国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

48種中藥材的多種提取方法的提取物抑制內(nèi)皮細(xì)胞和癌細(xì)胞增殖的活性研究

2010-09-15 04:25劉英學(xué)陳少鵬宋少江周?chē)?guó)春
關(guān)鍵詞:茜草紫草抗癌

陳 龍,劉英學(xué),陳少鵬,陸 鑫,成 浩,宋少江,周?chē)?guó)春*

1沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院,沈陽(yáng) 110016;2中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院,廣州 510663

48種中藥材的多種提取方法的提取物抑制內(nèi)皮細(xì)胞和癌細(xì)胞增殖的活性研究

陳 龍1,2,劉英學(xué)2,陳少鵬2,陸 鑫2,成 浩2,宋少江1,周?chē)?guó)春2*

1沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院,沈陽(yáng) 110016;2中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院,廣州 510663

采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、水為溶劑順序或單獨(dú)提取及熱水提取藥材,研究這些提取物對(duì) HUVEC、Bel-7402、A549細(xì)胞增殖的抑制活性,篩選具有抑制內(nèi)皮細(xì)胞和癌細(xì)胞增殖活性的藥材及其提取方法。本文所研究的 48種中藥材的不同提取方法的提取物抑制內(nèi)皮細(xì)胞和癌細(xì)胞增殖的活性結(jié)果表明:41種中藥材都具有一定的抗血管生成和/或抗癌細(xì)胞活性,其中對(duì) HUVEC、Bel-7402和A549細(xì)胞增殖明顯抑制活性 (IC50≤10μg/mL)的藥材分別有 22種、6種和 6種,對(duì) 3種細(xì)胞的增殖都有明顯抑制活性 (IC50≤10μg/mL)的藥材有 5種。

中藥材;抑制細(xì)胞增殖;HUVEC;Bel-7402;A-549

無(wú)限制增殖是癌細(xì)胞的最基本的特點(diǎn)[1],而無(wú)節(jié)制激活血管生成作用是癌細(xì)胞獲得營(yíng)養(yǎng)和氧氣實(shí)現(xiàn)癌癥發(fā)展及轉(zhuǎn)移的主要病理因素[1-3],因此有效抑制癌細(xì)胞增殖和阻斷腫瘤血管生成作用是抗癌的 2個(gè)主要策略。包括中草藥在內(nèi)的動(dòng)植物和微生物等是抗癌藥物的重要來(lái)源,目前臨床使用的許多抗癌藥物是天然產(chǎn)物或其類似物[4-6]。中草藥在我國(guó)有悠久的歷史,最近幾十年里我國(guó)中醫(yī)藥工作者已經(jīng)將許多中草藥開(kāi)發(fā)成為抗癌中草藥而用于各種癌癥治療,這些成果為中草藥在抗癌領(lǐng)域的研究做出了重要貢獻(xiàn)。

為了研究中草藥成分 (物質(zhì)基礎(chǔ))與藥理藥效活性之間的關(guān)系,本文對(duì)多個(gè)科屬的 48種中藥材進(jìn)行了多種提取方法提取,篩選研究了這些提取物的抗癌細(xì)胞增殖及抗內(nèi)皮細(xì)胞增殖的活性。本研究目的是:1)在細(xì)胞水平評(píng)價(jià)這些中藥材是否具有抗癌細(xì)胞和抗血管生成活性;2)確定它們的活性成分所在的提取部位。這項(xiàng)研究為我們將來(lái)從中草藥中發(fā)現(xiàn)抗癌活性成分并研究開(kāi)發(fā)以中草藥為源頭的抗癌藥物提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥材

