理還需要放射生物學(xué)等培訓(xùn)。

動(dòng)物培訓(xùn)一般分為兩種，一種是僅在本單位培訓(xùn)(CWRU采用)，即本單位動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)頁(yè)上展示的PPT形式的培訓(xùn)內(nèi)容，詳細(xì)介紹了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該遵循的法規(guī)、各種規(guī)范和安全條例等，同一單位不同的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求不同，基本包括基礎(chǔ)訓(xùn)練(如CWRU的 Wolstein Research Building動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的 Wolstein Orientation)，和嚙齒類的 microisolator technique、大動(dòng)物手術(shù)、GLP實(shí)驗(yàn)室的 GLP、P3實(shí)驗(yàn)室的ABSL3等特殊的部分，最后網(wǎng)上考核，考核通過(guò)后，相應(yīng)動(dòng)物中心負(fù)責(zé)人會(huì)通知你去動(dòng)物中心進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)?，F(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)主要是介紹動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的結(jié)構(gòu)，各種安全條例，常規(guī)操作包括一般動(dòng)物操作等。第二種要求更嚴(yán)格(UK采用)，除本單位培訓(xùn)外，還委托美國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)協(xié)會(huì)即 AALAS(American Association of Laboratory Animal Science，為民間組織，提供資質(zhì)認(rèn)證和培訓(xùn)，美國(guó)官方承認(rèn))來(lái)培訓(xùn)。一般由你本人或系秘書(shū)首先向本單位IACUC申請(qǐng)培訓(xùn)，單位 IACUC會(huì)在 AALAS為你申請(qǐng)一個(gè)賬戶(AALAS Learning Library Account)首先進(jìn)行網(wǎng)上培訓(xùn)并考核，AALAS網(wǎng)上培訓(xùn)課程(Animal Care and Use Courses Library)有很多，UK要求的內(nèi)容由兩部分即Euthanasia of Research Animals-AVMAGuidelines及 Workingwiththe IACUC-non VA version，通過(guò)考核(每部分20～25個(gè)選擇題，80分及格)后，獲得2個(gè)證書(shū)及積分。隨后在本單位進(jìn)行 Occupational Health Training考核及填表完成Animal Worker Questionnaire。再等待通知進(jìn)入動(dòng)物室進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)獲得動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資格。

進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)必須嚴(yán)格按照規(guī)則和你自己的Animal protocol進(jìn)行。不得隨意更改如實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，動(dòng)物處理方式、劑量、時(shí)間等。也不得將活的動(dòng)物帶離動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室在自己實(shí)驗(yàn)室放置超過(guò)24 h。一切違法規(guī)則的事均可能被匿名舉報(bào)，IACUC設(shè)有舉報(bào)信箱。查實(shí)后即可能被取消動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資格或?qū)嶒?yàn)室工作資格。Animal protocol也有可能被取消，重新申請(qǐng)需6個(gè)月以上的時(shí)間。所以，一般美國(guó)的PI不輕易進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。不僅價(jià)格昂貴，手續(xù)復(fù)雜，還有被吊銷資格的風(fēng)險(xiǎn)。這些都是IACUC的工作范疇。

我國(guó)的實(shí)驗(yàn)室生物安全包括動(dòng)物實(shí)驗(yàn)安全日益受到重視，我國(guó)各研究單位也設(shè)有類似于美國(guó)IACUC的動(dòng)物試驗(yàn)管理機(jī)構(gòu)，但多數(shù)尤其是落后地區(qū)沒(méi)有很好地開(kāi)展實(shí)質(zhì)性的工作，這于我們的經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平相關(guān)，還可能于我國(guó)有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的法規(guī)不成熟，沒(méi)有具體細(xì)則、可操作性不強(qiáng)等諸多因素有關(guān)。這依賴于廣大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物領(lǐng)域的專家們的進(jìn)一步努力。

致謝:感謝UK的 Xianglin Shi及 Jia Luo教授慷慨提供其 Animal protocol。感謝 UCLA Transgenic Facility主任Meisheng Jiang教授關(guān)于美國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的介紹和討論，感謝CWRU Chengkui Qu教授的指點(diǎn)。

2010-02-24