王 健,鄭春梅,曹 霞,黃雪蘭,楊 欣

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院物理診斷科,黑龍江 佳木斯 154003)

卵巢惡性腫瘤發(fā)病隱匿的特點(diǎn)使許多患者就診時(shí)已處于晚期,因此,高敏感性、高特異性的診斷手段是早期診斷卵巢癌的關(guān)鍵。我們應(yīng)用彩色多普勒超聲診斷技術(shù)檢查了42例卵巢腫瘤的患者,觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)特征和血流供應(yīng)特點(diǎn)。應(yīng)用免疫組化法對(duì)手術(shù)切除的12例卵巢良性腫瘤和30例卵巢漿液性囊腺癌標(biāo)本檢測(cè)其組織中 COX-2表達(dá),探討彩色多普勒血流顯像應(yīng)用的血管病理學(xué)基礎(chǔ),卵巢癌的微血管密度 (microvessel density,MV D)與 COX-2在卵巢癌中的表達(dá)的相關(guān)性研究,評(píng)價(jià)其應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

回顧性分析佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院 2008—06～2009— 07手術(shù)切除的卵巢腫瘤組織標(biāo)本 42例,30例卵巢漿液性囊腺癌,卵巢良性腫瘤12例,(其中2例良性畸胎瘤、5例漿液性囊腺瘤及 5例卵巢纖維瘤)。所有患者術(shù)前均未接受任何治療,患者年齡 28～ 75歲,平均 (53.26±13.33)歲。所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定,石蠟包埋,連續(xù)5μm切片。

1.2 研究方法

使用 ATL-HDI3500GE LOGIQ9、腹部探頭頻率3.5MHz;陰道探頭頻率5/7.5M Hz,觀察卵巢腫瘤患者病灶的特征和腫瘤血供情況并記錄 ,并3次提取 RI值,取平均值。

1.3 主要試劑

兔抗人 COX-2單克隆抗體、SP試劑盒、濃縮型 DAB酶底物顯色試劑盒和 EDT A抗原修復(fù)液及鼠抗人 CD34單克隆抗體工作液由福州邁新技術(shù)開(kāi)發(fā)公司提供。

1.4 免疫組化染色

全部標(biāo)本均經(jīng)10%的福爾馬林液固定,石蠟包埋切片。COX-2和 CD34免疫組織化學(xué)染色按 SP染色試劑盒(福州邁新公司)說(shuō)明操作,所購(gòu)抗體均為即用型抗體,染色時(shí)均需用 EDTA抗原修復(fù)液進(jìn)行微波修復(fù)抗原。切片加一抗前胃蛋白酶37℃消化 1h,采用已知的陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照,PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,每一批實(shí)驗(yàn)均設(shè)有陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。

1.5 結(jié)果判定

組織 COX-2表達(dá)程度的判斷標(biāo)準(zhǔn):以胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒視為 COX-2表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞;取 5個(gè)高倍視野,每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,組織中 COX-2表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞百分率＜5%則視為組織 COX-2表達(dá)陰性(-),依此類(lèi)推,5%～25%為弱陽(yáng)性(+),25%～ 50%為中等強(qiáng)度陽(yáng)性(++),＞ 50%以上為強(qiáng)陽(yáng)(+++)。MVD定量方法:按 Weider[1]推薦的方法,首先在低倍鏡下掃查整個(gè)切片,以染成棕黃色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇作為一個(gè)血管計(jì)數(shù),尋找微血管密度最高的腫瘤區(qū)域,然后在高倍光鏡下,隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)視野內(nèi)微血管數(shù),取平均值。MVD結(jié)果用± s)表示。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)各組間差異進(jìn)行方差分析和兩變量間相關(guān)分析。P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組觀察指標(biāo)比較

①卵巢漿液性囊腺癌的血流頻譜呈低阻特征 RI(0.32±0.10),良性腫瘤的血流頻譜呈高阻特征 RI(0.61±0.12),兩組比較差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。② COX-2在良惡性腫瘤表達(dá)進(jìn)行比較,COX-2在卵巢漿液性囊腺癌的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于良性腫瘤組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。③卵巢良惡性腫瘤 MVD之間比較差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。各組觀察指標(biāo)比較見(jiàn)表1。

2.2 免疫組化檢測(cè)結(jié)果分析

卵巢漿液性囊腺癌 MVD于 COX-2有相關(guān)性(r= 0.490,P＜0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。卵巢漿液性囊腺癌MVD及 COX-2的表達(dá)分別見(jiàn)圖1及圖2。

表1 卵巢漿液性囊腺癌與良性腫瘤觀察指標(biāo)比較(±s)

表1 卵巢漿液性囊腺癌與良性腫瘤觀察指標(biāo)比較(±s)