本文所用 48種中藥材(TCMs)均購(gòu)自廣州市同仁堂藥業(yè)五羊店,都有明確的省縣(市)產(chǎn)地記錄。

1.2 細(xì)胞

激活內(nèi)皮細(xì)胞增殖是血管生成的最重要的環(huán)節(jié)[2,3],本文所用的內(nèi)皮細(xì)胞是人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),HUVEC由中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院周?chē)?guó)春實(shí)驗(yàn)室從新鮮人臍帶中原代分離、傳代培養(yǎng),藥物篩選所用細(xì)胞為 3~8代 HUVEC;人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549來(lái)源于ATCC(http://www.atcc.org),由中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院裴端卿實(shí)驗(yàn)室保存;人肝癌細(xì)胞 Bel-7402購(gòu)自武漢大學(xué)細(xì)胞典藏中心,由中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院周?chē)?guó)春實(shí)驗(yàn)室保存。

1.3 試劑

石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和乙醇或甲醇等均購(gòu)自廣東省西隴化工有限公司;DMSO購(gòu)自 Sigma; MTT購(gòu)自 AMRESCO;RPM I-1640、DMEM/H IGH GLUCO購(gòu)自 Hyclone;EG M-2購(gòu)自 LONZA (cc-3162);小牛血清購(gòu)自 G IBCO。

陽(yáng)性藥物:A549細(xì)胞增殖陽(yáng)性抑制藥物紫杉醇(Taxol)購(gòu)自福建南方生物技術(shù)股份有限公司;Bel-7402細(xì)胞增殖陽(yáng)性抑制藥物多柔比星 (阿霉素/ ADM)購(gòu)自廣東省藥品檢驗(yàn)所;HUVEC細(xì)胞增殖陽(yáng)性抑制藥物 TNP470為中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院周?chē)?guó)春實(shí)驗(yàn)室合成。

1.4 儀器

粉碎機(jī)(溫嶺林大,DFT-200);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (廣州予華,RE-5299);低溫冷卻液循環(huán)泵 (廣州予華, DLSB-5L/25);冷凍干燥機(jī) (廣州正儀,FD-1D-80);超級(jí)酶標(biāo)儀 (美國(guó),B IO-TEK);二氧化碳培養(yǎng)箱(Thermo);超凈工作臺(tái)(Thermo)。

2 方法

2.1 藥材提取方法

將藥材用粉碎機(jī)粉碎后按以下方法提取 (括號(hào)內(nèi)為提取方法的縮寫(xiě),以下同此縮寫(xiě))。

順序提取:稱取 40 g粉碎藥材依次用 8倍體積量(~320 mL)溶劑石油醚(P)、二氯甲烷(D)、乙酸乙酯(E)、甲醇 (M)和水 (W)室溫浸提 3次,24 h/次,室溫減壓回收溶劑或凍干得待測(cè)樣品。

水熱提:稱取 40 g粉碎藥材用 8倍體積量 (~320 mL)水(H)100℃提取 3次,提取時(shí)間分別為 3、2和 1 h,60℃減壓蒸去大部分水后凍干得待測(cè)樣品。

單獨(dú)提取:稱取 40 g粉碎藥材單獨(dú)用 8倍體積量(~320 mL)乙醇 (N)或二氯甲烷 (d)提取 3次, 24 h/次,減壓回收溶劑得待測(cè)樣品。

2.2 活性篩選方法

2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理

A549和Bel-7402細(xì)胞的培養(yǎng)液是含 10%小牛血清的 RPM I-1640,HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)液是 EG M-2 (含生長(zhǎng)因子),細(xì)胞在 37℃,5%CO2條件下維持培養(yǎng)。

按A549細(xì)胞、Bel-7402細(xì)胞每孔 1500個(gè)細(xì)胞接種于 96孔板,HUVEC細(xì)胞為每孔 1000個(gè)細(xì)胞接種于 96孔板,待細(xì)胞貼壁后加入藥物 (藥物先用DMSO溶解,加藥前用 PBS稀釋),溶劑對(duì)照組和加藥組(包括陽(yáng)性藥物)的細(xì)胞培養(yǎng)液中 DMSO終濃度均為 0.1%,每個(gè)濃度有 3個(gè)復(fù)孔。

