張義凱,韓小嬌,金洪,陳秀靈,崔秀敏*,吳小賓,徐艷如

(1山東農業(yè)大學資源與環(huán)境學院,山東泰安271018;2中國林業(yè)科學研究院,北京100091;3國際網絡竹藤中心,北京100102)

銅(Cu)是植物生長發(fā)育的必需微量元素,參與植物的光合作用等許多過程,在植物的新陳代謝過程中起著重要的作用,但植物組織中過量的Cu會對植物產生毒害作用[1]。目前Cu礦的開采和冶煉廠三廢的排放,含Cu農業(yè)化學物質(殺真菌劑,殺蟲劑和化肥)和有機肥(高Cu豬糞,雞糞和廄肥)的施用可使農田土壤,特別是溫室土壤含Cu量達到一般農田土壤的幾倍乃至幾十倍[2-4];溫室土壤重金屬污染已變得日益嚴峻[5-6]。因此,研究重金屬毒害的緩解機理已成為農業(yè)可持續(xù)發(fā)展中亟待解決的問題。

一氧化氮(nitric oxide,NO)是最近發(fā)現的生物體內的生長調節(jié)物質,同時也是一種活性極強的兩性分子,具有毒害和保護細胞的雙重功效;但NO的這種毒害或保護效應與細胞內生理環(huán)境和NO的有效生理濃度、作用部位及細胞內生理環(huán)境不同而異[7-8]。NO廣泛存在于植物組織中,參與植物對各種非生物脅迫的調節(jié)。據報道,NO能緩解鹽脅迫對黃瓜、水稻、小麥和玉米的傷害作用[9-12];能通過誘導氣孔關閉[13]和增強根細胞質膜內向K+通道的活性[14]等提高小麥的抗旱性,能緩解Cd脅迫對玉米、水稻、向日葵的傷害[15-16];能緩解Fe、Cu脅迫對玉米、人參、水稻的傷害[17-19];此外還能促進Cu脅迫下小麥種子的萌發(fā)[20]。然而,目前關于NO對Cu脅迫下番茄光合作用和礦質元素的研究尚未見報道。為此,開展了NO對Cu脅迫下的番茄光合特性,超微弱發(fā)光(ultraweak luminescence,UWL)、熒光、磷光強度以及礦質營養(yǎng)元素吸收的影響研究,為緩解重金屬毒害提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

試驗在山東農業(yè)大學溫室內進行。番茄品種為“玫瑰”(Lycopersicon esculentum Mill.cv.Meigui)。種子經55℃溫湯浸種消毒15 min,然后在潤濕的吸水紙上26℃催芽。待種子露白后,播于洗凈的蛭石中,萌發(fā)后用1/4 Hoagland[21]營養(yǎng)液澆灌。當幼苗具有3～4片真葉時,挑選生長一致的植株洗凈根部蛭石后,移栽于5 L塑料盆中,用厚度為3 cm的泡沫塑料板做成鍥形蓋子,覆蓋在塑料盆頂部。每盆栽5株,用1/2 Hoagland營養(yǎng)液進行栽培。1周后換成完全營養(yǎng)液,此后每3 d更換一次營養(yǎng)液。營養(yǎng)液栽培期間用電動氣泵24 h連續(xù)通氣。當植株具有5～6片真葉時,對番茄幼苗進行處理。

NO供體硝普鈉[Na2Fe(CN)5]NO,SNP,購自Sigma公司,先用蒸餾水配成200 mmol/L的母液,4℃避光保存,用時按所需濃度稀釋。血紅蛋白(Hb,Sigma公司生產,上海生工分裝)為NO的清除劑;其他試劑均為國產分析純。由于SNP分解的產物除NO外,還有NO2-/NO2-和Fe(CN)25-等陰離子[13],在試驗中加入一定濃度的NaNO2/NaNO3和Na3Fe(CN)6(后者也是SNP的相似物,但不能產生NO)作為相關對照,二者在本試驗條件下均不能產生NO。

