肖 莉，吳 紅，李國良，孫 瑜，熊 莉，唐 綺

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

195 5 年Layrisse等在委內(nèi)瑞拉的1例新生兒溶血病患兒母親血清中發(fā)現(xiàn)抗Dia，12年后，Thompson發(fā)現(xiàn)了對偶的抗Dib[1]，Dia和Dib都能引起輸血反應(yīng)與新生兒溶血病[1]。本研究采用序列特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)技術(shù)，隨機檢測江西漢族獻血者Diego血型的Dia和Dib基因分型，取得了相應(yīng)基因頻率資料，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 DNA樣本 受檢樣品取自江西地區(qū)漢族隨機無償獻血者200名。ACD抗凝全血300μl，使用美國TBG公司試劑盒抽提基因組 DNA，DNA濃度在60ng/μl左右，分離純化的DNA于-20℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 Dia和Dib抗原基因分型 采用PCR-SSP技術(shù)特異性擴增基因片段，試劑盒由美國GT公司提供，分別鑒定Dia和Dib基因，基因分型特異性引物PCR反應(yīng)內(nèi)對照引物的順序見表1。

表1 分型特異性引物及內(nèi)對照引物順序

1.3 擴增條件 95℃ 5min；95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 90s 循環(huán)30次，72℃5min，擴增產(chǎn)物直接點樣于2%的瓊脂糖凝膠電泳，使用0.5×TBE緩沖液，以10V/cm 20min，凝膠成像分析儀記錄拍照結(jié)果，每管設(shè)有內(nèi)對照引物，產(chǎn)生429bp的產(chǎn)物，用于監(jiān)測PCR反應(yīng)是否正常。特異性擴增產(chǎn)物為139bp和129bp，根據(jù)是否產(chǎn)生特異性擴增產(chǎn)物指定相應(yīng)基因型。

1.4 統(tǒng)計分析 Hardy-Weinberg平衡驗證采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

共檢測200例，查出2種基因表現(xiàn)型，分別為Dia-b+196例，和 Dia+b+4 例，Dia+b-及 Dia-b-未檢測出，Dia基因頻率 0.01，Dib基因頻率0.99。χ2檢驗觀察值與期望值無顯著差異(P＞0.05，見表2)，符合Hardy-Weinberg分布。

表2 江西地區(qū)人群Diego血型系統(tǒng)分布

2 討論

Diego血型系統(tǒng)的抗Dia和Dib抗原均能引起輸血反應(yīng)與新生兒溶血病[1]，兩種抗原相比較，抗Dia有很強的表達，可以引起新生兒溶血病，而抗Dib比較少見。因此在輸血反應(yīng)原因分析時應(yīng)考慮到Diego血型系統(tǒng)的不配合性。

本次調(diào)查Diego血型系統(tǒng)在江西地區(qū)分布結(jié)果表明，Diego血型表現(xiàn)型為Dia-b+196例，和Dia+b+4例，Dia+b-及Dia-b-未檢測出，Dia基因頻率0.01，Dib基因頻率0.99，與國內(nèi)文獻[2]報道相符。Dia+b-及Dia-b-未檢測出可能與我們此次檢測標本量有關(guān)，亦可能是本地區(qū)不存在這兩種表現(xiàn)型，有待今后做進一步的驗證。

[1]劉達莊.免疫血液學(xué)[M].上海科技出版社,2002:81-82.

[2]劉孟黎.Diego血型基因在西安地區(qū)漢族人群中的頻率分布[J].西安交通大學(xué)學(xué)報,2003,24(4):348-349.