廖志鐘

采用氣相色譜法同時測定羅浮山百草油中3種成份的含量研究

廖志鐘

目的 建立羅浮山百草油中樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚的含量測定方法。方法 采用GC法，彈性石英毛細(xì)管柱(柱長30 m，內(nèi)徑0.5 mm，涂層厚度1.0μm);氮?dú)鉃檩d氣，F(xiàn)ID檢測器，溫度250℃，程序升溫。結(jié)果 在該色譜條件下樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚的分離度和線性關(guān)系良好，回收率實(shí)驗(yàn)采用高中低三個濃度，平均回收率(n=18)分別為100.85%(RSD=1.89%)、100.13%(RSD=2.03%)、98.81%(RSD=1.86%)。結(jié)論 本法簡便、快捷，專屬性強(qiáng)，線性關(guān)系、準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好，適用于羅浮山百草油的質(zhì)量控制。

氣相色譜法;羅浮山百草油;樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚

羅浮山百草油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《部頒中藥成方制劑》第20冊，該品由兩面針、徐長卿、辛夷花、紅花、金不換、金線風(fēng)等68味中草藥材及樟腦、水楊酸甲酯、薄荷油、丁香油等11味中藥提取物或揮發(fā)油共79味組成，具有祛風(fēng)解毒，消腫止痛之功，主用于感冒頭痛，蟲蚊咬傷，無名腫毒，舟車眩暈［1］。本品方中含樟腦、水楊酸甲酯、丁香油是揮發(fā)性成分，可采用氣相色譜法測定含量［2、3］，經(jīng)預(yù)試，本法簡便、快捷，專屬性強(qiáng)，線性關(guān)系良好。

1 儀器與試藥

GC-14C氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器(日本島津公司)，N2000色譜工作站;GR202電子分析天平(日本A＆D);臺式超聲清洗器(SK250LHC，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);對照品:樟腦對照品(批號:747-200106，供含量測定用);水楊酸甲酯對照品(批號:110707-200107);丁香酚對照品(批號:725-200009，供含量測定用);均購自中國藥品生物制品檢定所;供試品:羅浮山百草油樣品(由廣東羅浮山國藥股份有限公司生產(chǎn));試劑:環(huán)己醇(天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心;分析純);丙酮(廣州化學(xué)試劑廠;分析純)。

2 色譜條件

彈性石英毛細(xì)管柱(柱長30 m，內(nèi)徑0.5 mm，涂層厚度1.0μm)DB-WAX;柱溫為程序升溫，初始溫度90℃，保持3 min，以每分鐘15℃的速率升溫至164℃，保持5 min，再以每分鐘20℃的速率升溫至240℃，保持4min;FID檢測器(日本島津公司)，溫度250℃，進(jìn)樣口溫度230℃，載氣為氮?dú)?，進(jìn)樣量為1μl;分流比50∶1;理論板數(shù)按環(huán)己醇峰計算應(yīng)不低于20000。

3 溶液的制備

3.1 內(nèi)標(biāo)溶液 取環(huán)己醇適量，精密稱定，加丙酮制成每25 mg/ml的溶液，搖勻，即得。

3.2 對照品溶液 分別取對照品樟腦15 mg、水楊酸甲酯125 mg、丁香酚7.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 ml，加丙酮至刻度，搖勻，即得。

3.3 供試品溶液 取羅浮山百草油約0.5 g，精密稱定，置25 m l量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 ml，加丙酮至刻度，搖勻，即得。

4 線性關(guān)系考察

4.1 精密稱取對照品樟腦91.58 mg、丁香酚150.62 mg、水楊酸甲酯1252.25mg，分別置50ml量瓶中，加丙酮溶解并定容，備用;