2.2.2 MTT檢測(cè)

加藥再繼續(xù)培養(yǎng) 96 h后,每孔加入 20μL MTT (5.0 mg/mL),再在 37℃,5%CO2條件下繼續(xù)孵育4 h,然后吸去細(xì)胞培養(yǎng)液,每孔加入 100μL DMSO分析純?cè)噭┤芙?MTT被還原的產(chǎn)物-藍(lán)紫色For mazan結(jié)晶,并于超級(jí)酶標(biāo)儀 570 nm下讀數(shù)。超級(jí)酶標(biāo)儀讀數(shù)是 For mazan的吸光度值 (OD570),其反映活細(xì)胞的還原酶活力與細(xì)胞的活力成正比,因此基于溶劑對(duì)照組和加藥組吸光度值可以計(jì)算出陽(yáng)性藥物(表 1)和各個(gè)提取物的 I C50(表 2)。

3 結(jié)果

3.1 藥物篩選結(jié)果

HUVEC、Bel-7402和 A-549的陽(yáng)性藥物的活性見(jiàn)表 1。41種中藥材的多種提取物 (至少一種提取物)對(duì) HUVEC、Bel-7402和 A-549細(xì)胞增殖有抑制活性,表 2列出了它們的活性結(jié)果 IC50,為了便于對(duì)照,我們還列舉了這些藥材文獻(xiàn)報(bào)道[7-9]的主要化學(xué)成分類別。

表 1 陽(yáng)性藥物抑制細(xì)胞增殖的活性結(jié)果 (IC50)Table 1 Activity data(IC50)for positive compounds against corresponding cell proliferation

順序提取的所有提取物對(duì) 3種細(xì)胞都沒(méi)有抑制活性 (IC50≥50μg/mL)的藥材是:石韋 (Folium Pynosiae)、卷柏(Herba Selaginellae)、馬鞭草(HerbaVerbenae)、急性子(Sem en Im patientis)、側(cè)柏葉(Cacum en Platycladi)、牛膝(Radix Achyranthis B identatae)和赤芍(Radix Paeoniae Rubra)。

表 2 41種中藥材提取物抑制細(xì)胞增殖的活性結(jié)果 (I C50)及文獻(xiàn)報(bào)道的主要化學(xué)成分Table 2 Activity data(IC50)for 41 TCMs’extracts against cell proliferation of HUVEC,Bel-7402 and A549 and these TCMs’major constituents reported in literatures

注:a所有提取物對(duì) 3種細(xì)胞都沒(méi)有活性的藥材未列在此表中;b除指定外,所有藥材均進(jìn)行了順序提取;c對(duì) 3種細(xì)胞都沒(méi)有抑制活性的系列提取物未列在此表中;d只進(jìn)行指定溶劑的單獨(dú)提取;“–”表示無(wú)活性 (IC50≥50μg/mL)。Notes:aTCMs without activity against all three cells were not included in the table;ball listed TCMswere conducted by sequential extraction unless designated;cthe extractwithout any inhibitory activity to three cellswas not listed in the table;dextracted onlywith designated solvent;“–”means“I C50≥50μg/mL”.

分析上述不同提取方法的提取物的活性結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),活性成分被二氯甲烷 (D或 d)提取的幾率較大,其次是乙酸乙酯 (E)及石油醚 (P);而活性成分被大極性溶劑如甲醇 (M)、乙醇 (N)和水 (W或H)的提取效率相對(duì)較低。