與卵巢漿液性囊腺癌組比較*P ＜0.05,△P＜0.01,有差異。

觀察指標(biāo) 卵巢漿液性囊腺癌組 良性腫瘤組COX-2 (++ )～ (+++ ) (一)～ (+ )*RI 0.32± 0.100.61± 0.12*MVD 38.73± 9.2014.33± 5.90△

圖1 在卵巢漿液性囊腺癌微血管的染色(×400)

圖2 COX-2在卵巢漿液性囊腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)(×400)

3 討論

MVD作為腫瘤血管形成的指標(biāo),是目前常用的評(píng)價(jià)腫瘤血管生成情況的方法。腫瘤的生長(zhǎng)與擴(kuò)散取決于血管生成,癌腫因生長(zhǎng)迅速、代謝旺盛,需要充足的血流和能量供應(yīng),當(dāng)腫瘤長(zhǎng)到3mm時(shí),進(jìn)一步生長(zhǎng)需要新的血管生成,血管生成使腫瘤得以獲得足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而持續(xù)生長(zhǎng),如果沒(méi)有血管生成,腫瘤的生長(zhǎng)將受到限制,原發(fā)性腫瘤一般 ＜1～2mm[2]。新生的血管不僅向腫瘤提供充足的營(yíng)養(yǎng),導(dǎo)致腫瘤的惡性生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移,腫瘤生長(zhǎng)階段血管期的開(kāi)始標(biāo)志著腫瘤開(kāi)始快速生長(zhǎng)、局部浸潤(rùn),最后導(dǎo)致轉(zhuǎn)移的發(fā)生[3]。本研究結(jié)果表明良惡性腫瘤的生物學(xué)基礎(chǔ)不同,這為研究良惡性腫瘤提供了理論依據(jù)。還發(fā)現(xiàn)卵巢漿液性囊腺癌的 MVD(38.73± 9.20)明顯高于卵巢良性腫瘤的 MVD(14.33±5.90)(P＜0.01),有著明顯差異,但是 MV D的測(cè)定只能在術(shù)后病理組織檢測(cè),不能術(shù)前觀察腫瘤的血管生成情況,因此彩色多普勒血流顯像對(duì)卵巢腫瘤術(shù)前檢測(cè)與術(shù)后 MVD檢測(cè)兩者相結(jié)合,為臨床術(shù)式預(yù)案、判斷惡性程度以及抗血管生成治療方面提供更多有價(jià)值的信息。環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase2,COX-2)是花生四烯酸轉(zhuǎn)化成前列腺素過(guò)程中重要的限速酶,Li等[4]發(fā)現(xiàn) COX-2在轉(zhuǎn)移癌中比正常卵巢組織和原位癌中表達(dá)更高,而且 COX-2在腫瘤侵襲的周?chē)托碌霓D(zhuǎn)移灶中更易被發(fā)現(xiàn),提示 COX-2可能有促進(jìn)卵巢癌轉(zhuǎn)移的作用。本研究發(fā)現(xiàn) COX-2在卵巢漿液性囊腺癌中的表達(dá)明顯高于卵巢良性腫瘤 (P＜0.01),在不同組織分級(jí)的卵巢腫瘤組織中,COX-2陽(yáng)性表達(dá)率不同,隨著腫瘤的浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生,COX-2陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高,說(shuō)明 COX-2是在卵巢漿液性囊腺癌的生長(zhǎng)過(guò)程中有著重要的地位,也表明了 COX-2的陽(yáng)性表達(dá)率的升高可能與卵巢癌變和腫瘤發(fā)展密切相關(guān)。有浸潤(rùn)或腫瘤向外生長(zhǎng)時(shí),腫塊輪廓不清,邊緣不整齊,惡性腫瘤可能是自病變中央開(kāi)始新生血管形成的,且新生血管常缺乏平滑肌成分,導(dǎo)致這些血管內(nèi)血流的低阻力[5],彩色血流在腫瘤的光帶分隔或不規(guī)則突起上可見(jiàn)血流信號(hào)分布。本研究發(fā)現(xiàn)卵巢良性腫瘤血流阻力指標(biāo) RI明顯高于卵巢漿液性囊腺癌,其中有‘乳頭樣’的結(jié)構(gòu)的 RI值明顯減低,我們可以認(rèn)為,乳頭生成可作為惡性程度的危險(xiǎn)因素之一,而 RI作為獨(dú)立預(yù)測(cè)良惡性腫瘤的指標(biāo)具有一定的可靠性及可信度。綜上表明彩色多普勒應(yīng)用于卵巢腫瘤的診斷,可以無(wú)創(chuàng)、重復(fù)地檢測(cè)卵巢腫瘤新生血管,評(píng)價(jià)腫瘤血管的特征,與術(shù)后病理相對(duì)照,更細(xì)致地了解其組織病理學(xué)基礎(chǔ),為鑒別腫塊的良惡性及有效地預(yù)測(cè)病情的發(fā)展起著極其重要的作用。

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