4.2 線性關(guān)系 ①分別精密量取上述4.1中樟腦、丁香酚溶液各 1，2，5，10，15 m l，置 25 ml量瓶中，加丙酮稀釋溶解并定容，搖勻;吸取上述稀釋后的5種溶液及4.1中溶液各1μl進(jìn)樣，②吸取上述4.1中稀釋后的水楊酸甲酯6種溶液各1 μl進(jìn)樣;記錄色譜圖，以系列溶液的濃度作為橫坐標(biāo)(X)，對照品峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值作為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸;得線性方程:①樟腦 y=0.5236x-0.0065，r2=0.9998;②丁香酚y=1.8651x-0.0124，r2=0.9999;③水楊酸甲酯y=0.3328x-0.0319，r2=0.9997;結(jié)果表明，樟腦濃度在0.0733 mg/ml～1.8316 mg/ml的范圍內(nèi)、丁香酚濃度在0.0482 mg/ml～1.2050 mg/ml的范圍內(nèi)、水楊酸甲酯濃度在1.2400 mg/ml～12.4000 mg/m l的范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

5 專屬性試驗(yàn)

根據(jù)本品處方比例量，①取除樟油、樟腦外的其余藥材，按制法制成缺樟油、樟腦陰性樣品;②取除水楊酸甲酯外的其余藥材，按制法制成缺水楊酸甲酯陰性樣品;③取除丁香羅勒油外的其余藥材，按制法制成缺丁香羅勒油陰性樣品;取上述陰性樣品，分別按3.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成缺樟油、樟腦的陰性對照溶液、丁香羅勒油陰性對照溶液和水楊酸甲酯陰性對照溶液。依法測定，結(jié)果在陰性溶液色譜中，與樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚保留時間相同處無雜質(zhì)峰干擾，表明方法專屬性強(qiáng);同時，供試品中樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚峰與相鄰峰分離度均大于1.5，內(nèi)標(biāo)物環(huán)己醇與相鄰峰分離度大于1.5，符合《中國藥典》含量測定的基本要求。見圖1～7。

6 精密度試驗(yàn)

取同一份對照品溶液，精密量取1μl進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次測得樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚的峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD分別為:0.86%、1.57%、1.19%，表明本方法精密度符合規(guī)定。

7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

7.1 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品6份，分別按3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定含量，計算RSD值，分別為:樟腦1.16%、水楊酸甲酯1.69%、丁香酚2.82%。

7.2 中間精密度試驗(yàn) 取同一批供試品，分別由A、B、C三人，在不同的時間，用同一臺設(shè)備，分別按3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定含量，計算RSD值，分別為:樟腦2.32%、水楊酸甲酯1.65%、丁香酚2.52%。表明本法重現(xiàn)性良好。

8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取取同一供試品溶液，分別于 0、2、4、8、16、18 h后進(jìn)樣1μl，測定樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚峰面積，按對照峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比計算 RSD值，分別為:樟腦0.31%、水楊酸甲酯1.76%、丁香酚0.10%。結(jié)果表明，供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

9 回收率實(shí)驗(yàn)

9.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取環(huán)己醇12504.00 mg，置500 ml量瓶中，加丙酮稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

9.2 回收率用對照品溶液制備 分別精密稱取對照品①樟腦25.10 mg、水楊酸甲酯 333.43 mg、丁香酚14.65 mg;②83.95 mg、水楊酸甲酯676.05 mg、丁香酚39.08 mg;③樟腦142.89 mg、水楊酸甲酯770.00 mg、丁香酚110.61 mg;分別置50 m l量瓶中，加丙酮溶解并定溶，搖勻，即得。

9.3 回收率用供試品溶液的制備 精密稱取已知含量的供試品(含樟腦32.7 mg/g、水楊酸甲酯270.7 mg/g、丁香酚14.7 mg/g)54份，分為9組，其中①取樣量分別為樟腦含量限度40%、100%、400%的50%的3組，每組6份;②取樣量分別為水楊酸甲酯含量限度的80%、100%、120%的3組，每組6份;③取樣量分別為丁香酚含量限度70%、100%、600%的50%3組，每組6份;分置25 ml容量瓶中，精密加入回收率用對照品溶液①、②、③相對應(yīng)的樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚對照品溶液，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 m l，以丙酮稀釋至刻度，搖勻，即得。

