陳 麗， 梁宇紅， 裴世成， 韋 敏

(1.柳州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)教研室，廣西 柳州 545006;2.柳州市工人醫(yī)院臨床藥學(xué)科，廣西 柳州 545005;3.柳州市人民醫(yī)院藥劑科，廣西柳州 545005)

柿葉總黃酮對高脂血癥大鼠血脂和血液流變學(xué)的影響

陳 麗1， 梁宇紅2， 裴世成1， 韋 敏3

(1.柳州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)教研室，廣西 柳州 545006;2.柳州市工人醫(yī)院臨床藥學(xué)科，廣西 柳州 545005;3.柳州市人民醫(yī)院藥劑科，廣西柳州 545005)

目的 研究柿葉總黃酮對飲食性高脂血癥大鼠血脂及血液流變學(xué)的影響。方法 建立飲食性高脂血癥大鼠模型，將高脂血癥大鼠按照血清TC水平隨機(jī)分成高脂模型組、柿葉總黃酮高劑量組、柿葉總黃酮中劑量組、柿葉總黃酮低劑量組和洛伐他汀組5組(10只/組)，每組雌雄各半，連續(xù)給藥4周后檢測各組大鼠血脂水平和血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果與高脂模型組比較，各用藥組TC、TG、LDL-C、apoB、AI水平降低，apoA I、HDL-C、apoA I/apoB水平升高均具有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05);各給藥組全血黏度(高、中、低切)、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積(HCT)顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)。結(jié)論 柿葉總黃酮對高脂血癥大鼠的脂質(zhì)代謝紊亂有顯著的調(diào)節(jié)作用，對防治高脂血癥和改善血液流變學(xué)有積極的意義。

柿葉;總黃酮;高脂血癥大鼠;血脂;血液流變學(xué)

柿葉為柿科植物柿(Diospyros kakiL.)的干燥葉，主要的有效成分是黃酮類化合物。近年來大量藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究表明，黃酮類化合物有降脂、抗血栓、抗氧化［1］、抗衰老、清除自由基［2］等作用，因而廣泛用于醫(yī)藥、食品等行業(yè)，具有極廣的開發(fā)應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)建立飲食性高脂血癥大鼠模型，研究柿葉總黃酮對其血脂和血液流變學(xué)的影響，為其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 健康SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量180～200 g，清潔級動(dòng)物，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證:SCXK(桂)2008-0003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證:SYXK(桂)2008-0005)。

1.2 藥品與試劑 柿葉總黃酮由實(shí)驗(yàn)室自行提取:柿葉粗粉加70%乙醇回流提取，提取液減壓濃縮，用20%NaOH調(diào)pH至9到10左右后用石油醚萃取除去葉綠素，棄醚相，水相用15%HCl調(diào)pH至5到6后再用乙酸乙酯反復(fù)萃取，棄水相，乙酸乙酯相濃縮干燥后得總黃酮，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測得含黃酮量為65.84%，得率為1.08%;膽固醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，規(guī)格:25 g/瓶，分析純，批號:F20081110);豬膽鹽(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，規(guī)格:25 g/瓶，生化試劑，批號:F20090517);洛伐他汀(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，規(guī)格:20 mg/片，批號:09122401);丙基硫氧嘧啶片(上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司，批號:20090202)。

1.3 儀器設(shè)備 RE-52旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器(上海安亭實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);722S可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限責(zé)任公司);全自動(dòng)生化分析儀(日本OLYMPUS AU600型);血液流變學(xué)分析儀(LBY-N6A型，北京普利生儀器中心)。

