周秀華, 楊秀冬, 林海坤

(1.長(zhǎng)春大學(xué) 生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 , 吉林 長(zhǎng)春 130022;2.吉林龍灣國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局 , 吉林 輝南 135102; 3.吉林省輝南森林經(jīng)營(yíng)局 , 吉林 輝南 135102)

秋季阿什河水體真菌群落研究

周秀華1, 楊秀冬2, 林海坤3

(1.長(zhǎng)春大學(xué) 生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 , 吉林 長(zhǎng)春 130022;2.吉林龍灣國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局 , 吉林 輝南 135102; 3.吉林省輝南森林經(jīng)營(yíng)局 , 吉林 輝南 135102)

應(yīng)用真菌分類學(xué) 、群落生態(tài)學(xué)的基本研究方法 ,對(duì)秋季黑龍江省阿什河水體中真菌群落進(jìn)行了分離培養(yǎng) ,共獲得 16個(gè)菌株 。該水體中真菌種類較少 ,而且多為常見(jiàn)種類 ,這主要與分離方法以及人為活動(dòng)對(duì)該地區(qū)水體的干擾有關(guān)。

阿什河 ;真菌 ;分離

生物多樣性的保護(hù)全世界都極為關(guān)注 ,真菌是微生物中的一大類群 ,其中水生真菌是一類與人類生活息息相關(guān)的珍貴生物資源。在淡水生態(tài)環(huán)境的物質(zhì)循環(huán)中水生真菌扮演著重要的角色 ,它們分解物質(zhì)的有機(jī)組織并且釋放營(yíng)養(yǎng)和碳源 。目前 ,水生真菌的研究已成為真菌研究的熱點(diǎn)之一 ,水生真菌與其生活水體溫度、季節(jié)、地理、污染和著生基質(zhì)關(guān)系的研究逐步展開(kāi) 。我國(guó)對(duì)水生真菌的研究開(kāi)始于 20世紀(jì) 80年代 ,尚處于初級(jí)階段 。更多的分離培養(yǎng) 、鑒定水生真菌 ,不但對(duì)增加生物多樣性的內(nèi)容具有十分重要的意義 ,而且在環(huán)境指示 、污染處理、新功能結(jié)構(gòu)化合物以及生物防治等方面也有廣泛的利用價(jià)值[1]。

阿什河是松花江的一級(jí)支流 ,是哈爾濱市市區(qū)內(nèi)流程最長(zhǎng)的清水源河流 ,對(duì)于提高城市生態(tài)效應(yīng) 、防風(fēng)固沙 、保護(hù)植物多樣性具有重要作用。本文對(duì)秋季阿什河水體中的真菌進(jìn)行分離培養(yǎng) 、鑒定 ,初步了解該水體中真菌群落現(xiàn)狀 ,旨在為當(dāng)?shù)厮w保護(hù)提供參考。

1 材料和方法

1.1 樣品的采集

采集時(shí)間與地點(diǎn) :分別于 2007年 9、10、11月份在黑龍江省阿什河上游水體中取樣三次。

采集方法 :為了盡可能多地分離出水生真菌 ,分別采集了水樣和水草以及水中的枯枝木條 。 Ⅰ水樣 :將滅菌的塑料瓶在水面下開(kāi)蓋 ,灌滿水后在水中蓋好蓋子 ;Ⅱ水草及枯枝木條 :用滅菌后的鑷子將水草及枯枝木條夾入無(wú)菌的采集袋中封口保存。

1.2 樣品的分離

培養(yǎng)基 :所有樣品均采用兩種培養(yǎng)基進(jìn)行菌種分離。 Ⅰ馬丁氏培養(yǎng)基 :葡萄糖 10g,蛋白胨 5g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,孟加拉紅 (1mg/ml)3.3ml,瓊脂 20g,鏈霉素 30μg/ml,蒸餾水 1 000ml,pH 自然 。 ⅡPDA 綜合培養(yǎng)基 :馬鈴薯 200g,葡萄糖 20g,瓊脂 20g,KH2PO43g,MgSO41.5g,蒸餾水 1 000ml,pH 自然 。

水樣中真菌的分離 :在無(wú)菌操作下取滅菌的濾紙過(guò)濾河水 ,然后用無(wú)菌剪刀將濾紙剪成 5mm 的方塊 ,分別放入上述兩種培養(yǎng)基上 ,每個(gè)培養(yǎng)皿 5塊 ,設(shè)五個(gè)重復(fù) ,置于 25℃下倒置培養(yǎng) 。

水草及枯枝木條上真菌的分離 :用滅菌剪刀將材料剪成 5mm 左右的小段 ,分別放入上述兩種培養(yǎng)基上 ,每個(gè)培養(yǎng)皿 5段 ,每種樣品設(shè)五個(gè)重復(fù) ,置于 25℃下倒置培養(yǎng) 。

1.3 菌種鑒定

隨時(shí)觀察真菌的長(zhǎng)出情況 ,及時(shí)純化 ,采用 MEA 培養(yǎng)基進(jìn)行純化鑒定 ,MEA 配方 :麥芽浸膏 30g,大豆蛋白胨 3g,瓊脂 15g,蒸餾水 1 000ml,pH 5.4～5.8;對(duì)于在 MEA 培養(yǎng)基上未產(chǎn)生孢子的菌株用促孢培養(yǎng)基培養(yǎng) ,促孢培養(yǎng)基配方 :蔗糖 1g,瓊脂 5g,酵母浸膏 0.1g,KH2PO40.1g,蒸餾水 1 000ml,pH 自然 。純化后的菌種 ,在顯微鏡下依據(jù)形態(tài)學(xué)特征并結(jié)合在培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)特性進(jìn)行鑒定[2～4]。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