9.4 回收率試驗(yàn)結(jié)果 精密吸取上述供試品溶液各1μl注入氣相色譜儀，測定結(jié)果，分別計算樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚的回收率。結(jié)果表明，低、中、高三個濃度回收率及RSD分別為:樟腦是 100.51%、102.93%、99.10%;RSD 為1.68%、1.84%、2.15%，總 RSD為1.89%;水楊酸甲酯是99.84%、100.64%、99.90%，RSD 為 2.62%、1.48%、1.98%，總 RSD為 2.03%;丁香酚是 96.55%、98.60%、101.28%，RSD為 1.20%、1.13%、3.25%，總 RSD為1.86%。結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

10 討論

10.1 程序升溫研究 曾試過初始溫度60℃、90℃、100℃三種;升溫速度:以13℃/min、15℃/min的速率升溫至113℃、164℃，保持3min、5 min，再以15℃ /min、20℃ /min、30℃ /min的速率升溫至 220℃ /min、230℃ /min、240℃ /min，保持 3 min、4 min、5 min;最后確定以初始溫度 90℃ /min，保持 3 min，以15℃/min的速率升溫至 164℃，保持 5 min，再以20℃/min的速率升溫至 240℃，保持 4 min分離度最為理想［4］。

10.2 分流比曾篩選過 40:1、42:1、43:1、44:1、45:1、46:1、47:1、50:1;最后以進(jìn)樣口溫度為230℃、檢測器柱溫度為250℃、分流比為50:1時最理想。

10.3 不同稀釋溶媒的研究 根據(jù)樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚和環(huán)己醇的理化性質(zhì)，文獻(xiàn)多采用無水乙醇、丙酮、石油醚(60℃ ～90℃)等作為溶媒［5］。本試驗(yàn)選用無水乙醇、丙酮、石油醚(60℃ ～90℃)作為溶媒進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果以乙醇為溶劑時，基線稍有漂移，以石油醚(60℃ ～90℃)為溶劑時，拖尾因子偏大，丙酮為溶劑色譜峰干擾最少;故本試驗(yàn)選擇丙酮為溶劑。

10.4 不同色譜柱的研究 經(jīng)對DB-WAX毛細(xì)管柱(安捷倫)、毛細(xì)管柱Rtx(R)-5色譜柱進(jìn)行考察，結(jié)果使用DBWAX毛細(xì)管柱(安捷倫)時，各峰保留時間短，分離度好，理論板數(shù)等均符合要求。使用毛細(xì)管柱Rtx(R)-5時，樟腦峰分離度不好，整體上保留時間延長。故本試驗(yàn)選用DB-WAX毛細(xì)管柱(安捷倫)。

10.5 不同進(jìn)樣口溫度的研究 調(diào)整不同進(jìn)樣口溫度為210℃、220℃、230℃、240℃，按方法測定，進(jìn)樣口溫度變化對測定結(jié)果無明顯影響。

10.6 羅浮山百草油方中含有多種易揮發(fā)成份，本文建立了氣相色譜法同時測定其樟腦、水楊酸甲酯、丁香酚的含量，方法的簡便，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，用于羅浮山百草油的質(zhì)量控制，具有可行性。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部.《藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑第二十冊)，1998，20:179-180.

［2］楊晶晶，郭堅固，劉獻(xiàn)陽.GC法測定麝香祛風(fēng)濕膏中薄荷腦、丁香酚等組分的含量.食品與藥品，2008，10(9):51-53.

［3］劉吉金，黃服喜，熊英.毛細(xì)管氣相色譜法同時測定活絡(luò)油中7種成分的含量.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12(10):16-18.

［4］段蓮華，馮速捷，李玉麗.氣相色譜程序升溫法測定風(fēng)油精成分含量.熱帶農(nóng)業(yè)工程，2004，2:27-28.

［5］劉吉金，黃服喜，熊英.氣相色譜法測定紅花油中水楊酸甲酯和丁香酚含量的方法改進(jìn).藥品檢測，2002，11(7):54.

516133 廣東羅浮山國藥股份有限公司