林曉蓮,林麗君,張尚斌

（1.深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院,廣東 深圳 518001;2.深圳市中醫(yī)院,廣東 深圳 518020）

高效液相色譜法測定復(fù)方黃連液中黃芪甲苷的含量

林曉蓮1,林麗君1,張尚斌2

（1.深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院,廣東 深圳 518001;2.深圳市中醫(yī)院,廣東 深圳 518020）

目的探討復(fù)方黃連液中黃芪甲苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法,用Kromasil C18色譜柱（200 mm×4.6 mm,5 μ m）,流動(dòng)相為乙腈-水（1∶2）,流速1.0 mL/min,檢測波長為200 nm。結(jié)果 黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.064～200 μ g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系,加樣回收率為97.85%,RSD為1.96%（n=6）。結(jié)論該方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可用于復(fù)方黃連液的質(zhì)量控制。

復(fù)方黃連液;黃芪甲苷;高效液相色譜法;含量測定

1 儀器與試藥

Agilent Technologien 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;UV2450型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司）;AE240型分析天平（瑞士梅特勒公司）。黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號(hào):0781-9807）;甲醇、乙腈為色譜純,水為重蒸餾水,其他試劑為分析純;復(fù)方黃連液（本院自制產(chǎn)品,批號(hào)為20081101 、20081105 、20081110）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[5]色譜柱:Kromasil C18柱（200mm×4.6mm,5μ m）;流動(dòng)相 :乙腈 -水（1∶2）;柱溫:250℃;流速:1.0mL/min;檢測波長:205nm;進(jìn)樣量:10μ L。以黃芪甲苷計(jì),理論塔板數(shù)不低于4 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量,加甲醇溶解制成每1 mL含0.2 mg的溶液,即得黃芪甲苷對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取批號(hào)為20081101的復(fù)方黃連液5 mL,加水稀釋至20 mL,置分液漏斗中,用水飽和的正丁醇萃取3次,每次20 mL,正丁醇萃取液合并,用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次,每次15 mL,再用正丁醇飽和水洗滌至中性。正丁醇層水浴蒸干,以甲醇溶解定容至10 mL,搖勻,用微孔濾膜濾過,棄初濾液,續(xù)濾液作供試品溶液。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備 按照復(fù)方黃連液處方比例,稱取除黃芪以外的其他藥材,按供試品溶液的制備方法操作制備復(fù)方黃連液黃芪陰性制劑,得陰性供試品溶液。

2.3 測定波長選擇 取對照品溶液,加流動(dòng)相稀釋,采用紫外分光光度儀掃描。結(jié)果在205 nm波長處有最大吸收,故選擇205 nm作為測定波長。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 陰性干擾試驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μ L,注入液相色譜儀測定。結(jié)果陰性對照品溶液在黃芪甲苷色譜峰相應(yīng)位置上無吸收峰出現(xiàn),表明陰性對照無干擾。

2.4.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取黃芪甲苷對照品2.0 mg,置10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,混勻,5倍量倍比稀釋,得溶液濃度分別為200,40,8,1.6,0.32,0.064 μ g/mL,用微孔濾膜濾過 ,進(jìn) 樣 10 μ L,測定黃芪甲苷的峰面積,以黃芪甲苷對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程Y=2.983×105X+1.317×104,r=0.999 7（n=5）。結(jié)果表明黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.064～200 μ g范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 精度吸取對照品溶液10 μ L,連續(xù)進(jìn)樣6次,結(jié)果RSD為1.05%（n=6）,表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液,分別于0,2,4,6,8,12 h時(shí)進(jìn)樣10 μ L。結(jié)果供試品中黃芪甲苷峰面積值的RSD為0.72%（n=6）,表明溶液穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn) 精密量取批號(hào)為20081105的已知含量復(fù)方黃連液1mL,共6份,各精密加入一定量的黃芪甲苷對照品,照供試品溶液制備方法制備待測溶液。測定,計(jì)算回收率,平均回收率為97.85%（n=6）,RSD 為1.96%。

2.4.6 樣品含量測定 按2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備溶液,精取3個(gè)批號(hào)6個(gè)樣品進(jìn)行分析。結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 在2005年版《中國藥典》中,黃芪藥材的含量測定已經(jīng)采用HPLC[5],資料顯示含黃芪的復(fù)方制劑現(xiàn)多采用HPLC測定黃芪甲苷的含量[6-7]。本文采用HPLC法對復(fù)方黃連液中黃芪甲苷進(jìn)行含量測定,前處理簡單,分離度好,靈敏度高。

3.2 本測定法中比較多種比例的流動(dòng)相,結(jié)果以乙腈-水（1∶2）為優(yōu),保留時(shí)間適中。

3.3 3個(gè)批號(hào)6個(gè)樣品測得的黃芪甲苷含量差異不大,說明黃芪藥材來源穩(wěn)定的重要性。

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[1]唐吉平,蔣順琬,林志文,等.復(fù)方黃連液對慢性骨髓炎患者紅細(xì)胞免疫功能的影響[J].中醫(yī)正骨,2005,17（3）:3.

[2]蔣順碗,岑澤波,陳基長.自制黃連液外用治療慢性骨髓炎療效觀察[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志[J],1997,5（1）:12.

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R284.2

A

1007-4813（2010）01-0128-02

廣東省中醫(yī)藥管理局資助課題（編號(hào):2008026）

本實(shí)驗(yàn)是廣東省中醫(yī)藥管理局資助課題《復(fù)方黃連液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究》的質(zhì)量控制內(nèi)容。復(fù)方黃連液由黃芪、黃連、黃柏、梔子等中藥組方而成的醫(yī)院制劑,具有補(bǔ)氣升陽、益衛(wèi)固表、托毒生肌、利水消腫等功效,在治療慢性骨髓炎,具有改善病灶周圍組織供血,促進(jìn)死骨吸收或排出,縮短病程,增強(qiáng)免疫功能及抗菌消炎之作用[1-2]。本方中黃芪為君藥,《中華人民共和國藥典》和部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中分別規(guī)定黃芪藥材和黃芪注射液的定量指標(biāo)成分為黃芪甲苷,為了更好地控制制劑質(zhì)量,保證其療效,筆者用高效液相色譜（HPLC）法測定制劑的黃芪甲苷含量[3-4]。現(xiàn)報(bào)道如下。

（

2009-10-19）