張智圓,沈志濱,季宇彬

制草烏為毛茛科植物北烏頭(Aconitum kusnezoffiiReichb).干燥塊根的炮制加工品[1],主要含有新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿等生物堿類成分[2].文獻多見對其中兩種生物堿及總生物堿進行測定[3-6],同時對3種生物堿質量分數(shù)進行測定的文獻報道罕見.本文同時測定6個不同地區(qū)制草烏中新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿的質量分數(shù),為制草烏生產規(guī)范化、飲片生產標準化提供質量控制依據(jù).

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(Waters 515,2487 UV檢測器,EmPower色譜工作站);對照品購于中國藥品生物制品檢定所,烏頭堿(批號:110720-200410),次烏頭堿(批號:0798-9403),新烏頭堿(批號:0799-9403).

制草烏飲片由廣東藥學院生藥教研室李書淵副教授鑒定為毛茛科植物北烏頭(Aconitum kusnezoffiiReichb).干燥塊根的炮制加工品.產地及編號見表1.

表1 制草烏產地

2 方法和結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相為甲醇-水-氯仿-三乙胺(w/w 70∶30∶2∶0.1),流速為1.0mL/min,檢測波長為230 nm,柱溫為室溫[7].

2.2 溶液制備及色譜檢測

2.2.1 對照品溶液的制備及色譜檢測

分別精密稱取新烏頭堿、次烏頭堿及烏頭堿,二氯甲烷配制成1.00、1.00、0.39mg/mL對照品溶液.精密吸取1 mL,置于10 mL離心管中,精密加入0.01m L H2SO41mL,渦旋2 min,離心5 min(3 000 r/min),取水層20μL進樣.色譜圖見圖1.

圖1 對照品HPLC色譜圖

2.2.2 供試品溶液配制及色譜檢測

精密稱定制草烏粗粉10 g,氨試液4 mL潤濕,乙醚50mL浸泡14 h,過濾.乙醚洗滌藥渣15m L×3次,合并乙醚液,60℃以下蒸干,二氯甲烷溶解并定量轉移殘渣至5mL容量瓶,精密吸取1m L,置于10 mL離心管中,精密加入0.01 m L H2SO41m L,渦旋2 min,離心5 min(3 000 r/min),取水層20μL進樣[8].色譜圖見圖2.

圖2 供試品HPLC色譜圖

2.3 實驗結果

2.3.1 線性關系考察

分別精密吸取標準品溶液0.25、0.5、1、2、3 m L,至10 mL尖底具塞試管中,精密加入0.01 mol/LH2SO41m L,渦旋2min,3 000 r/min,離心5 min,取水層20μL進樣,按上述色譜條件測定峰面積,以質量濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,求得相應回歸方程,見表2.

表2 標準曲線與線性范圍

2.3.2 穩(wěn)定性實驗

取舟山A制草烏粗粉,按2.4.2.2方法制備供試品溶液,于0、2、4、6、8 h分別測定其相應生物堿的峰面積.由標準曲線求其質量比,新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿的RSD分別為2.3%、2.1%和1.5%.

2.3.3 精密度實驗

精密量取烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿混合對照品溶液1 mL,按標準曲線及線性范圍項下進行分析,平行5份,新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿峰面積的RSD分別為1.8%、2.5%、2.8%.

2.3.4 重現(xiàn)性試驗

取舟山A制草烏粗粉5份[9],按2.4.1.2項下制備供試品溶液,分別測定質量分數(shù),測得新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿RSD分別為2.9%、3.7%和1.3%.

2.3.5 加樣回收率試驗

精密稱取舟山A制草烏粗粉,加入一定量的對照品,依上述色譜條件測定峰面積,計算三者的加樣回收率分別為96.1%、95.8%和95.3%.其RSD分別為1.8%、1.3%和2.0%.

2.3.6 樣品質量比測定

分別取不同供試品溶液20μL,按上述色譜條件進樣,測得供試品中新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿相應峰面積,計算質量比,結果見表3.

表3 樣品中新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿質量比

3 結 語

本實驗采用HPLC法同時檢測6個不同地區(qū)中制草烏中三種烏頭堿的質量比,得到結果:新烏頭堿10～120μg/m L,次烏頭堿3.9～46.8μg/m L,烏頭堿在10～120μg/mL范圍內線性關系良好,平均回收率分別為96.1%、95.8%和95.3%.其酯型生物堿質量分數(shù)均不超過0.15%,符合中國藥典規(guī)定.

[1]《中國藥典》2005版[M]I部.VOL.26-27;163-164.

[2]李文蘭,王艷萍.中藥烏頭的實驗研究[J].哈爾濱商業(yè)大學學報:自然科學版,2006,22(4):13-17.

[3]李云霞,孫 照,郭艷玲.酸性染料比色法測定川烏、草烏中總烏頭生物堿的含量[J].中成藥,2000,22(9):662-663.

[4]王朝虹,何 毅,張繼宗,等.高效液相色譜法測這下草烏中烏頭堿含量[J].刑事技術,2003(1):15-16.

[5]孫愛民,陳德華,畢培曦.高效毛細管電泳法測定中草藥川烏、草烏中烏頭堿的含量[J].色譜,1999,17(1):67-69.

[6]鄧 江,龍麗娜,杜方麓.市售烏頭炮制品種中的烏頭總堿、酯型生物堿、烏頭堿的含量檢查[J].中成藥,2007,29(12):14-15.

[7]LI Y P,TIANSJ,WANG G R.Chem ical compounds and analysis methods of aconitum[M].China J Chin Mater Med,2001,26(10):659-661.

[8]正航盛,馮年平.中藥飲片制川烏、制草烏中烏頭堿、次烏頭堿HPLC測定[J].藥物分析雜志,2005,25(1):34-36.

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