王 佳 謝 健 陳岳明

血管緊張素原基因M235T多態(tài)性和抑郁癥的關(guān)聯(lián)分析

王 佳 謝 健 陳岳明

抑郁癥的病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今尚未明確。在腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS）中，文獻(xiàn)［1］報(bào)道血管緊張素原(ATG）M235T基因多態(tài)性和抑郁癥無明顯相關(guān)?；蚨鄳B(tài)性因種族不同而會產(chǎn)生明顯差異。本研究采用病例-對照研究來探討中國漢族人ATG基因M235T多態(tài)性和抑郁癥是否關(guān)聯(lián)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

1.1.1 患者組 共150例，為杭州市第一人民醫(yī)院、浙江省立同德醫(yī)院、湖州市第三人民醫(yī)院2008年12月-2009年10月門診及住院患者。入組標(biāo)準(zhǔn)：①符合美國精神疾病診斷與統(tǒng)計(jì)手冊第4版抑郁發(fā)作的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②漢密爾頓抑郁量表(24項(xiàng)）評分≥21分；③無其他精神疾病、無神經(jīng)系統(tǒng)和軀體疾病。150例患者中男性64例，女性86例，年齡(37±12）歲，病程1～5年。

1.1.2 對照組 選擇和患者年齡、性別相當(dāng)?shù)慕】刁w檢者共180名，無精神疾病家族史且均排除精神、神經(jīng)疾病及其他重大軀體疾病。180名對照中男性75名，女性105名，年齡(36±13）歲。

兩組性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05）。研究對象均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 基因組DNA提取 抽取患者和健康體檢者外周靜脈血各2 ml，用EDTA-K3抗凝，用于提取基因組DNA。采用全血基因組DNA提取試劑盒(北京天根生物技術(shù)有限公司）進(jìn)行操作，提取后-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 ATG基因M235T多態(tài)性檢測 采用PCR-RFLP法［2］。

PCR擴(kuò)增引物按如下序列合成。正向：5'-GAT GCG CAC AAG GTC CTG TC-3'，反向：5'-GGT GCT GTC CAC ACT GGA CCC C-3'(上海生物工程有限公司合成）。PCR擴(kuò)增體系共25 μl(試劑購于TaKaRa生物工程有限公司）：滅菌去離子水18.75 μl，10×PCR緩沖液2.5 μl，dNTP混合物(2.5mM）2 μl，上、下游引物(50 nM）各0.25 μl，基因組DNA 1.0 μl(含量200～500 ng），TaqDNA聚合酶(5U/μl）0.25 μl。PCR擴(kuò)增條件：95℃3 min；94℃45 s，71℃30 s，72℃45 s，40個循環(huán)；72℃10 min。擴(kuò)增片段長度預(yù)期303 bp。取5 μl擴(kuò)增產(chǎn)物在含溴化乙錠(EB）的2%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，通過凝膠成像儀觀察結(jié)果。

取PCR產(chǎn)物15 μl，加2 μl酶切緩沖液，用10 U限制性內(nèi)切酶PsyⅠ(購于TaKaRa生物工程有限公司）37℃消化過夜。終止反應(yīng)后，產(chǎn)物經(jīng)含EB的5%瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像儀下判斷結(jié)果。根據(jù)酶切產(chǎn)生片段情況，基因型有3種：MM(303 bp）、TT(279 bp和24 bp）和MT(303 bp，279 bp和24 bp）。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

Hardy–Weinberg平衡吻合度采用卡方檢驗(yàn)?；颊呓M和對照組間性別、年齡以及基因型和等位基因頻率比較采用2×2表χ2檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均以α=0.05為水準(zhǔn)進(jìn)行雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

AGT基因M235T基因型和等位基因頻率在兩組中的分布情況見表1，其分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.146，P＞0.05）?；蛐秃偷任换蝾l率在兩組間的分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 討論

AGT基因組DNA全長12 kb，包括5個外顯子和4個內(nèi)含子。AGT基因的某些突變可以直接影響AGT水平，進(jìn)而影響血管緊張素Ⅱ(AngⅡ）的生成［3］。AngⅡ與抑郁、焦慮和認(rèn)知功能有著密切的關(guān)系，并可能參與情感障礙和老年性癡呆的病理生理過程［4］。

表1 AGT基因M235T基因型和等位基因頻率在健康對照和抑郁癥患者中的分布 n（%）

本研究為了避免基因多態(tài)性檢測可能由于不同種族和地域的差異而導(dǎo)致的偏差，選擇的研究對象均為浙江地區(qū)漢族。研究結(jié)果顯示AGT M235T基因型和等位基因頻率在健康人群中分布與蔡思宇等［5］報(bào)道的結(jié)果相近，然而AGT M235T多態(tài)性和抑郁癥未顯示出關(guān)聯(lián)，這和國外研究［1］結(jié)論一致。由于在AngⅡ形成過程中，血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)換酶(ACE）起到關(guān)鍵的限速酶作用。因此我們推測，與AGT M235T基因多態(tài)性相比ACE基因多態(tài)性可能和高水平AngⅡ更為相關(guān)。

盡管本研究結(jié)果提示AGT M235T基因多態(tài)性可能與抑郁癥無關(guān)，但有研究［6］表明其與男性抑郁癥狀有關(guān)。因此，我們還需進(jìn)一步收集臨床資料，分析AGT M235T基因多態(tài)性與抑郁癥狀以及藥物療效之間的關(guān)系。

1 Saab YB，Gard PR，Yeoman MS，et al.Renin-angiotensin-system gene polymorphisms and depression.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2007，31(5）：1113-1118.

2 Jenkins LD，Powers RW，Cooper M，et al.Preeclampsia risk and angiotensinogen polymorphisms M235T and-217 in African American and Caucasian women.Reprod Sci，2008，15(7）：696-701.

3 Miller JA，Scholey JW.The impact of renin-angiotensin system polymorphisms on physiological and pathophysiological processes in humans.Curr Opin Nephrol Hypertens，2004，13(1）：101-106.

4 Gard PR.Angiotensin as a target for the treatment of Alzheimer's disease，anxiety and depression.Expert Opin Ther Targets，2004，8(1）：7-14.

5 蔡思宇，徐耕，施育平，等.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶及血管緊張素原基因多態(tài)性與高血壓左室肥厚的相關(guān)研究.中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2005，14(4）：323-327.

6 López-León S，Janssens AC，Tiemeier H，et al.Angiotensinogen M235T polymorphism and symptoms of depression in a populationbased study and a family-based study.Psychiatr Genet，2008，18 (4）：162-166.

2010-01-12）

(本文編輯：武春艷）

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