在培養(yǎng)過(guò)程中定期觀察培養(yǎng)基中菌落生長(zhǎng)情況 ,統(tǒng)計(jì)菌種的檢出率 。檢出率 =(分離到該菌種材料數(shù) /該處理材料總數(shù) ) ×100%[5]。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)過(guò)分離 、培養(yǎng)和純化 ,在采集的樣品中共分離出 16個(gè)真菌菌株 ,分別屬于 9個(gè)屬 12種 ,見(jiàn)表 1。其中 ,水樣中分離出 9個(gè)菌株 ,水草上分離出 10個(gè)菌株 ,枯枝木條上分離出 13個(gè)菌株 ?？葜δ緱l可能比較易于真菌附著 ,所以分離菌株較豐富 。在所分離真菌中 ,有 5個(gè)菌株在三種采集樣品中均有出現(xiàn) ,分別是Alternaria sp.、Aspergillus niger、Cladosporium sp.、Penicillium sp.1、Trichoder m a sp.1,除Cladosporium sp.外總體出現(xiàn)頻率較高 ,均超過(guò)了 10% 。另外 ,M ucorsp.的出現(xiàn)頻率也較高 。出現(xiàn)頻率較高的菌株在空氣中和土壤中也比較常見(jiàn) ,屬于氣生或陸生真菌中的腐生菌或污染菌 ,這些菌株在水體中的大量出現(xiàn)可能與近年來(lái)人們對(duì)阿什河的干擾有關(guān)。

表 1 各樣品中真菌的檢出率 (%)

3 結(jié) 論

本研究所得真菌種類不多 ,其原因可能與分離技術(shù)有關(guān) ,有些水生真菌比較難分離 ,或者是在人工培養(yǎng)基質(zhì)上難以生長(zhǎng)。在今后的研究中需要不斷改進(jìn)實(shí)驗(yàn)手段和方法 ,以便得到更多的菌株。

水生真菌對(duì)其生活的水生生態(tài)環(huán)境質(zhì)量變化比較敏感 ,有研究表明 ,水生真菌多樣性和區(qū)系特征在不同污染程度的水生生態(tài)環(huán)境中具有一定的特異性 ,一般來(lái)講 ,潔凈水體中水生真菌的多樣性要比被污染水體中的水生真菌多樣性豐富。本研究所得真菌種類較少 ,而且多為污染菌的另一個(gè)原因應(yīng)該與阿什河水質(zhì)現(xiàn)狀有關(guān)。近年來(lái)阿什河非法采沙屢禁不止 ,沿河企業(yè)不斷向河內(nèi)排放污水 ,加之阿什河上開(kāi)展漂流等旅游項(xiàng)目 ,均對(duì)阿什河水體造成了嚴(yán)重的污染。從保護(hù)水生真菌多樣性的角度出發(fā) ,阿什河水體污染的治理刻不容緩。

[1] 羅晶 ,張克勤 ,蔡磊 ,等.中國(guó)大陸淡水真菌研究 [J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ,2004,23(1):7-13.

[2] 中國(guó)科學(xué)微生物研究所.常見(jiàn)與常用真菌 [M].南京 :江蘇科學(xué)出版社 ,1984:30-1401.

[3] H.L. 巴尼特 ,B.B. 享特.半知菌屬圖解 [M].沈崇堯 ,譯.上海 : 科學(xué)出版社 ,1977:5-376.

[4] 戴芳瀾.真菌的形態(tài)和分類 [M].南京 :江蘇科學(xué)出版社 ,1987:45-1651.

[5] 周秀華 ,崔磊 ,宋瑞清.樟子松葉棲真菌的群落結(jié)構(gòu) [J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) ,2006,34(2):30-32.

[6] 周秀華.樟子松芽棲真菌群落結(jié)構(gòu) [J].長(zhǎng)春大學(xué)學(xué)報(bào) ,2006,16(5):77-78.

責(zé)任編輯:鐘 聲

Study on aquatic mycoflora i n autumn in Ashihe Valley

ZHOU Xiu-hua1,YANG Xiu-dong2,L IN Hai-kun3

(1.Bio-Scientific and Technical College,Changchun University,Changchun 130022,China; 2.Longwan NationalNature Reservation Administration Bureau of Jilin Province,Huinan 135102,China; 3.Huinan ForestManagementBureau of Jilin Province,Huinan 135102,China)

An investigation is conducted to study aquatic mycoflora in autumn in Ashihe Valley by the basic methods ofmycology and community ecology.A totalof 16 species fungi are isolated.There are few species of fungi inAshiheValley,and the species identified are common ones.The importance reasons are the identifymethod and the human disturbances in this area.

Ashihe Valley;fungi;isolation

S718.81

A

1009-3907(2010)06-0029-02

2010-04-03

周秀華 (1978-),女 ,黑龍江同江人 ,講師 ,博士研究生 ,主要從事園林植物保護(hù)方面研究 。