曹嘉，冉蘭，陳霞

（1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，成都市 610041；2.四川抗菌素工業(yè)研究所，成都市 610052）

鹽酸多奈哌齊（Donepezil hydrochloride）的化學(xué)名為1-芐基-4-[（5，6-二甲氧基-1-茚滿酮）-2-基）甲基]哌啶鹽酸鹽，是治療阿爾茨海默病的第2代膽堿酯酶（AchE）抑制劑，能夠增加大腦乙酰膽堿含量，是治療早、中期老年性癡呆的有效藥物[1，2]。目前各國(guó)藥典中尚未收載該品種的有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)亦尚未見(jiàn)報(bào)道。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文參照鹽酸多奈哌齊原料的有關(guān)物質(zhì)檢查方法[3]，采用高效液相色譜（HPLC）法中常用的不加校正因子的主成分自身對(duì)照法對(duì)鹽酸多奈哌齊片中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)，以對(duì)本品進(jìn)行更有效的內(nèi)在質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

LC-2010C HPLC儀，包括CLASS-VP色譜工作站（日本島津公司）。

鹽酸多奈哌齊原料（重慶桑田藥業(yè)有限公司，批號(hào)：M20071201，含量：99.8%）；鹽酸多奈哌齊標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100650-200301，含量：99.9%）；鹽酸多奈哌齊片（四川大學(xué)華西藥學(xué)院，批號(hào)：081011、081012、081013，規(guī)格：每片5 mg）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：AlltimaTMC18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：0.01 mol·L－1磷酸氫二鉀溶液（含3%三乙胺，用磷酸調(diào)pH至4.3）-甲醇（60∶40）；檢測(cè)波長(zhǎng)：271 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL·min－1；進(jìn)樣量：20 μL；以鹽酸多奈哌齊峰計(jì)算，色譜柱的理論塔板數(shù)為6600，各峰與其相鄰峰的分離度均符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備。取本品10片，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于鹽酸多奈哌齊10 mg），置于10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對(duì)照溶液的制備。精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備。精密稱(chēng)取鹽酸多奈哌齊標(biāo)準(zhǔn)品100 mg，置于10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度；精密量取該溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備。按比例量稱(chēng)取不含鹽酸多奈哌齊的空白輔料適量，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

精密稱(chēng)取鹽酸多奈哌齊標(biāo)準(zhǔn)品適量，用流動(dòng)相溶解制成每1 mL中含鹽酸多奈哌齊約20μg的溶液；按比例量稱(chēng)取不含鹽酸多奈哌齊的空白輔料適量，同法制得空白輔料溶液。分別于200～400 nm波長(zhǎng)內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果，鹽酸多奈哌齊分別在230、271、315 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而空白輔料在271、315 nm波長(zhǎng)處無(wú)吸收。通過(guò)HPLC試驗(yàn)進(jìn)一步可知，采用271 nm波長(zhǎng)進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)時(shí)能檢測(cè)到較多雜質(zhì)峰，在315 nm波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定時(shí)雜質(zhì)峰數(shù)目減少。故采用271 nm作為本品有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

2.4.1 輔料干擾考察。照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密量取陰性樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜，見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.陰性樣品；B.標(biāo)準(zhǔn)品；C.供試品；1.鹽酸多奈哌齊Fig 1 HPLC chromatogramA.negative sample；B.standard sample；C.test sample；1.donepezil hydrochloride

由圖1可知，原料雜質(zhì)峰、輔料峰、主成分峰均能完全分離，輔料無(wú)干擾。

2.4.2 降解物干擾考察。精密量取供試品溶液5 mL 3份，分別進(jìn)行以下試驗(yàn)：加1 mol·L－1鹽酸溶液10 mL，在80℃水浴中加熱1 h；加1 mol·L－1氫氧化鈉溶液4 mL，搖勻，常溫下放置5 min；加30%過(guò)氧化氫溶液1 mL，在60℃水浴中加熱10 min。另取本品10片2份，精密稱(chēng)定，分別進(jìn)行以下試驗(yàn)：置于白熾光（4500照度）下照射7 d；置于130℃烘箱中加熱1 h。將上述破壞后樣品分別制成每1 mL中約含1 mg鹽酸多奈哌齊的降解溶液，照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密量取上述降解溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜。結(jié)果破壞試驗(yàn)產(chǎn)生的降解產(chǎn)物峰均能與主成分峰完全分離。

2.5 檢測(cè)限考察

取供試品溶液用流動(dòng)相稀釋成系列濃度，進(jìn)樣，當(dāng)信噪比為3時(shí)進(jìn)樣量即為最低檢測(cè)限。測(cè)得最低檢測(cè)限為0.05 ng（S/N＝3）。

2.6 耐用性試驗(yàn)

在“2.1”項(xiàng)色譜條件的基礎(chǔ)上，對(duì)流動(dòng)相的組成、柱溫、流速、同類(lèi)型不同品牌的色譜柱等進(jìn)行耐用性考察，其中流動(dòng)相比例分別為磷酸氫二鉀溶液-甲醇（60∶40）、磷酸氫二鉀溶液-甲醇（59∶41）、磷酸氫二鉀溶液-甲醇（61∶39）；柱溫分別為30 ℃、35 ℃、40 ℃；流速分別為0.9、1.0、1.1 mL·min－1；pH值分別為4.30、4.32、4.34；色譜柱分別為AlltimaTMC18（250 mm×4.6 mm，5μm）、資生堂 ODS柱（250 mm×4.6 mm，5μm）。結(jié)果，當(dāng)系統(tǒng)條件發(fā)生微小變化時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響，各色譜峰之間均能達(dá)到有效的分離。說(shuō)明本法的耐用性良好，符合測(cè)定要求。

2.7 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，精密量取對(duì)照溶液20 μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的25%；再精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜至主成分峰保留時(shí)間的2.5倍。供試品溶液的色譜中如顯雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1/2（0.5%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（1.0%）。3批樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 3批樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果Tab 1 Determination of related substance in 3 batches of samples

3 討論

在進(jìn)行色譜條件篩選時(shí)，曾使用不同品牌的150 mm C18色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)多次調(diào)整均不能到達(dá)有效分離的要求，最終確定使用250 mm C18柱。

在進(jìn)行色譜條件優(yōu)化時(shí)，發(fā)現(xiàn)主峰拖尾較為嚴(yán)重，后來(lái)加入適量三乙胺，可以改善主峰峰形。

破壞試驗(yàn)結(jié)果表明，本品對(duì)光、強(qiáng)酸、熱等因素較穩(wěn)定，而對(duì)堿、氧化等因素較敏感。

綜上所述，本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高，可用于該制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)。

[1]Ihara M，Ohxishi A，Tomono Y，et al.Pharmacokinetics of E2020，a new compound for Alzheimer’s disease，in healthy male volunteers[J].Int J Clin Pharm Ther Toxi，1993，31（5）：223.

[2]OhnishiA，MiharaM，Kamakura H，et al.Comparison of the pharmacokinetics of E2020，a new compound for Alzheimer’s disease，in healthy young and elderly subjects[J].J Clin Pharmacol，1993，33（11）：1086.

[3]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].WS1-（X-140）-2004Z.