高衛(wèi)東，李翠玲

（佛山市藥品檢驗(yàn)所，廣東 佛山 528000）

HPLC測定牛黃解毒片中大黃素的含量

高衛(wèi)東*，李翠玲

（佛山市藥品檢驗(yàn)所，廣東 佛山 528000）

目的：建立高效液相色譜法測定牛黃解毒片中大黃素含量的方法。方法：采用Hypersil C18色譜柱，流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），檢測波長：289 nm，流速：1.0 mL·min－1，柱溫：30℃。結(jié)果：大黃素在0.025～0.25μg線性關(guān)系良好，r＝0.999 9，平均回收率為97.25%，RSD＝1.1%（n＝6）。結(jié)論：該方法快速簡便，準(zhǔn)確可靠，可用于牛黃解毒片的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；牛黃解毒片；大黃素

牛黃解毒片現(xiàn)收載于 《中國藥典》2010年版（一部），由人工牛黃、石膏和大黃等8味中藥組成。具有清熱解毒的功能，用于火熱內(nèi)盛，咽喉腫痛，牙齦腫痛，口舌生瘡，目赤腫痛等［1］。原標(biāo)準(zhǔn)的含量測定項(xiàng)僅對(duì)黃芩中黃芩苷的含量進(jìn)行了測定，而沒有對(duì)方中用量最大的大黃進(jìn)行含量測定。大黃素是大黃的主要活性成分，具有良好的抗微生物、抗炎、抗腫瘤活性和免疫抑制等作用，與牛黃解毒片的功效主治接近，為了更加有效地控制該產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，完善和提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文建立了高效液相色譜法測定制劑中大黃素含量的方法，該方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

HP1100型系列高效液相色譜儀（美國），AE-240電子分析天平（瑞士Mettler）。大黃素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110756-200110）；牛黃解毒片（江西心誠藥業(yè)有限公司，批號(hào)20081101，20081104，20081209），甲 醇 為 色 譜 純 （德 國Merck），水為超純水（韓國 Power Iplus超純水系統(tǒng)），其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2（4.6 mm×200 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；檢測波長：289 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：30℃。進(jìn)樣量：10μL。在此條件下，方中其他成分對(duì)大黃素測定無干擾，對(duì)照品和制劑樣品在相同的保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性樣品無吸收峰，見圖1。

圖1 牛黃解毒片HPLC圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含25μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片（包衣片除去包衣），精密稱定，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10 mL，超聲處理10 min，再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

照處方比例制備缺大黃的牛黃解毒片，照2.3項(xiàng)下操作，制備陰性樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察

精密吸取大黃素對(duì)照品溶液1，2，4，6，8，10 mL分別置6個(gè)10 mL的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。分別吸取上述6種溶液各10μL，測定。以測得的峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程為Y＝7 996.7X＋1.945 7，r＝0.999 9，說明大黃素進(jìn)樣量在0.025～0.25μg呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液，連續(xù)6次進(jìn)樣，測定峰面積積分值，計(jì)算RSD＝0.72%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

同一對(duì)照品溶液10μL，按上述色譜條件分別測定6次，每次間隔4 h，記錄峰面積積分值，計(jì)算RSD＝0.87%，結(jié)果顯示溶液20 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的供試品6份，依法制成供試品溶液進(jìn)行測定，平均含量為1.12 mg·g－1，RSD＝1.78%，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量的大黃素對(duì)照品溶液，照含量測定方法測定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品測定

取20081101，20081104，20081209 3批樣品，按供試品溶液制備項(xiàng)下方法制備，按上述色譜條件測定其中大黃素的含量，結(jié)果3批樣品的大黃素含量分別為 1.18，1.12，1.24 mg·g－1。

表1 大黃素加樣回收率

3 結(jié)論和討論

大黃作為牛黃解毒片中用量最大的一味藥，且其功能主治與牛黃解毒片相近，應(yīng)該對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，本文選擇大黃中主要活性成分大黃素作為指標(biāo)成分進(jìn)行含量測定，以求更好地控制牛黃解毒片的內(nèi)在質(zhì)量。

參照 《中國藥典》2010年版收載的大黃藥材中大黃素的含量測定方法［2］，來確定本制劑大黃素含量測定的色譜條件和供試品制備方法。本方法相對(duì)簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為 《中國藥典》提高本品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)和參考。

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：566-567.

［2］國家藥典委員會(huì).中國藥典.（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：22-23.

Determination of Emodin in Niuhuangjiedu Tablets by HPLC

GaoWeidong，Li Cuiling
（Foshan Institute for drug control，F(xiàn)oshan Guangdong528000，China）

Objective：A HPLC method was established for determination of emodin in Niuhuangjiedu tablet.Methods：A Hypersil C18column was used with methanol and 0.1%phosphoric acid solution（85∶15）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min－1at30℃ and the detector wavelength was 289 nm.Results：The relationship between the concentration and the peak area of emodin was good linear relation.The calibration curve of emodin was at the range of 0.025～0.25μg（r＝0.999 9），and the average recovery was 97.25%and RSD＝1.1%（n＝6）.Conclusion：The method was rapid，sensitive and accurate，and could be used for the quality control of this preparation.

HPLC；Niuhuangjiedu tablet；Emodin

*高衛(wèi)東，E-mail：weidonggw＠163.com

2010-04-08）