梁 冬，高艷輝，賈艾玲，董金香

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),吉林 長(zhǎng)春 130117)

玉米須為禾本科玉蜀屬植物玉米(Zea mays L.)的花柱和柱頭，最早藥用記載見(jiàn)于《滇南本草》。玉米須其性味甘、平、無(wú)毒。可用于治療水腫、小便淋漓、腎炎、膽囊炎、糖尿病等[1]。玉米須中主要含有皂苷、黃酮、生物堿、多糖等成分[2]?，F(xiàn)代藥理研究[3]證明，玉米須中黃酮類(lèi)成分為有效成分之一。黃酮類(lèi)化合物種類(lèi)多，性質(zhì)差異較大，本實(shí)驗(yàn)對(duì)玉米須總黃酮的醇提工藝方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，為玉米須的開(kāi)發(fā)利用研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材來(lái)源 玉米須為禾本科玉蜀屬植物玉米的花柱，采自吉林省長(zhǎng)嶺縣，經(jīng)鑒定，符合中國(guó)藥典1977年版規(guī)定。

1.2 儀器 TU-1810PC型分光度計(jì)；電子天平(d=0.000 01 g)；蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)100080-200707)；試劑、試藥均為分析純。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 藥材吸醇量的測(cè)定 稱(chēng)取玉米須粉末100 g,加醇2 500 mL，浸泡12 h，平行3次，測(cè)得100 g玉米須的平均吸醇量為400 mL。

1.3.2 提取工藝技術(shù)條件的研究 醇回流提取工藝中影響總黃酮提取效率的因素主要為醇濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)和料液比。故采用四因素三水平正交試驗(yàn)，篩選最佳提取工藝。見(jiàn)表1。

表1 醇提工藝四因素三水平正交試驗(yàn)表

以玉米須總黃酮含量為考察指標(biāo)，采用分光光度法測(cè)定。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 稱(chēng)取供試品約0.15 g，精密稱(chēng)定，加70%乙醇50 mL，精密稱(chēng)重,超聲處理30 min，冷卻至室溫，70%乙醇補(bǔ)足失重。精密量取供試品續(xù)濾液0.5 mL，加入三氯化鋁試液5 mL,用乙醇定容至10 mL。顯色15 min[4],以相應(yīng)試劑為空白，測(cè)定275 nm下吸光度。結(jié)果分析見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

方差分析表明:A(乙醇濃度)、C(提取次數(shù))為顯著因子，B、D為不顯著因子。因素B和C對(duì)提取量影響很小，因此最優(yōu)組合為A3B2C3D1，即：加入15倍量70%乙醇，回流3次,每次1.5 h。

2.2 玉米須總黃酮的含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液及供試品溶液的制備 空白溶液制備:精密量取乙醇0.5 mL置10 mL容量瓶中，加三氯化鋁試液5 mL，用乙醇定容至刻度，顯色15 min，作為空白液。對(duì)照品溶液:取蘆丁對(duì)照約1 mg，加適量甲醇溶解，即得。供試品溶液：取提取物粉末(過(guò)60目篩)約0.15 g,精密稱(chēng)定，按2.1項(xiàng)方法制備共試品溶液。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

表3 方差分析表

2.2.2 對(duì)照品和供試品吸收光譜 精密量取對(duì)照品溶液按2.1項(xiàng)顯色，測(cè)定200～600 nm范圍內(nèi)吸收波長(zhǎng)，結(jié)果在溶液在275 nm有最大吸收波長(zhǎng)，供試品溶液在276 nm有最大吸收波長(zhǎng)，二者吸收波長(zhǎng)基本一致。因此確定275 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系考察

