伍 季，茍 欣，李云祥

(1.川北醫(yī)學院第二臨床學院泌尿外科，四川 南充 637000;2.重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院泌尿外科 400162)

膀胱癌是人類常見的一種惡性腫瘤，約占全部惡性腫瘤的3%，在我國其發(fā)病率居泌尿生殖系腫瘤的首位。目前臨床常用的方法難以準確預(yù)測膀胱癌的生物學行為及預(yù)后。近年來許多腫瘤標記物相繼被發(fā)現(xiàn)可用于膀胱癌的預(yù)后判斷，但迄今為止幾乎沒有標記物可供臨床常規(guī)使用。目前有研究表明，ΔNp63與膀胱癌的生物學特性有一定的相關(guān)性，但其作用存在爭議。本實驗?zāi)康脑谟谕ㄟ^聯(lián)合檢測和分析ΔNp63、Ki-67和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在膀胱癌組織中的表達情況以探討其在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用及其相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取川北醫(yī)學院第二臨床學院病理科2006～2008年經(jīng)手術(shù)切除的并有完整臨床資料的膀胱移行細胞癌(TCCB)標本56例，其中男34例，女 22例，年齡 30～82歲，平均56歲。病理分級按世界衛(wèi)生組織(WHO)1998年標準確定，低級別(0～Ⅰ級)37例，高級別(Ⅱ ～Ⅲ級)19例。臨床病理分期按國際抗癌聯(lián)盟TNM分期(UICC-TNM)標準確定，分為淺表性腫瘤(Tis～T1)32例，浸潤性腫瘤(T2～T4)24例;初發(fā)30例，復發(fā)26例。以12例膀胱切開取石術(shù)及開放前列腺切除術(shù)患者的膀胱黏膜為對照組。

1.2 方法 應(yīng)用免疫組織化學染色的方法，對患者的病理切片進行ΔNp63、Ki-67和 VEGF染色。鼠抗人 ΔNp63 Ig G單克隆抗體、鼠抗人 Ki-67核抗原、羊抗人 VEGF多克隆抗體、免疫組織化學染色SP試劑、DAB顯色試劑盒購自北京中山生物制品有限公司。按試劑盒說明書操作。

1.3 結(jié)果判定 由2位病理科醫(yī)生在臨床和病理資料不知曉的情況下進行觀察，2位觀察者重復觀察同一張病理切片進行結(jié)果判定。隨機選擇5個高倍視野，計數(shù)500個腫瘤細胞中陽性染色細胞，陽性表達率(PI)=(陽性表達腫瘤細胞數(shù)/500)×100%，ΔNp63抗原陽性表達表現(xiàn)為細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，PI＜25%為陰性，PI≥25%為陽性(圖1)。Ki-67陽性表達表現(xiàn)為腫瘤細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，以PI＜20%為陰性，≥20%為陽性(圖2)。VEGF陽性表達以腫瘤細胞及其附近的血管內(nèi)皮細胞胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃為陽性染色，無腫瘤細胞著色或著色腫瘤細胞數(shù)小于10%為陰性表達，著色腫瘤細胞數(shù)大于或等于10%為陽性表達(圖 3)。

表1 ΔNp63、Ki-67和 VEGF的染色結(jié)果(n)

1.4 統(tǒng)計學處理 使用S PSS10.0版統(tǒng)計軟件作統(tǒng)計分析，ΔNp63、Ki-67和VEGF在膀胱癌中的表達及與臨床分期、病理分級的關(guān)系采用χ2檢驗，各指標陽性表達相關(guān)性分析采用S pearman等級相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 ΔNp63、Ki-67和VEGF的表達與膀胱癌病理分級、分期及預(yù)后的相關(guān)性 ΔNp63、Ki-67和VEGF在正常膀胱黏膜、不同分級及不同分期膀胱癌組織中的陽性表達率見表1，結(jié)果表明，隨癌細胞惡性程度及浸潤程度增加，ΔNp63、Ki-67、VEGF的陽性表達有增強趨勢，其差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);ΔNp63、Ki-67、VEGF在復發(fā)組中的表達均明顯高于初發(fā)組，其差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

圖1 ΔNp63在 TCCB中的陽性表達

圖2 Ki-67在TCCB中的陽性表達

2.2 ΔNp63與VEGF、Ki-67在 TCCB中表達的相關(guān)性ΔNp63、Ki-67和VEGF在膀胱癌組織中的表達情況經(jīng)分別采用Spearman等級相關(guān)性分析，ΔNp63與 Ki-67、ΔNp63與VEGF均呈正相關(guān)，rs′分別為 0.316、0.322，其差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 ΔNp63與Ki-67、VEGF的相關(guān)性分析(n)

