周 越，陳建偉

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬連云港市中醫(yī)院，江蘇連云港 222000;2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210046)

正交試驗(yàn)法優(yōu)選糖腎丸提取工藝

周 越1，陳建偉2＊

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬連云港市中醫(yī)院，江蘇連云港 222000;2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210046)

目的篩選和優(yōu)化糖腎丸提取工藝。方法采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以高效液相色譜法測(cè)定提取液中丹參酮ⅡA含量為指標(biāo)，優(yōu)選糖腎丸的提取工藝。結(jié)果糖腎丸的最佳工藝為加6倍85%乙醇，提取2次，每次提取2 h。結(jié)論糖腎丸提取工藝穩(wěn)定，可行。

丹參酮ⅡA;高效液相色譜法;正交設(shè)計(jì)

糖腎丸為南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬連云港醫(yī)院經(jīng)驗(yàn)方劑，由黃芪、生地黃、丹參、茯苓、車(chē)前子等中藥組成，具有益氣滋陰，活血通絡(luò)，利水化痰之功效，臨床用于糖尿病腎病的治療。本試驗(yàn)對(duì)糖腎丸的提取工藝進(jìn)行了研究，采用正交設(shè)計(jì)法，優(yōu)選出最佳提取工藝，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司生命科學(xué)與化學(xué)分析儀器部);電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠);ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);電熱恒溫水浴鍋(江蘇省醫(yī)療器械廠)。丹參酮ⅡA對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110766-200417);糖腎丸方中藥材均購(gòu)自安徽海鑫中藥飲片有限公司。甲醇為色譜純(南京化學(xué)試劑有限公司)，水為二級(jí)蒸餾水，其它實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參酮ⅡA含量測(cè)定[1-2]

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相:甲醇-水(82∶18);檢測(cè)波長(zhǎng)為 270 nm，柱溫:室溫;流速:1.0 mL/min;理論板數(shù):按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.1.2 溶液制備 精密稱(chēng)取丹參酮ⅡA對(duì)照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;精密量取2 mL，置25 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(每1 mL含丹參酮ⅡA16μg)。

取本品適量，研細(xì)(通過(guò)4號(hào)篩)，精密稱(chēng)取1 g，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

按處方量比例稱(chēng)取除去丹參的其他藥材，依照制粒方法及供試品溶液制備方法制備不含丹參的陰性對(duì)照品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察 線性關(guān)系考察:準(zhǔn)確配置質(zhì)量濃度為 9.34 ，18.67 ，28.02 ，37.36 ，46.70μg mL 丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液，精密吸取10μL進(jìn)樣，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:Y=265.1X-11.5，r=0.999 5(n=5)。結(jié)果表明丹參酮ⅡA濃度在9.34～46.70μg范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按上述色譜條件測(cè)定，連續(xù)測(cè)定5次峰面積。結(jié)果RSD為0.54%(n=5)，表明精密度良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱(chēng)取已知含量的同一批號(hào)樣品細(xì)粉 0.1 g，共 5份，分別準(zhǔn)確加入濃度為18.67μg/mL的對(duì)照品溶液各4 mL ，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備樣品溶液，依法測(cè)定并計(jì)算加樣回收率，得平均回收率為99.17%，RSD為1.16%。

2.2 正交設(shè)計(jì) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，對(duì)影響提取工藝的主要因素提取溶媒(乙醇)濃度(因素A)、溶媒用量(因素B)、提取時(shí)間(因素C)及提取次數(shù)(因素D)進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，各因素水平見(jiàn)表1[3-4]。正交設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交設(shè)計(jì)表

表3 方差分析結(jié)果表

由表2、表3結(jié)果可以得出，各因素影響大小順序?yàn)镃＞B＞A＞D，因素C對(duì)提取率的影響差異有顯著性，因素A、因素B、因素D對(duì)提取率的影響差異無(wú)顯著性。故最終選取最佳工藝為A3B1C3D2。即加6倍85%乙醇，提取2次，每次提取2 h。

按優(yōu)選工藝提取3批樣品進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果丹參酮ⅡA含量分別為0.116 4、0.108 5、0.112 7 mg/g，RSD為2.84%。驗(yàn)證結(jié)果表明工藝基本穩(wěn)定可行。

3 討論

本試驗(yàn)利用正交設(shè)計(jì)將糖腎丸各因素、各水平之間的組合均勻搭配、合理安排，找出影響提取中的主要因素、次要因素及較優(yōu)組合，確定出糖腎丸的最佳提取工藝[5]。

本方重用丹參祛瘀活血通絡(luò)，為方中臣藥。故選擇功效重要且成分確切的丹參為醇提工藝考察對(duì)象。本試驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定丹參酮ⅡA的含量作為檢測(cè)指標(biāo)，結(jié)果表明，該法靈敏度高、重現(xiàn)性好。

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作者簡(jiǎn)介:白雅茹(1963-)，女，主管藥師。研究方向:中藥分析。

R285.5

A

1007-4813(2010)05-0769-02

周 越(1978-)，女，在讀碩士研究生，主管中藥師。研究方向:中藥制劑工藝與質(zhì)量研究。

＊通信作者:陳建偉，男，教授，博士研究生導(dǎo)師。Tel:025-85811153，E-mail:chenjw55@sina.com

2010-06-07)