試驗設6個處理:1)CK,Hoagland完全營養(yǎng)液為對照 ;2)50 μ mol/L CuCl2;3)50 μ mol/L CuCl2+100 μ mol/L SNP;4)50 μ mol/L CuCl2+100 μ mol/L NaNO2+100 μ mol/L NaNO3(其中 NaNO2+NaNO3以NOx-代替 ,下同);5)50 μ mol/L CuCl2+100 μ mol/L Na3Fe(CN)6;6)50 μ mol/L CuCl2+100 μ mol/L SNP+0.1%Hb,分別用 CK 、Cu 、Cu+S 、Cu+N 、Cu+F 、Cu+S+H表示,3次重復,在溫室內隨機排列。處理期間每天更換營養(yǎng)液,用低濃度KOH或HCl調節(jié)至pH 5±0.2。溫室內光照約12 h,白天最高溫度32℃,夜間最低溫度15℃。處理8 d后,取相同節(jié)位的葉片用于分析測定。

1.2 測定項目與方法

葉綠素含量的測定:取植株中上部功能葉片,用直徑為1cm的打孔器采取葉圓片,加80%的丙酮和少許MgCO3,低溫避光條件下勻漿,離心,采用Arnon的方法測定葉綠素含量[22]。

光合參數的測定:凈光合速率(Pn)、蒸騰速率(Tr)、氣孔導度(Gs)、胞間CO2濃度(Ci)用英國PP-systems公司生產的CIRAS-1便攜式光合系統測定,測定光強為 800 μ mol/(m2·s)。

超微弱發(fā)光強度的測定:參照張新華等[23]的方法。取葉片鮮重 0.5 g左右,白熾燈[光強 10 μ mol/(m2·s)]照射5 min后立即放入測量杯中測量超微弱發(fā)光。超微弱發(fā)光儀(BPCL)由中國科學院生物物理研究所研制。測量參數為:調節(jié)高壓為800 V,標準光源發(fā)光強度7000 counts/s,本底強度5 counts/s,采樣時間200 s,采樣間隔時間1 s。樣品測定在暗室及恒溫(20±1)℃、恒濕(RH 75%±2%)條件下進行。

葉片熒光強度的測定:測定儀器為日立F-4500熒光儀,激發(fā)光EX波長440 nm,發(fā)射光EM波長 500～ 700 nm,縫寬 EX/EM 為 10.0 nm/5.0 nm,掃描速度12000 nm/min,掃描間隔EX/EM為10.0 nm/5.0 nm[24]。

葉片磷光強度的測定:儀器為日立F-4500熒光儀,EX波長210 nm,EM 波長400～500 nm,縫寬EX/EM 10.0 nm/5.0 nm,掃描速度240 nm/min,掃描間隔EX/EM 10.0 nm/5.0 nm[24]。

礦質元素的測定:樣品在105℃下殺青30 min,并在65～70℃下烘干至恒重,樣品磨碎過篩,HNO3-HClO4法消煮后,采用FP640型火焰分光光度計測定K,AA370MC型原子吸收分光光度法測定Ca、Fe、Cu 、Zn、Mn等礦質元素的含量[25]。

SAS統計軟件對平均數用Duncan’s新復極差法進行多重比較。

2 結果與分析

2.1 外源NO對銅脅迫下番茄葉片葉綠素含量的影響

表1看出,50 μ mol/L的Cu處理(Cu)顯著降低番茄葉片的葉綠素a、葉綠素b和葉綠素a+b的含量,降低葉綠素a/b比值,而外施100 μ mol/L的SNP處理(Cu+S)能顯著緩解Cu脅迫下對番茄葉片葉綠素a、葉綠素b和葉綠素a+b的抑制,提高葉綠素a/b比值;在添加NO清除劑血紅蛋白處理(Cu+S+H)后,SNP的緩解效果被消除。在Cu處理液中加入 100 μ mol/L NO-x(Cu+N)或 100 μ mol/L 亞鐵氰化鈉(Cu+F),與Cu脅迫處理差異不顯著。

表1 外源NO對銅脅迫下番茄葉片葉綠素含量的影響Table 1 Effects of exogenous nitric oxide on the chlorophyll contents in leaves of tomato under Cu stress(mg/kg,FW)

