毛曉紅 牟群芳 徐 敏 王 玨 張婷婷 張繼國

(1. 河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院，河北 石家莊 050031； 2.青島大學醫(yī)學院，山東 青島 266021；3.泰山醫(yī)學院，山東 泰安 271016)

吲哚-2,3-二酮是來自于龍蝦并維持其生存所必需的一種天然海洋活性物質(zhì)，現(xiàn)已證明也是存在于海洋生物、中藥青黛和人體內(nèi)的天然活性物質(zhì)[1]。吲哚-2,3-二酮是成分單一的紫紅色有機天然物質(zhì)，化學結構明確，其單體己可合成。研究表明，作為一種結構明確的天然海洋活性物質(zhì)，吲哚-2,3-二酮具有抗病毒[2,3]、抗真菌[4]、抗腫瘤[5]、抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用[6]且毒性較小[7]，陰道炎是婦科常見病，白色念珠菌也是感染源之一，為開發(fā)其新的藥用價值，對吲哚-2,3-二酮用于制備治療陰道炎外用制劑進行研究。

1 材料與方法

1.1試劑和儀器 吲哚-2,3-二酮明膠栓劑：由青島醫(yī)學院藥理組提供。雙唑泰栓：雙唑泰栓由錦州市制藥五廠生產(chǎn)，主要成分：克霉唑、甲硝唑、醋酸氯已定。

1.2實驗動物 雌性SD大鼠100只，體重160～180 g,未交配，由青島市藥檢所實驗動物中心提供，置于室溫(19±2)℃,24小時晝夜循環(huán)光照條件下生活，自由飲水及進食，于實驗前適應實驗室1周。

1.3實驗方法

1.3.1造模 將50只大鼠從陰道口注入濃度為5.6×107/ml的白色念珠菌液0.1 ml，每天1次，連續(xù)2次，10 d后取大鼠陰道分泌物做菌培養(yǎng)，培養(yǎng)出現(xiàn)陽性結果即表明真菌性陰道炎造模成功。按同樣的方法，將濃度為5×108/ml脆弱擬桿菌液0.1 ml注入其余50只大鼠陰道內(nèi)，連續(xù)2次，10 d后取大鼠陰道分泌物做菌培養(yǎng)，細菌培養(yǎng)陽性，說明厭氧菌性陰道炎造模成功。

1.3.2給藥，結果統(tǒng)計 將40只感染白色念珠菌大鼠隨機分成5組，每組8只，設置不給藥的模型組、陽性對照組(雙唑泰栓劑，每天陰道塞入含50 mg/kg的栓劑，連續(xù)7d)和吲哚-2,3-二酮明膠栓劑高、中、低劑量組(劑量分別為50，25，10 mg/kg，每天陰道塞入受試栓劑1次，連續(xù)7 d)，各組動物分別在給藥前，給藥后4 d、8 d取陰道分泌物，然后置沙氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)，進行菌落計數(shù)。

取40只脆弱擬桿菌感染SD大鼠模型，用上述方法以相同分組、劑量給藥、相同時間取陰道分泌物在厭氧菌專用培養(yǎng)基上培養(yǎng)，置37℃厭氧箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，做菌落計數(shù)。

根據(jù)菌落數(shù)和陰道分泌物的多少進行量化評分，再根據(jù)評分進行治療效果的評價。菌落數(shù)(CFU/ml)小于5，計為0分；菌落數(shù)在5～10之間，計為1分；菌落數(shù)在10～100之間，計為2分；菌落數(shù)在100～1000之間，計為3分；菌落數(shù)大于1000，計為4分。陰道分泌物極少、正常，計為0分；陰道分泌物明顯減少、基質(zhì)樣粘稠，計為1分；陰道分泌物膿樣、粘稠，計為2分；陰道分泌物較多，采膿樣性分泌物，計為3分。各實驗組給藥結束以后取陰道組織置10%甲醛中固定，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察。

