胡 嘯，陳 東

（長沙市第一醫(yī)院，湖南長沙 410005）

大腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，肺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素共同參與的多階段復雜生物學過程，與細胞增殖和凋亡之間的動態(tài)失衡相關。細胞周期中任何一個調控環(huán)節(jié)的失控都可導致細胞增殖的異常，細胞的惡性增殖失調導致腫瘤的發(fā)生。微小染色體維持蛋白(minichro-mosome maintenance proteins，MCM)參與了DNA復制起始的調控。MCM5是MCM家族成員之一，近年國外已有研究表明其可作為不典型增生和腫瘤的生物學標記物[1]。本研究采用SP方法檢測MCM5蛋白在大腸癌組織中的表達，并分析其與臨床病理特征的關系，為大腸癌的治療策略選擇及預后評估提供初步資料。

1 材料與方法

1.1 標本

全部60例大腸癌組織標本均取自2003年1月～2006年6月長沙市第一醫(yī)院外科手術切除的大腸癌組織，所有大腸癌標本均經(jīng)過臨床和病理確診，取材前未經(jīng)過放化療治療。另同期收集臨床擬診腸易激綜合征，在內(nèi)窺鏡下取自患者大腸粘膜活檢組織標本31例，31例均經(jīng)組織病理學確認為正常組織或輕度炎癥。

1.2 試劑

MCM5小鼠抗人單克隆抗體及S-P組化試劑盒購自于福州邁新生物技術公司。

1.3 方法

用S-P免疫組化染色，將石蠟切片脫蠟，梯度酒精脫水至水化。高溫高壓組織抗原修復DAB顯色，蘇木素復染，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.4 結果判定

以PBS液代替一抗作為陰性對照，用已知陽性的組織切片作為陽性對照。MCM5表達為胞核棕黃色染色。陽性細胞數(shù)大于10%為陽性病例，小于10%為陰性病例。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用χ2檢驗，F(xiàn)isher確切概率法，數(shù)據(jù)應用SPSS 13.0軟件處理。

2 結果

2.1 MCM 5在組織中的表達情況

MCM5陽性為胞核的棕黃性染色，大腸癌細胞中可以見到明顯的陽性表達，占63.3%(38/60)，正常大腸組織僅發(fā)現(xiàn)1例MCM5表達，差異具有顯著性(P＜0.05)，結果見表 1。

表1 不同組織中MCM 5的表達情況

2.2 Dukes分期與MCM 5的關系

Dukes各期大腸癌的MCM5陽性表達差異具有顯著性 (P＜0.05)，其中D期癌組織表達高達75.0%(11/16)，結果見表 2。

表2 Dukes分期與MCM 5的關系

2.3 淋巴結轉移與MCM 5的關系

由表3可見，伴有淋巴結轉移的大腸癌組織中有75.0%(21/28)顯示了MCM5陽性，無淋巴結轉移的大腸癌組織中有53.1%(17/32)陽性，差異具有顯著性(P＜0.05)。

表3 淋巴轉移與MCM 5的關系

2.4 組織學分型與MCM5的關系

低度惡性的大腸癌組織中有55.5%(25/45)顯示了MCM5陽性，而高度惡性的癌組織中有86.7%(13/15)陽性，差異具有顯著性(P＜0.05）(表 4)。

表4 組織學分型與MCM 5的關系

3 討論

細胞周期調控異常是腫瘤發(fā)生的內(nèi)在原因，在細胞周期中，G1/S的調控點是細胞內(nèi)外信號經(jīng)過傳遞、整合到細胞核，對細胞的增殖進行調控的關鍵點，它的異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切[2]。細胞增殖調控異常與腫瘤的發(fā)生關系密切,而腫瘤細胞增殖活性與腫瘤生物學行為更是密切相關，是用于反映腫瘤良惡性及惡性程度的重要指征。MCM蛋白與細胞周期密切相關,是啟動真核細胞DNA復制、調控細胞由G1期進入S期的關鍵蛋白，其本質是一種核蛋白復合物，目前發(fā)現(xiàn)MCM2～7等6種,它們是一組在序列上高度同源、功能上密切相關的蛋白，在靜止/分化細胞中MCM蛋白不表達，而在增殖/腫瘤細胞中高表達，是近年來發(fā)現(xiàn)的一種較好地反映細胞增殖活性的新指標。大量研究表明[3,4]，MCM蛋白能夠敏感而特異地反映細胞增殖的狀況，是較Ki-67更為可靠的細胞增殖指標,在判斷腫瘤的惡性度及評估預后方面有著較重要的意義。MCM5是MCM蛋白復合物之一，是一種與細胞增殖密切相關的因子，它的檢測可直接反映MCM蛋白的表達水平[5]。Sirieix等[6]檢測食管標本發(fā)現(xiàn)MCM5在食管癌中呈強陽性表達，而在大多數(shù)正常食管黏膜中為陰性，提示了MCM5能較好地反映腫瘤細胞的增殖特性，對腫瘤的診斷有一定意義。

本研究結果顯示，MCM5與大腸癌的Dukes分期、淋巴結轉移、組織分型相關，且存在線性趨勢，即大腸癌組織中的MCM5表達水平隨著淋巴結轉移、分化程度的惡化、Dukes分期增加也增加。提示檢測大腸癌組織MCM5可能是區(qū)分不同病理分級、分期的有價值的分子標志物，對治療選擇及預后評估有參考意義。但有待于后繼更大樣本驗證之。

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