2.2 外源NO對銅脅迫下番茄葉片光合參數的影響

由圖1看出,與CK 處理相比,50 μ mol/L的Cu處理8 d番茄葉片的Pn,Tr和Gs顯著降低,番茄葉片Ci顯著上升,而外施100 μ mol/L的SNP處理(Cu+S)能顯著提高Cu脅迫下番茄葉片的Pn、Tr和Gs,降低番茄葉片Ci;用NO清除劑血紅蛋白處理(Cu+S+H)后,顯著消除SNP的緩解效果,而Tr未達到顯著水平。在50 μ mol/L的Cu處理培養(yǎng)液中加入100μ mol/L NO-x(Cu+N)或 100 μ mol/L 亞鐵氰化鈉(Cu+F),與Cu處理相比,對番茄葉片光合參數影響差異不顯著。

圖1 外源NO對銅脅迫下番茄葉片凈光合速率Pn、蒸騰速率 Tr、氣孔導度 Gs和胞間 CO2濃度 Ci的影響Fig.1 Effects of exogenous nitric oxide on the net photosynthetic rate(Pn),transpiration rate(Tr),stomatal conductance(Gs)and intercellular CO2concentration(Ci)in leaves of tomato under Cu stress

2.3 外源NO對銅脅迫下番茄葉片生物發(fā)光強度的影響

50 μ mol/L的Cu脅迫處理顯著提高番茄葉片UWL強度、熒光發(fā)光強度和磷光發(fā)光強度,外施100μ mol/L SNP處理(Cu+S)顯著降低UWL、熒光和磷光的發(fā)光強度,然而,添加NO清除劑處理(Cu+S+H)可以顯著消除SNP的效果。在Cu處理液中加入 100 μ mol/L NO-x(Cu+N)或100μ mol/L 亞鐵氰化鈉(Cu+F),與Cu處理相比,對番茄葉片UWL、熒光強度的影響差異不顯著,磷光強度顯著增加(圖2)。

圖2 外源NO對銅脅迫下番茄葉片超微弱發(fā)光強度、熒光強度和磷光強度的影響Fig.2 Effects of exogenous nitric oxide on ultraweak luminescence intensity,fluorescence intensity,phosphorescence intensity in leaves of tomato under copper stress

2.4 外源NO對銅脅迫下番茄植株礦質營養(yǎng)元素含量的影響

與CK相比,50 μ mol/L的Cu顯著增加番茄葉片、根系中的Cu含量,顯著降低番茄葉片中Ca、Fe、Zn、Mn和根系中K 、Fe、Zn 的含量 ,然而顯著增加根系中Ca的含量,對葉片中K含量和根系中Mn含量影響不顯著。與Cu脅迫處理相比,施加SNP處理(Cu+S)略微降低葉片、根系中Cu的含量,但未達到顯著水平;SNP顯著提高葉片中Ca、Fe、Zn、Mn以及根系中K、Fe、Zn的含量,并且顯著降低根系中Ca、Mn的含量;在添加NO清除劑血紅蛋白處理(Cu+S+H)后,SNP的效果被消除。在Cu處理液中加入 100 μ mol/L NO-x(Cu+N)或 100 μ mol/L 亞鐵氰化鈉(Cu+F),與Cu脅迫處理相比,對番茄葉片中K、Ca、Fe、Cu、Zn 、Mn 含量影響不顯著,對番茄根系中K、Ca含量影響差異不顯著;而Cu+N處理顯著降低番茄根系中Fe、Cu、Zn、Mn含量,Cu+F處理顯著增加根系中Fe含量,降低Cu、Mn含量(表2)。

