王 威 呂恩基 張 燕 趙金茹

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院針灸臨床教研室，遼寧 沈陽(yáng) 110032)

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是臨床上一種常見(jiàn)病，是以慢性或反復(fù)出現(xiàn)的腹痛并伴有腹瀉、排便習(xí)慣和大便性狀異常為主要癥狀而又缺乏胃腸道結(jié)構(gòu)和生化異常的綜合征［1-2］，屬于一種慢性內(nèi)臟痛敏。IBS的局部腸道雖然沒(méi)有明顯器質(zhì)性病變，但研究表明IBS患者對(duì)閾下腸道刺激感覺(jué)過(guò)敏，這也是形成慢性內(nèi)臟痛敏的基礎(chǔ)［3］。文獻(xiàn)報(bào)道表明，針刺上巨虛穴治療IBS可獲得較好療效［4］。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討針刺上巨虛穴對(duì)IBS大鼠血清一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影響及其可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性 SD大鼠30只，體質(zhì)量(110±30)g，3周齡，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(京)-2008-0004。每10只大鼠飼養(yǎng)在1個(gè)塑料籠內(nèi)，自由飲食，飼養(yǎng)于12 h光照和12 h黑暗的環(huán)境中，在空調(diào)恒溫室內(nèi)，室溫維持在18～24℃，濕度控制在50% ～70%。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 將30只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組和電針組，每組10只。

1.2.2 模型制備 參照用Al-Chaer ED內(nèi)臟敏感動(dòng)物模型［1］為基礎(chǔ)，稍改進(jìn)。模型對(duì)照組和電針組使用自制的刺激球囊［5-6］，蘸少許醫(yī)用石蠟油，自大鼠肛門輕柔插入4～5 cm。每次氣囊打氣，維持腸道壓力 7.98 kPa(60 mm Hg)，保留1 min，然后撤氣。每次刺激之前，檢查球囊的密閉性。給予擴(kuò)張刺激前，可預(yù)先刺激大鼠肛門部，使其排盡大便，以減少糞團(tuán)對(duì)擴(kuò)張程度的影響。每日操作1次，共持續(xù)刺激15 d。

1.2.3 治療方法 電針組治療時(shí)取大鼠雙側(cè)上巨虛穴，使用華佗牌28號(hào)、25 mm毫針，通過(guò)G6805-1A型電針治療儀(上海華誼醫(yī)用儀器廠)，采用疏密波，密波100 Hz/3 s，疏波4 Hz/3 s交替，刺激強(qiáng)度1～3 mA，以大鼠后肢輕輕抖動(dòng)但不產(chǎn)生嘶叫為度，持續(xù)20 min。隔日針刺1次，持續(xù)10 d?？瞻讓?duì)照組和模型對(duì)照組每日陪同電針組抓取、固定，不做任何治療。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1 標(biāo)本采集 將大鼠麻醉后，先用剪刀沿恥骨聯(lián)合上緣橫向剪開(kāi)，再沿腹白線向上剪開(kāi)至劍突處使其翻開(kāi)，進(jìn)而暴露整個(gè)腹腔，把大小腸推出腹腔，放于大鼠左側(cè)，充分暴露大鼠的腹腔右側(cè)，用干棉球擦試，于腹主動(dòng)脈抽取5 mL血液放入離心管中靜置2～3 h，待血凝后以3 500 r/min離心10 min，分離血清500 μL，放入EP管中，置于-80℃冰箱貯藏備用?？瞻讓?duì)照組、模型對(duì)照組在模型制備結(jié)束后進(jìn)行血液采集，電針組從造模完成后隔日針刺1次，10 d后進(jìn)行血液采集。

1.3.2 檢測(cè)指標(biāo)及試劑盒 采用分光光度計(jì)比色法檢測(cè)NO含量和NOS活性。NO、NOS試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明的操作程序測(cè)定大鼠血清NO含量和NOS活性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間計(jì)量資料采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

各組大鼠血清NO含量、NOS活性比較見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清NO含量、NOS活性比較pmol/L，

表1 各組大鼠血清NO含量、NOS活性比較pmol/L，

與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.01;與模型對(duì)照組比較，△P ＜0.05

組 別 n NO NOS空白對(duì)照組10 57.81 ±10.31 25.82 ±9.71模型對(duì)照組 10 91.19 ±9.11* 51.85 ±10.01*電針組 10 64.12±12.01△ 29.22 ±8.38△

由表1可見(jiàn)，模型對(duì)照組血清NO、NOS水平均較空白對(duì)照組顯著升高(P ＜0.01)，電針組血清 NO、NOS水平均較模型對(duì)照組有不同程度降低(P＜0.05)。

3 討論

上巨虛穴屬足陽(yáng)明胃經(jīng)，是手陽(yáng)明大腸經(jīng)的下合穴。根據(jù)“合治內(nèi)腑”的理論，大量的文獻(xiàn)和臨床研究表明，上巨虛穴具有清熱利濕、調(diào)理腸腑的功能。IBS是腸道功能紊亂的功能性疾病，病因及發(fā)病機(jī)制尚未清楚，但與胃腸激素關(guān)系密切。Al-Chaer ED等［1］開(kāi)發(fā)的模擬慢性內(nèi)臟痛動(dòng)物模型中，痛覺(jué)過(guò)敏伴隨著動(dòng)力紊亂，類似于IBS患者的動(dòng)力失調(diào)。

NOS廣泛分布于消化道，存在3種同工酶，其主要功能是催化L-精氨酸生成NO。NO是非腎上腺素能非膽堿能(NANC)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，可介導(dǎo)平滑肌松弛，在胃腸道蠕動(dòng)反射中產(chǎn)生下行性抑制作用，對(duì)胃腸黏膜具有保護(hù)和損傷雙重效應(yīng)，也對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)和內(nèi)臟感覺(jué)起重要調(diào)節(jié)作用［5-7］。實(shí)驗(yàn)證實(shí)［8］，NO 在生理劑量水平對(duì)消化系統(tǒng)起重要的保護(hù)作用，合成的NO過(guò)少可松弛腸道平滑肌，NO產(chǎn)生過(guò)多則可使胃腸道平滑肌對(duì)其敏感性增強(qiáng)。因此，NOS活性提高，可導(dǎo)致NO合成增加，引起腸運(yùn)動(dòng)加快、內(nèi)臟感覺(jué)敏感性增加，從而出現(xiàn)IBS的一系列癥狀。

本研究發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組NO和NOS含量均明顯升高(P ＜0.01)，表明IBS大鼠模型血清NOS和NO含量可能與IBS內(nèi)臟致敏有關(guān)。與模型對(duì)照組比較，電針組NO和NOS含量均有下降趨勢(shì)(P＜0.05)，同時(shí)也說(shuō)明了電針上巨虛穴對(duì)慢性內(nèi)臟痛敏IBS大鼠模型的改善作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血NO和NOS水平有關(guān)。因此，降低IBS模型血清NO和NOS的水平可能是針刺調(diào)節(jié)IBS胃腸運(yùn)動(dòng)，進(jìn)而改善慢性內(nèi)臟痛敏癥狀的機(jī)制之一。

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