熊燦瓊，吳 娟

（貴州省畢節(jié)地區(qū)藥品檢驗所，貴州 畢節(jié) 551700）

消咳寧片由鹽酸麻黃堿、甘草浸膏、苦杏仁、石膏、碳酸鈣組成，具有止咳祛痰的作用，用于感冒、咳嗽、氣管炎、支氣管哮喘等，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鹽酸麻黃堿的含量采用非水滴定法測定[1-2]，余下組分采用一般的理化鑒別。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用薄層色譜（TLC）法鑒別消咳寧片中甘草浸膏和苦杏仁，高效液相色譜（HPLC）法測定其鹽酸麻黃堿的含量，建立了可靠、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

LC-10ATvp型高效液相色譜儀（島津），SPD-10Avp型檢測器。甘草對照藥材，甘草酸銨、苦杏仁苷、鹽酸麻黃堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為904-8801，110731-200511，110820-200403，171241-200303）；消咳寧片（市售品，批號分別為 060219，20070202，070301.025）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

苦杏仁：取樣品15片的細(xì)粉，加乙醚50 mL，加熱回流1 h，棄去乙醚液，藥渣用25 mL乙醚洗滌后揮干，加甲醇30 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液；按處方取不含苦杏仁的余下藥材同法制備陰性對照品溶液；另取苦杏仁苷對照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照TLC法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）5～10℃放置12 h的下層溶液為展開劑，展開，取出，立即噴以磷鉬酸硫酸溶液，在105℃烘約4 min。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾（見圖1 A）。

甘草浸膏：取苦杏仁鑒別項下的供試品溶液蒸干，殘渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，蒸干，殘渣加甲醇3 mL使溶解，作為供試品溶液；按處方取不含甘草浸膏的藥材成分同法制備陰性對照品溶液；另取甘草對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液；再取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照TLC法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗，吸取上述4種溶液各2 μL，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘約4 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾（見圖1 B）。

圖1 薄層色譜圖

2.2 鹽酸麻黃堿含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Diamonsil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -0.1%磷酸（9 ∶88）；檢測波長：207 nm；進(jìn)樣量：20 μL。在此條件下，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算不低于3 000，分離度為4.9，色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取減壓干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對照品0.018 12 g，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲40 min使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液，精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密稱取樣品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于1/4片的細(xì)粉），置25 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲40 min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2 mL置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例量取不含鹽酸麻黃堿的陰性對照品，按上述方法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品貯備液（181.2 μg/mL）1，2，3，4，5 mL，分別置50 mL量瓶中，精密吸取20 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度（X）對峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=2.230 8 ×104X-4 892.1 ×103，r=0.999 8（n=5）。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度在3.624～18.120 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，分別于0，1，3，4，6 h時測定。結(jié)果峰面積的 RSD=1.9%（n=5），表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD=1.0%（n=5），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗：取同一批（批號為060219）樣品6份，按供試品溶液制備方法制備并按上述色譜條件測定。結(jié)果平均含量9.6 mg/粒，RSD=1.86%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品（批號為060219，含量 9.6 mg/粒）9份，每份約 0.016 g，精密加入對照品貯備液（181.2 μg/mL）5，8，10 mL 各 3 份，按供試品溶液的制備方法制備溶液并依法測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

2.2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按上述方法制備溶液并依法測定，再以原標(biāo)準(zhǔn)方法測定其含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

經(jīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[3-6]，消咳寧片中鹽酸麻黃堿為直接投料，曾采用0.1 mol/L鹽酸溶液超聲提取、甲醇超聲直接提取及加熱回流3種方法制備供試品溶液，并分別測其含量，結(jié)果相差不算大，但甲醇直接超聲提取方法最簡單，故采用甲醇直接超聲提取。在乙腈-0.1%磷酸溶液比例為9∶88時，出峰時間約為6 min，峰形較好，且該檢測條件下分離較好。本文增加兩個主要成分的薄層色譜鑒別，使方法專屬性更強(qiáng)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：140，59，244.

[2]WS-10001-（HD-1343）-2003，化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3]WS3-B-2362-97，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].

[4]張立峰，趙國強(qiáng)，劉燦仿，等.HPLC法測定小兒咳喘靈顆粒中鹽酸麻黃堿的含量[J]. 中國藥師，2008，97（2）：209.

[5]劉艷麗，宋雪峰，郭迎霞，等.HPLC法測定腰腿痛丸中鹽酸麻黃堿的含量[J]. 中國藥師，2008，100（5）：599.

[6]田 靜，許亞林，陶 金，等.HPLC法測定小兒化痰止咳沖劑中鹽酸麻黃堿的含量[J]. 中國藥事，2006，20（1）：53-54.