3 討論

葉綠素含量是反映光合強度的重要指標。植物受到重金屬脅迫時,各種生理過程都會受到影響,直接或間接地影響到葉綠素的含量。Cu脅迫下,番茄葉片葉綠素含量顯著下降。施加SNP顯著增加番茄葉片葉綠素a、葉綠素 b、葉綠素a+b的含量,提高葉綠素a/b比值(表1);而添加血紅蛋白后,SNP的效果被顯著消除,施用NO-x和Na3Fe(CN)6,均不能減輕Cu脅迫對葉綠素含量的影響。SNP是NO的供體,而NO-x是NO的分解產物,Na3Fe(CN)6是SNP的相似物或分解產物,兩者均不能產生NO,血紅蛋白是NO的清除劑。因此,可以得出SNP釋放出NO,提高番茄葉片葉綠素含量,維持Cu脅迫下番茄較高的光合速率。

光合作用的強弱對于植物生長、產量及其抗逆性都具有十分重要的影響,常作為判斷植物生長和抗逆性大小的指標。Cu脅迫下,引起植物葉片光合速率降低的植物自身因素主要有兩類,一是受氣孔導度影響的氣孔限制;二是受葉肉細胞光合活性的下降影響的非氣孔限制。Farquhar和Sharkey[26]認為,Ci值的大小是評判氣孔限制和非氣孔限制的依據。Pn、Gs和Ci值同時下降時,Pn的下降為氣孔限制;相反,如果葉片Pn的降低伴隨著Ci值的提高,說明光合作用的限制因素是非氣孔限制。本試驗結果表明,Cu脅迫處理8 d后,番茄葉片的Pn、Gs下降,Ci升高(圖1),說明此時非氣孔限制成為主要因素;而外施NO能顯著減輕Cu脅迫下番茄葉片Pn、Tr和Gs的下降幅度,從而抑制了番茄葉肉細胞光合活性下降,提高光合速率。

表2 外源NO對Cu脅迫下番茄植株礦質營養(yǎng)元素含量的影響(mg/kg,DW)Table 2 Effects of exogenous nitric oxide on mineral contents in tomato under Cu stress

植物UWL與植物體的氧化代謝、信息傳遞、光合作用、細胞分裂、死亡及生長調控等基本生命過程存在著內在聯系,也與植物的抗逆性密切相關[27]。當植物受到外界不良環(huán)境刺激時,活性氧在體內積累,其中羥自由基與細胞膜上多聚不飽和脂肪酸通過脂質過氧化連鎖反應,形成單線態(tài)氧,處于激發(fā)態(tài)的單線態(tài)氧退激回到基態(tài)時向外發(fā)射光子,形成UWL[28]。本試驗條件下,Cu脅迫顯著增加番茄葉片UWL強度(圖2),這與活性氧機制[29]相符合。外施NO顯著降低葉片UWL強度,表明NO能增強番茄體內活性氧清除機制,保護質膜免受重金屬傷害,維持膜結構完整性。Cu脅迫下,番茄的光合作用受到顯著抑制,過多的光能以熒光的形式或熱能耗散,以保護光合作用機構免于強光破壞。本研究表明,過量的Cu能顯著提高番茄葉片的熒光強度,表明非化學能量耗散加強,葉片光能利用率降低。Cu脅迫使光合電子傳遞過程受到抑制[30],光合機構受到損害,不利于番茄葉片把所捕獲的光能轉變?yōu)榛瘜W能。而外施NO能顯著降低葉片的熒光強度,緩解Cu毒害對光合機構的破壞。磷光是一些處于第一電子激發(fā)三重態(tài)的有機分子發(fā)生輻射躍遷而下降到基態(tài)的各振動能級時產生的。通常情況下,組成蛋白質的氨基酸可以產生磷光發(fā)射[31]。在不良環(huán)境下植物葉片內的蛋白質受到脅迫的“刺激”,體內的氨基酸分子會發(fā)生大量的能級躍遷,導致植物葉片磷光強度增加[32]。在Cu脅迫處理8 d后,番茄葉片磷光強度增加,而外施NO能顯著降低葉片磷光強度,表明NO能減輕重金屬Cu對番茄葉片蛋白質的毒害。由此可以推斷,NO有可能通過降低重金屬對葉綠體中蛋白質的影響,減少葉綠素的分解,保護葉綠體結構和功能,從而提高重金屬脅迫下的光合速率。