2.3.1 對(duì)照品溶液制備 取蘆丁約5 mg，精密稱(chēng)定，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得(0.101 4 mg/mL)。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制 精密量取蘆丁對(duì)照品溶液(0.101 4 mg/mL)0.5、0.75、1、1.25、1.5 mL，分別置10 mL量瓶中，按2.1項(xiàng)顯色。同法制備空白液。照分光光度法(中國(guó)藥典2010年版一部，附錄V A),在275 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，結(jié)果蘆丁對(duì)照品回歸方程為:Y=0.046 2X-0.000 7,r=0.999 9?？傸S酮含量在5.07～15.21 μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取蘆丁對(duì)照品溶液(0.101 4 mg/mL)1 mL～10 mL量瓶中，按2.1項(xiàng)下測(cè)定吸光度，平行處理3次測(cè)定，結(jié)果RSD為0.49%，表明儀器的精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取蘆丁對(duì)照品溶液(0.101 4 mg/mL)1 mL,按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定0、5、10、15、20 min時(shí)吸光度；精密量取供試品溶液1 mL，按3.3.2項(xiàng)下方法測(cè)定0、5、10、15、20 min吸光度，結(jié)果對(duì)照品的RSD為0.191%，供試品的RSD為0.468%。二者吸光度RSD均符合要求，穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 精密量取正交試驗(yàn)1號(hào)供試品溶液1 mL～10 mL量瓶中按2.1項(xiàng)下測(cè)定吸光度，結(jié)果供試品中總黃酮平均含量為94.862 9 mg，RSD為1.22%，重現(xiàn)性良好。

2.3.6 加樣回收率 取已知含量(95.325 mg/g)玉米須供試品6分，每分1 g，精密稱(chēng)定，并加入適量蘆丁對(duì)照品，按2.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法，依法獨(dú)立操作，按2.1項(xiàng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為100.42%，RSD為1.83%，說(shuō)明方法準(zhǔn)確性較好，可行。

2.4 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 稱(chēng)取玉米須藥材500 g,按最佳提取工藝，即加入15倍量70%乙醇，回流3次，每次1.5 h，合并濾液，濃縮干燥，稱(chēng)重。平行4次試驗(yàn)。

稱(chēng)取試品約0.2 g,精密稱(chēng)定，至溶液具塞錐形瓶中,按2.1項(xiàng)下制備供試品溶液。精密量取續(xù)濾液1 mL，按2.1項(xiàng)下測(cè)定吸光度。平行處理4次，結(jié)果玉米須提取物中，總黃酮含量可達(dá)到1.341 g/100 g藥材,說(shuō)明該工藝穩(wěn)定、科學(xué)合理,適用于玉米須總黃酮的提取。

3 討論

3.1 三氯化鋁顯色法原理[5]三氯化鋁作為顯色劑本身無(wú)色。在被測(cè)溶液中加入顯色劑后，發(fā)生反應(yīng)(一般是絡(luò)合反應(yīng))生成有顏色的物質(zhì)，顏色深淺與顯色劑的量無(wú)關(guān)，只與被測(cè)物濃度成正比。

在中性或弱堿性存在條件下,黃酮類(lèi)化合物與鋁鹽生成螯合物,在275 nm波長(zhǎng)處有吸收峰且符合定量分析的比爾定律。

三氯化鋁吸光度法測(cè)定玉米須中的黃酮，是一種簡(jiǎn)便、快速的方法，具有較高的精密度和準(zhǔn)確度。

3.2 黃酮提取次數(shù) 各因素對(duì)提取影響順序?yàn)?提取次數(shù)>提取時(shí)間>溶劑量，提取次數(shù)對(duì)總黃酮含量影響較大，但第3次以后，提取液顏色變淺、提取量較低，不適宜再提取。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[S].上海:上?？萍汲霭嫔?1999:434.

[2]張慧恩,徐德平.玉米須黃酮成分的研究[J].中藥材,2007(2):164-166.

[3]許剛.3種玉米穗不同部位黃酮類(lèi)及其主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的測(cè)定[J].鄭州工程學(xué)院學(xué)報(bào),2001,22(4):82-84.

[4]余婷婷,魯曉翔,連喜軍,等.玉米須黃酮類(lèi)化合物的薄層層析及紫外光譜研究[J].食品科學(xué),2008,29(11):47.

[5]符軍放,吳素芳,曹煒,等.蜂膠醇提取物紫外光譜相似性探討[J].中國(guó)蜂業(yè),2006,57(5):9-10.