圖3 VEGF在TCCB中的陽性表達

3 討 論

p63是p53的家族成員之一，主要有 TAp63和 ΔNp63兩種亞型。p63在尿路上皮的分化和膀胱癌發(fā)生中起著一定的作用[1]。TAp63功能類似 p53，ΔNp63亞型無 TA區(qū)，不具備轉(zhuǎn)錄激活活性，是缺乏酸性 N端反式激活區(qū)的 p63，ΔNp63以顯性失活的方式抑制 TAp63和 p53，主要與細胞增殖有關(guān)[2]。ΔNp63在膀胱癌中的作用存在爭議，Park等[3]研究證實，ΔNp63在膀胱癌中表達增強，提示ΔNp63可能促成膀胱癌的進展 。Compérat等[4]研究證實，p63的表達在膀胱癌進展期間，尤其從低級別向高級別轉(zhuǎn)化過程中逐漸下降。何云鋒等[5]研究認為，ΔNp63與 TCCB的發(fā)生密切相關(guān)，可能為 TCCB發(fā)生的重要促進因素，但其表達水平和TCCB的臨床分期、病理分級沒有相關(guān)性，故ΔNp63在TCCB進展中的作用有待進一步研究。本實驗結(jié)果顯示，ΔNp63在TCCB中的陽性表達率顯著高于正常膀胱組織，并且與腫瘤的浸潤程度和病理分級呈正相關(guān)，在復發(fā)組的表達率顯著高于初發(fā)組，其差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。隨癌細胞惡性程度及浸潤程度增加，?ΔNp63陽性表達有增強趨勢。

ΔNp63與膀胱癌進展的作用機制目前尚不清楚。研究表明，Ki-67是一種增殖相關(guān)核抗原，與細胞周期密切相關(guān)，是判斷腫瘤預(yù)后的重要標記物，其表達越高預(yù)后越差[6]。Ki-67高表達的膀胱癌分化程度低、浸潤性強，可準確反映細胞增殖狀況，是研究腫瘤生物學行為和預(yù)后的一個重要參考指標[7]。而VEGF是內(nèi)皮細胞特異的有絲分裂原，參與腫瘤營養(yǎng)血管的發(fā)生和構(gòu)建，VEGF和表淺性膀胱癌的生物學行為最為密切，可作為表淺性膀胱癌的相對特異的指標。Yang等[8]取161例膀胱癌樣本用免疫組化的方式研究VEGF基因的表達情況，結(jié)果顯示，隨著臨床分期、分級的增高，VEGF基因表達的陽性率明顯提高。本實驗結(jié)果顯示，ΔNp63、Ki-67和 VEGF在 TCCB中的陽性表達與腫瘤的浸潤程度、病理分級及預(yù)后呈正相關(guān)，ΔNp63可能通過促進腫瘤細胞的增殖和腫瘤血管形成發(fā)揮促癌作用，ΔNp63表達越強，細胞增殖越活躍，腫瘤的惡性程度越高，浸潤性生長和復發(fā)的可能性越大。

膀胱癌的預(yù)后判斷一直困擾著臨床醫(yī)生，臨床上采用的病理分級、分期方法曾為臨床提供了有益于判斷預(yù)后的資料，但仍很難準確預(yù)測膀胱癌的生物學行為及預(yù)后。近年來隨著對腫瘤分子生物學機制認識的深入，許多膀胱癌的預(yù)后判斷標記物相繼被發(fā)現(xiàn)，但迄今沒有任何一種標記物常規(guī)應(yīng)用于臨床。膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展是多因素、多基因影響的復雜過程，僅憑單一的腫瘤標記物不能全面準確地反映腫瘤的惡性潛能。一些學者進行了多指標聯(lián)合檢測判斷膀胱癌預(yù)后的研究，周占松等[8]檢測了p21、p185、p53蛋白在膀胱癌腫的表達，說明多個基因協(xié)同激活在膀胱移行細胞癌發(fā)生、發(fā)展中起一定作用。溫機靈和周祥福[9]認為聯(lián)合檢測 p53、p21、Ki-67和VEGF可以更加準確地預(yù)測膀胱癌的預(yù)后。Khaled等[10]經(jīng)多因素分析顯示聯(lián)合檢測nm23-H 1、EGFR和p53是能用于預(yù)測高風險膀胱癌的生物學指標，并且認為除病理學因素外，聯(lián)合檢測2個或2個以上標記物對判斷預(yù)后有協(xié)同作用。本實驗采用免疫組化檢測了ΔNp63、Ki-67和VEGF在TCCB中的表達。結(jié)果顯示，由于ΔNp63在尿路上皮的分化中起重要作用，并且扮演了癌基因的角色，Ki-67是一種增殖相關(guān)核抗原，反映了腫瘤細胞增殖狀況，VEGF參與腫瘤營養(yǎng)血管的發(fā)生和構(gòu)建，為腫瘤生長、浸潤和轉(zhuǎn)移提供適宜的條件。結(jié)果表明，ΔNp63、VEGF和Ki-67表達水平及與TCCB分化程度、浸潤程度及預(yù)后呈正相關(guān)，三者在膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展過程中可能有協(xié)同作用，三者表達越高，腫瘤細胞的生長越活躍，發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移的概率就越大，預(yù)后越差。聯(lián)合檢測ΔNp63、Ki-67和VEGF在膀胱移行細胞癌中的表達有助于膀胱癌的預(yù)后判斷，并為臨床治療選擇提供幫助。

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