重金屬Cu對植物的傷害是多方面的。作為植物必需營養(yǎng)元素,過量的Cu吸收會打破養(yǎng)分平衡,抑制營養(yǎng)元素的吸收和運轉。Alva等[33]和黎耿碧等[34]報道,過量的Cu明顯抑制柑橘對N、P、K、Ca、Mg、Fe、Zn、Mn等必需礦質元素的吸收;Alaoui-Sossé等[35]認為,Cu脅迫顯著減少菠菜葉片中K、Mg、Ca、Fe、Na的含量。本試驗表明,外源NO可顯著提高根系中K、Zn、Fe 的含量以及葉片中Ca、Zn、Fe、Mn 的含量,降低根系中Ca、Mn的含量。然而,NO不能顯著抑制Cu的吸收(表2),表明外源NO可能通過某種機制提高番茄對K、Ca、Fe、Zn、Mn的選擇性吸收,維持胞質離子穩(wěn)態(tài),從而緩解Cu的毒害。植物受到Cu毒害時經常伴隨失綠癥的出現,而失綠癥很可能是由于缺Fe引起。Alva等[33]報道,過量的Cu顯著抑制柑橘對Fe的吸收;Lidon等[36]也報道,過量Cu會抑制水稻對Ca、Fe、Mn等的吸收。Dokiya等[37]在溶液培養(yǎng)中證實,Fe含量增加能夠抑制水稻幼苗對Cu的吸收。Chen等[38]報道,Fe缺乏時能顯著增加鴨跖草中Cu的含量。說明Cu和Fe在一定濃度范圍內存在拮抗作用。Graziano等[39]發(fā)現,NO對植物葉片中Fe向葉綠體的分配具有重要的作用。本試驗結果表明,外施NO能顯著增加番茄葉片和根系中Fe、Zn等的含量。由此推斷,外源NO提高葉綠素含量的原因可能是通過提高對Fe、Zn等的吸收和運輸,增加向葉綠體的分配,進而提高葉片葉綠素的含量和保護葉綠體結構的完整性,維持番茄較高的光合速率。

[1]Marschner H.Mineral nutrition of higher plants(2nd)[M].London:Academic Press,1995.333-347.

[2]Kaplan M.Accumulation of Cu in soils and leaves of tomato plants in greenhouses in Turkey[J].J.Plant Nutr.,1999,22:237-244.

[3]Brun L A,Maillet J,Hinsinger P et al.Evaluation of copper availability to plants in copper-contaminated vineyard soils[J].Environ.Pollut.,2001,111:293-302.

[4]盧東,宗良綱,肖興基,等.華東典型地區(qū)有機與常規(guī)農業(yè)土壤重金屬含量的比較研究[J].農業(yè)環(huán)境科學學報,2005,24(1):143-147.Lu D,Zong L G,Xiao X J et al.A comparison of heavy metals concentration in soils of organic and conventional farming in typical regions of eastern China[J].J.Agric.Environ.Sci.,2005,24(1):143-147.

[5]黃治平,徐斌,張克強,楊秀春.連續(xù)四年施用規(guī)?；i場豬糞溫室土壤重金屬積累研究[J].農業(yè)工程學報,2007,23(11):239-243.Huang Z P,Xu B,Zhang K Q,Yang X C.Accumulation of heavy metals in the four years’continual swine manure-applied greenhouse soils[J].Trans.Chin.Soc.Agri.Eng.,2007,23(11):239-243.

[6]曾希柏,李蓮芳,白玲玉,等.山東壽光農業(yè)利用方式對土壤砷累積的影響[J].應用生態(tài)學報,2007,18(2):310-316.Zeng X B,Li L F,Bai L Y et al.Arsenic accumulation in different agricultural soils in Shouguang of Shandong province[J].Chin.J.Appl.Ecol.,2007,18(2):310-316.

[7]Beligni M V,Lamattina L.Is nitric oxide toxic or protective?[J]Trends Plant Sci.,1999,4:299-300.

[8]Beligni M V,Lamattina L.Nitric oxide counteracts cytotoxic processes mediated by reactive oxygen species in plant tissues[J].Planta,1999,208:337-344.