3.2 對(duì) HUVEC增殖有明顯活性 (IC50≤10μg/ mL)的中藥材共 22種

按文獻(xiàn)報(bào)道藥材所含的成分分類 (括號(hào)內(nèi)為提取方法的縮寫(xiě)):1)含有醌類結(jié)構(gòu)的藥材為瞿麥(N)、紫草(P、E、D)、茜草 (D、E);2)含有黃酮及木質(zhì)素類結(jié)構(gòu)的藥材為仙鶴草 (P)、小薊 (N)、路路通(P、D)、凌霄花(E)、雞冠花 (D)、槐米 (E、D)、蒲黃(D、P、M)、艾葉 (N)、降香 (E、H、D)、蘇木 (D、H、M、E)、一點(diǎn)血(D)、黃芩(D、E);3)含有酚類結(jié)構(gòu)的藥材為仙鶴草(P)、矮地茶 (D)、小薊(N)、降香 (E、H、D);4)含氮類化合物的藥材為馬齒莧 (W)、馬勃(D)、一點(diǎn)血(D);5)菲、蒽、萘類化合物的藥材為紫草(P、E、D)、白及 (D、E)、茜草 (D、E);6)甾體、萜類化合物的藥材為馬齒莧 (W)、馬勃 (D)、路路通(P、D)、凌霄花(E)、槐米 (E、D)、艾葉 (N)、九里香(D)、雞血藤(d)、紫草(P、E、D)、穿山龍 (E、M、D)、茜草(D、E);7)含有香豆素結(jié)構(gòu)的藥材為矮地茶(D)、九里香(D)。

3.3 對(duì) Bel-7402增殖有明顯活性 (IC50≤10μg/ mL)的中藥材共 6種

按文獻(xiàn)報(bào)道藥材所含的成分分類 (括號(hào)內(nèi)為提取方法的縮寫(xiě)):1)含有醌類結(jié)構(gòu)的藥材為紫草 (P、D)、茜草(D);2)含有黃酮及木質(zhì)素類結(jié)構(gòu)的藥材為蒲黃 (D)、降香(H)、茜草 (D)、黃芩 (D);3)含有酚類結(jié)構(gòu)的藥材為降香 (H);4)菲、蒽、萘類化合物的藥材為紫草 (P、D)、茜草 (D);5)甾體、萜類化合物的藥材為紫草 (P、D)、穿山龍 (E)、茜草 (D);6)含有氮類化合物的藥材為茜草(D)。

3.4 對(duì)A-549增殖有明顯活性 (I C50≤10μg/mL)的中藥材共 6種

按文獻(xiàn)報(bào)道藥材所含的成分分類 (括號(hào)內(nèi)為提取方法的縮寫(xiě)):1)含有醌類結(jié)構(gòu)的藥材為紫草(P)、茜草 (D、E);2)含有黃酮及木質(zhì)素類結(jié)構(gòu)的藥材為蒲黃(D)、降香(E、D)、蘇木 (E)、茜草 (D、E); 3)含有酚類結(jié)構(gòu)的藥材為降香 (E、D);4)是菲、蒽、萘類化合物的藥材為紫草 (P)、茜草 (D、E);5)甾體、萜類類化合物的藥材為紫草 (P)、穿山龍 (E、 M)、茜草(D、E)。

4 討論

本次研究共篩選了分屬于多個(gè)科屬的 48種中藥材,除 7種中藥材外其余的 41種中藥材都具有一定的抗血管生成和/或抗癌細(xì)胞活性,其中有些中藥材的同一提取物對(duì) 2種或以上細(xì)胞有增殖抑制活性,對(duì) 3種細(xì)胞的增殖均有明顯抑制活性 (IC50≤10 μg/mL)的藥材有 5種。另一方面,活性篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn)同一藥材不同提取方法得到的提取物活性差異很大,因此有效的提取方法和合理的分配原則可能可以將一些沒(méi)有活性的成分排除在外使得有活性的成分能夠得到富集。這些初步研究結(jié)果不僅對(duì)從中草藥中尋找抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和抗癌細(xì)胞增殖活性的藥物研究打下基礎(chǔ),而且為將來(lái)進(jìn)一步研究各種不同成分之間藥理藥效活性的相互依存、相互促進(jìn)、相互拮抗等關(guān)系提供了基本實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 Hanahan D,Weinberg RA.The hallmarks of cancer.Cell, 2000,100:57-70.