1.4統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理。

2 結 果

高、中、低劑量組吲哚-2,3-二酮明膠栓劑對白色念珠菌、脆弱擬桿菌感染的菌落計數(shù)療效均優(yōu)于模型對照組，給藥后4 d顯效，8 d菌落數(shù)繼續(xù)下降(P<0.01或P<0.05)；高、中、低劑量組吲哚-2,3-二酮明膠栓劑對白色念珠菌、脆弱擬桿菌感染的陰道分泌物計數(shù)療效均優(yōu)于模型對照組，給藥后4 d顯效，8 d分泌物繼續(xù)減少(P<0.01或P<0.05)。見表1，2。

白色念珠菌陰道炎和脆弱擬桿菌陰道炎模型經(jīng)過治療后陰道組織病理學檢查結果顯示：模型組陰道壁三層結構完好，粘膜下層、肌層見多量散在廣泛分布的中性粒細胞、單核細胞浸潤，細小血管擴張充血，粘膜下層疏松水腫。吲哚-2,3-二酮明膠栓劑高劑量組陰道三層結構完整，粘膜下層、肌層見少量炎細胞浸潤，細小血管輕度擴張充血，中、小劑量組粘膜下層、肌層見中量中性白細胞、單核細胞等浸潤，細小血管擴張充血。雙唑泰栓陽性對照組陰道壁結構完整，粘膜下層見少許中性白細胞、單核細胞浸潤。此結果表明雙唑泰栓陽性藥與吲哚-2,3-二酮明膠栓劑治療實驗性陰道炎后，感染炎癥顯著好轉，與給藥前相比病變明顯減輕。

表1 吲哚-2,3-二酮明膠栓劑對大鼠實驗性陰道炎分泌物菌落的影響

注：與模型組比較，*P<0．05，**P<0．01。

表2 吲哚-2,3-二酮明膠栓劑治療大鼠實驗性陰道炎對其分泌物的影響

注：與模型組比較，*P<0．05，**P<0．01。

3 討 論

陰道炎是常見的婦科疾病，為女性陰道及其周圍的結締組織發(fā)生炎癥的一類疾病，主要表現(xiàn)為外陰搔癢，陰道分泌物增多，發(fā)病率高，且易反復發(fā)作，其發(fā)病機制涉及真菌、病毒、感染、免疫低下，或在婦科小手術和計劃生育手術中無菌操作觀念淡漠等原因，使陰道炎的發(fā)病率增高。臨床上陰道炎的治療現(xiàn)多采用局部或全身使用抗菌消炎藥的方法，我們已知臨床長期使用抗菌消炎藥等西藥，可引起陰道的菌群失調(diào)，而炎癥及其繼發(fā)炎性反應并未得到有效的控制，且毒副作用較大，并可能損害卵細胞和生殖健康。天然產(chǎn)物毒性小，從中篩選并制定出抗陰道炎的藥物研究，可能是解決陰道炎疾病的重要途徑。

現(xiàn)已證明，吲哚-2,3-二酮不僅存在于海洋生物中，也存在于清熱解毒中藥大青葉、板藍根、青黛中和人尿中[9]，研究已經(jīng)證實了吲哚-2,3-二酮的毒性低，具有保護神經(jīng)、抗病毒[2-3]、抗真菌[4]、抗腫瘤[5]、抗炎和免疫調(diào)節(jié)[6]等作用，在離體和活體證明了其抗衰老、抗氧化作用機制等活性，對吲哚-2,3-二酮的進行動物急性、慢性毒理實驗，結果證實吲哚-2,3-二酮長期大量口服用藥，對動物無明顯損害，未發(fā)現(xiàn)因蓄積而對機體產(chǎn)生的毒性反應，是一種安全可靠的藥物[7,9]。

本研究結果表明，吲哚-2,3-二酮明膠栓劑對大鼠白色念珠菌和脆弱擬桿菌造成的實驗性陰道炎具有治療作用，為開發(fā)天然低毒的控制陰道炎藥物提供了實驗基礎。

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