[9]Shi Q H,Ding F,Wang X F,Wei M.Exogenous nitric oxide protect cucumber roots against oxidative stress induced by salt stress[J].Plant Physiol.Biochem.,2007,45:542-550.

[10]阮海華,沈文飆,葉茂炳,徐朗萊.一氧化氮對鹽脅迫下小麥葉片氧化損傷的保護效應[J].科學通報,2001,46(23):1993-1997.Ruan H H,Shen W B,Ye M B,Xu L L.Protection of nitric oxide on salt induced membrane oxidation inwheat leaves[J].Bull.Sci.,2001,46(23):1993-1997.

[11]張艷艷,劉俊,劉友良.一氧化氮緩解鹽脅迫對玉米生長的抑制作用[J].植物生理與分子生物學學報,2004,30(4):455-459.Zhang Y Y,Liu J,Liu Y L.Nitric oxide alleviates growth inhibition of maize seedlings underNaCl stress[J].J.Plant Physiol.Mol.Biol.,2004,30(4):455-459.

[12]Uchida A,Jagendorf A T,Hibino T et al.Effectsof hydrogen peroxide and nitric oxide on both salt and heat stress tolerance in rice[J].Plant Sci.,2002,163:515-523.

[13]Mata C G,Lamattina L.Nitric oxide induces stomatal closure andenhances the adaptive plant responses against drought stress[J].Plant Physiol.,2001,126(3):1196-1204.

[14]聞玉,趙翔,張驍.水分脅迫下一氧化氮對小麥幼苗根系生長和吸收的影響[J].作物學報,2008,34(2):344-348.Wen Y,Zhao X,Zhang X.Effects of nitric oxide on root growth and absorption in wheat seedlings in response to waterstress[J].Acta A-gron.Sin.,2008,34(2):344-348.

[15]Hsu Y T,Kao C H.Cadmium toxicity is reduced by nitric oxide in rice leaves[J].Plant Growth Regul.,2004,42:227-238.

[16]Laspina N V,Groppa M D,Tomaro M L,Benavides M P.Nitric oxide protects sunflower leaves against Cd-induced oxidative stress[J].Plant Sci.,2005,169:323-330.

[17]敬巖,孫寶騰,符建榮.一氧化氮改善鐵脅迫玉米光合組織結構及其活性[J].植物營養(yǎng)與肥料學報,2007,13(5):809-815.Jing Y,Sun B T,Fu J R.Nitric oxide improves photosynthetic structure and activity in iron-deficient maize[J].Plant Nutri.Fert.Sci.,2007,13(5):809-815.

[18]Yu C C,Hung K T,Kao C H.Nitric oxide reduces Cu toxicity and Cu-induced NH4+accumulation in rice leaves[J].J.Plant Physiol.,2005,162:319-330.

[19]Tewari R K,Hahn E J,Paek K Y.Modulation of copper toxicity-induced oxidative damage by nitric oxide supply in the adventitious roots of Panax ginseng[J].Plant Cell Rep.,2008,27:171-181.

[20]Hu K D,Hu L Y,Li Y H et al.Protective roles of nitric oxide on germination and antioxidant metabolism in wheat seeds under copper stress[J].Plant Growth Regul.,2007,53:173-183.

[21]Hoagland D R,Arnon D I.The water-culture method for growing plants without soil[J].Calif.Expt.Sta.Circ.,1950,347:1-39.

[22]Arnon D I.Copper enzymes in isolated chloroplasts,polyphenol oxidase in Brta vulgaris[J].Plant Physiol.,1949,24:1-15.

[23]張新華,楊洪強,李富軍,張偉.杏花開放過程中超弱發(fā)光和ATP及活性氧含量的變化[J].植物生理與分子生物學報,2004,30(1):41-44.Zhang X H,Yang H Q,Li F J,Zhang W.Changes in ultraweak luminescence,ATP and active oxygen contents during apricot florescence[J].J.Plant Physiol.Mol.Biol.,2004,30(1):41-44.