2 Folkman J.Tumor angiogenesis:therapeutic implications.N Engl J M ed,1971,285:1182-1186.

3 Folkman J.Angiogenesis:an organizing principle for drug discovery.Nat Rev D rug D iscov,2007,6:273-286..

4 Newman DJ.Natural products as leads to potential drugs:an old processor the new hope for drug discovery.J M ed Chem, 2008,51:2589-2599.

5 Newman DJ,Cragg G M.Natural products as sources of new drugs over the last 25 years.J Nat Prod,2007,70:461-477.

6 Newman DJ,Cragg G M.Natural products from marine invertebrates and microbes as modulators of antitumor targets.CurrD rug Targets,2006,7:279-304.

7 Edited by Nanjing University of Chinese Medicine(南京中醫(yī)藥大學(xué)編),The Dictionary of Traditional Chinese Medicines(中藥大辭典),Shanghai:Shanghai Scientific&Technical Publishers,2006.

8 Gao XM(高學(xué)敏),Xu Z M(許占民),Li Z W(李鐘文),et al.ChineseMedicines(中藥學(xué)).Beijing:People’sMedical Publishing House,2000.

9 Xiao CH(肖崇厚).Chemistry of Chinese Medicines(中藥化學(xué)).Shanghai:Shanghai Scientific&Technical Publishers,1987.

CHEN Long1,2,L IU Ying-xue2,CHEN Shao-peng2,LU Xin2,CHENG Hao2,SONG Shao-jiang1,ZHOU Guo-chun2*

1School of Traditional Chinese Materia M edica,Shenyang Pha rmaceuticalUniversity, Shenyang 110016,China;2Guangzhou Institute of B iom edicine and Health,Guangzhou 510663,China

Antiproliferative Inhibition of Endothelial Cell and Cancer Cells by D ifferent Extracts of 48 Traditional Chinese M edicines

Sequential extraction or individual extraction of 48 Traditional Chinese Medicines(TCMs)by petroleum ether,dichloromethane,ethyl acetate,methanol,ethanol,water or boilingwaterwas conducted and antiproliferative activity of these extracts againstHUVEC,Bel-7402 and A549 proliferation was assayed.The results in this report showed that 41 of 48 studied TCMs expressed antiproliferative activity to HUVEC or/and cancer cells,in which 22,6 and 6 studied TCMs exhibited good inhibition(IC50≤10μg/mL)to the proliferation of HUVEC,Bel-7402 and A549,respectively,and 5 studied TCMs behaved good inhibitory activity(IC50≤10μg/mL)to all three cells’proliferation.

Traditional ChineseMedicine(TCM);antiproliferative activity;HUVEC;Bel-7402;A-549

R282.7/05;Q946.91

A

1001-6880(2010)04-0692-05

2009-06-22 接受日期:2009-09-15

中國(guó)科學(xué)院人口健康與醫(yī)藥創(chuàng)新基地重要方向項(xiàng)目(KSCX-2-Y W-R-22);廣東省中醫(yī)藥局項(xiàng)目(2007202)

*通訊作者 Tel:86-20-32290487;E-mail:zhou guochun@gibh.ac.cn

猜你喜歡
茜草紫草抗癌
Fuzheng Kang' ai decoction (扶正抗癌方) inhibits cell proliferation,migration and invasion by modulating mir-21-5p/human phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten in lung cancer cells
基于3D技術(shù)和偏光技術(shù)的茜草鑒別研究
抗癌之窗快樂(lè)攝影
茜草與入骨丹(東南茜草)質(zhì)量比較研究
三十年跑成抗癌明星
小兒紅屁股涂紫草油
抗癌新聞
茜草炭對(duì)急性血瘀模型大鼠抗凝血傾向的活性部位篩選
3種茜草科植物的抗寒特性
不同市場(chǎng)紫草相關(guān)質(zhì)量的比較研究