陸 毅

(長春市人民醫(yī)院普外科,吉林 長春 130051)

在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中,原癌基因的激活和(或)抑癌基因的失活起著重要作用,結(jié)腸癌的發(fā)生和演變過程同樣伴隨著多種分子事件的發(fā)生〔1〕。原癌基因 C-myc可以使細(xì)胞無限增殖,獲得永生,并能促進細(xì)胞的分裂,與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)〔2,3〕。而 P16基因作為一個重要的腫瘤抑制基因,直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控,負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分裂。本研究檢測 60例結(jié)腸癌患者的 C-myc基因和P16基因的表達(dá)情況,并探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集 2003年 3月至 2007年 9月我科行結(jié)腸癌根治術(shù)的結(jié)腸癌標(biāo)本 60例,其中男 45例,女 15例,年齡35～86(平均 67)歲。全部病例均由組織學(xué)病理確診,術(shù)前均未行放療及化療。原發(fā)灶組織學(xué)分級:中高度分化 45例,低分化 15例。腫瘤分期:Ⅰ期 5例,Ⅱ期 12例,Ⅲ期 25例,Ⅳ期 18例。轉(zhuǎn)移情況:淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 35例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 25例。選擇 40例距腫瘤邊緣 ＞5 cm、病理組織檢查為正常的癌旁組織為對照組。

1.2 試劑與方法 C-myc基因及 P16基因單克隆抗體和免疫組化(SABC法)試劑盒均購自美國 California Biotech Inc公司。免疫組化方法按試劑盒說明書操作。PBS代替第一抗體作為陰性對照,已知肝癌組織作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)呈明顯棕黃色反應(yīng)即為陽性。陽性細(xì)胞計數(shù):每個標(biāo)本切片選取 5個高倍視野(400倍)作陽性細(xì)胞計數(shù);以超過 10%細(xì)胞呈清晰棕褐色為陽性(+),超過 50%細(xì)胞呈清晰棕褐色為強陽性(?),低于10%表達(dá)或細(xì)胞無棕黃色染色為陰性(-)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)用率或百分比表示,采用SPSS11.5進行統(tǒng)計學(xué)處理,組間比較用χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 結(jié)腸癌組織中 C-myc基因和 P16基因的表達(dá) C-myc基因在結(jié)腸癌組織中的表達(dá) 40例(66.7%),明顯高于癌旁組織12例(30.0%)(P＜0.05);P16基因則在癌旁組織中表達(dá) 32例(80.0%)明顯高于結(jié)腸癌組織 24例(40.0%)(P＜0.05)。

2.2 C-myc基因和P16基因表達(dá)與結(jié)腸癌臨床特征的關(guān)系見表 1。C-myc、P16基因的表達(dá)與結(jié)腸癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期密切相關(guān)(P＜0.05);與年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)類型和分化程度無關(guān)(P＞0.05)。

表1 C-myc基因和 P16基因表達(dá)與結(jié)腸癌臨床特征的關(guān)系

3 討 論

C-myc可以在多種腫瘤組織中存在,作為一種轉(zhuǎn)錄因子,是正常細(xì)胞生長和增殖所必需的。它影響基因表達(dá)的能力是其促進腫瘤發(fā)育的手段,同時它也可以通過影響DNA的復(fù)制而影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。本研究顯示 C-myc基因在結(jié)腸癌組織中高度表達(dá),癌旁組織中的表達(dá)明顯下降;C-myc基因的表達(dá)與結(jié)腸癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期密切相關(guān),與年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)類型和分化程度無關(guān)。這提示 C-myc基因的表達(dá)增強與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系,同時可以作為判斷結(jié)腸癌有否轉(zhuǎn)移的指標(biāo)之一。

正常情況下抑癌基因產(chǎn)物可以抑制細(xì)胞增殖,促進細(xì)胞分化和抑制細(xì)胞遷移〔4,5〕。當(dāng)人體收到大多數(shù)的環(huán)境致病因素如飲食、病毒、化學(xué)物質(zhì)、射線等致癌因素的影響后,P16基因的抑癌作用減弱,則可引發(fā)腫瘤。本研究結(jié)果顯示,P16基因在結(jié)腸癌組織中表達(dá)的陽性率明顯低于癌旁組織,說明結(jié)腸癌與癌旁組織在 P16蛋白表達(dá)水平上存在差異。另外 P16陽性率與 TNM分期也存在一定的相關(guān)性,這與文獻報道一致〔6〕。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 P16陽性率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,提示P16異常在結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移過程中可能起著不可忽視的作用。本實驗還發(fā)現(xiàn)癌組織浸潤深度越深P16表達(dá)陽性率越低,說明 P16蛋白的表達(dá)與癌組織浸潤深度可能有相關(guān)性。

結(jié)腸癌的惡性轉(zhuǎn)化是由一系列細(xì)胞周期調(diào)控蛋白基因的遺傳性改變引起的,聯(lián)合檢查C-myc與 P16基因表達(dá)對預(yù)測結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、評價預(yù)后具有指導(dǎo)價值。

1 Calvert PM,Frucht H.The genetics of colorectal cancer〔J〕.Ann Intern Med,2002;137(7):603-12.

2 Jonas JC,Laybutt DR,Steil GM,et al.High glucose stimulates early response gene c-myc expression in rat pancreatic beta cells〔J〕.J Biol Chem,2001;276(38):35375-81.

3 Fields WR,Desiderio JG,Putnam KP,et al.Quantification of changes in c-myc mRNA levels in normal human bronchial epithelial(NHBE)and lung adenocarcinoma(A549)cells following chemical treatment〔J〕.Toxicol Sci,2001;63(1):107-14.

4 Kamb A,Gruis NA,Weaver-Fdldhaus J,et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types〔J〕.Science,1994:264-436.

5 Nobefi T,Miura K,Wu DH,et al.Deletion of the cyclin dependent kinase inhibitor gene in multiple human cancers〔J〕.Nature,1994;368:763.

6 Andres A,Maria J.Double versus single renal allografts from aged donors〔J〕.Transplatation,2000;69:2060.