[24]楊一心,趙天成,白晉濤,等.丙氨酸咪唑釤的三維熒光激發(fā)和發(fā)射光譜[J].光子學報,2002,31(9):1165-1168.Yang Y X,Zhao T C,Bai J T et al.Three-dimension fluorescence excitation and emission spectrum of alanine imidazole Sm compound[J].Acta Photon.Sin.,2002,31(9):1165-1168.

[25]中國土壤學會.土壤農業(yè)化學分析方法[M].北京:中國農業(yè)科技出版社,2000.315-336.Soil Science Society of China.Analyses method of soil and agricultural chemistry[M].Beijing:China Agricultural Science andTechnology Press,2000.315-336.

[26]Farquhar G D,Sharkey T D.Stomatal conductance and photosynthesis[J].Ann.Rev.Plant Physiol.,1982,33:317-3451.

[27]王維江,韓俊英.生物超弱發(fā)光機制及其檢測方法研究進展[J].廣東工業(yè)大學學報,2000,17(1):49-54.Wang W J,Han J Y.Advance in the study of ultra-weak bioluminescent mechanisms and detecting methods[J].J.Guangdong Univ.Tech.,2000,17(1):49-54.

[28]Foyer C H,Lopez-Delgado H,Dat J F,Scott I M.Hydrogen peroxide-and glutathione-associated mechanisms of acclimatory stress tolerance and signalling[J].Physiol.Plant,1997,100:241-254.

[29]Boveris A,Cadenas E,Chance B.Ultraweak chemiluminescence:a sensitive assay for oxidative radical reactions[J].Fed.Proc.,1981,40:125-128.

[30]Maksymiec W,Wójcik M,Krupa Z.Variation in oxidative stress and photochemical activity in Arabidopsis thaliana leaves subjected to cadmium and excess copper in the presence or absence of jasmonate and ascorbate[J].Chemosphere,2007,66:421-427.

[31]魏玉霞,董川.磷光分析法在生命科學中的應用新進展[J].生命的化學,2003,23(4):320-322.Wei Y X,Dong C.Applicationprogress of phosphorimetry analysis in life science[J].Chem.Life,2003,23(4):320-322.

[32]國穎,楊洪強.高溫對平邑甜茶幼苗生物發(fā)光與能量代謝的影響[J].園藝學報,2008,35(1):99-102.Guo Y,Yang H Q.Effects of high temperature on bioluminescence and energy metabolism of Malus hupehensis(Pamp)Rehd.var.pingyiensis Jiang[J].Acta Hort.Sin.,2008,35(1):99-102.

[33]Alva A K,Chen E Q.Effects of external copper concentrations on uptake of trace elements by citrus seedlings[J].Soil Sci.,1995,159:59-64.

[34]黎耿碧,陳二欽,Alva A K.外界銅離子濃度對柑桔小苗常量元素吸收特性的影響[J].廣西農業(yè)大學學報,1996,15(3):195-201.Li G B,Chen E Q,Alva A K.Effects of external copper concentrations on uptake of routine elements by citrus seedling[J].J.Guangxi Agric.Biol.Sci.,1996,15(3):195-201.

[35]Alaoui-Sossé B,Genet P,Vinit-Dunand F et al.Effect of copperon growth in cucumber plants(Cucumis sativus)and its relationships with carbohydrate accumulation and changes in ion contents[J].Plant Sci.,2004,166:1213-1218.

[36]Lidon F C,Henriques F S.Copper toxicity in rice:diagnostic criteria and effect on tissue Mn and Fe[J].Soil Sci.,1992,54:130-135.

[37]Dokiya Y,Owa N,Mitsui S.Comparative physiological study of iron,manganese and copper adsorption by plantsⅢ.Interaction between Fe,Mn and Cu onthe absorptionof elementsby rice and barley seedlings[J].Soil Sci.Plant Nutr.,1968,14:169-174.

[38]Chen Y,Shi J,Tian G et al.Fe deficiency induces Cu uptake and accumulation in Commelina communis[J].Plant Sci.,2004,166:1371-1377.

[39]Graziano M,Beligni M V,Lamattina L.Nitric oxide improves internal iron availability in plants[J].Plant Physiol.,2002,130:1852-1859.