1.4 高脂飼料的配制 基礎(chǔ)飼料83.6%，膽固醇1%，豬膽鹽0.2%，丙基硫氧嘧啶 0.2%，豬油 12%，蛋黃粉 3%［3-4］。按比例先將膽固醇、豬膽鹽、丙基硫氧嘧啶、蛋黃粉研碎混合，然后加入溫?zé)岬呢i油中，再與基礎(chǔ)飼料拌勻即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 高脂血癥模型建立及分組 選取60只健康SD大鼠，體質(zhì)量180～200 g，雌雄各半。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，禁食不禁水12 h，于次日晨眼內(nèi)眥采血1 mL左右，制備血清，測定各大鼠的 TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoAI及 apoB 以觀察其血脂基礎(chǔ)值，然后按TC水平從低到高排列，查隨機(jī)數(shù)字表，隨機(jī)抽取10只作為空白組，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)全程喂飼基礎(chǔ)飼料。其余50只大鼠喂飼高脂飼料6周，誘導(dǎo)建立飲食性高脂血癥大鼠模型。6周后禁食不禁水12 h，于次日晨眼內(nèi)眥采血1 mL左右，制備血清，測定各大鼠的 TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoAI及apoB水平，與造模前的血脂水平進(jìn)行比較，造模成功后將高脂血癥大鼠按TC水平從低到高排列，查隨機(jī)數(shù)字表，隨機(jī)分成高脂模型、柿葉總黃酮高劑量、柿葉總黃酮中劑量、柿葉總黃酮低劑量和洛伐他汀5個(gè)組，每組10只，雌雄各半。給藥期間，空白組喂飼基礎(chǔ)飼料，其余各組仍喂飼高脂飼料?？瞻捉M和高脂模型組每天灌服空白溶劑15 mL/kg，柿葉總黃酮給藥組每天灌服柿葉總黃酮100、50、25 mg/kg，陽性對照組每天灌服洛伐他汀3.0 mg/kg，連續(xù)4周。

2.2 造模期間大鼠攝食量及體質(zhì)量變化 整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間每天定時(shí)、定量喂飼，次日稱取剩余量，計(jì)算大鼠每日攝食量，每周同一時(shí)間稱取大鼠體質(zhì)量，以便調(diào)整給藥劑量，并觀察藥物是否影響大鼠的生長。結(jié)果顯示，空白組與高脂造模型組大鼠第1～5周時(shí)體質(zhì)量增長無顯著性差異，但造模第6周時(shí)兩組之間體質(zhì)量有顯著性差異(P＜0.05)。說明高脂造模型組體質(zhì)量增長較快。造模期間各組大鼠生長狀況良好，活動(dòng)正常。

表1 造模期間大鼠攝食量和體質(zhì)量變化(±s)

表1 造模期間大鼠攝食量和體質(zhì)量變化(±s)

注:與空白組比較*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組別 攝食量/(g/d)體質(zhì)量/g空白組 高脂造模型組例數(shù)空白組 高脂造模型組10 50 10 50造模前 / / 190.72 ±3.79 189.86 ±4.19造模1 周 10.24±0.39 7.98±0.68＊＊ 198.13±3.90 196.62±4.22造模2 周 11.64 ±0.28 11.52 ±1.05 206.22 ±4.12 204.56 ±4.20造模3 周 13.33 ±0.68 12.68 ±0.86 214.80 ±4.25 214.63 ±3.99造模4 周 12.76 ±0.84 13.01 ±0.58 223.92 ±3.48 224.73 ±3.70造模5 周 13.16 ±0.69 14.02 ±0.77 231.52 ±2.21 235.29 ±3.17造模6 周 13.40 ±0.66 14.24 ±0.53 239.37 ±1.68 247.88 ±3.65*

2.3 柿葉總黃酮對高脂血癥大鼠攝食量和體質(zhì)量的影響表2、表3可見給藥后各組大鼠攝食量和體質(zhì)量無顯著性差異。說明空白組、高脂模型組和各給藥組大鼠并沒有因?yàn)槭澄锊煌a(chǎn)生不適應(yīng)性，從而導(dǎo)致食欲下降，給藥組的降脂作用途徑并不是通過抑制大鼠的食欲來實(shí)現(xiàn)的。所以，本實(shí)驗(yàn)評價(jià)柿葉總黃酮改善血脂、血流變學(xué)的結(jié)果是可靠的。

表2 給藥期間大鼠攝食量變化(±s，n=10)

表2 給藥期間大鼠攝食量變化(±s，n=10)

組別 給藥1周/(g/d) 給藥2周/(g/d) 給藥3周/(g/d) 給藥4周/(g/d)空白組 12.89 ±1.18 13.67 ±1.02 13.18 ±1.11 14.05 ±1.05高脂模型組 14.23 ±0.73 14.03 ±0.27 14.56 ±0.68 14.87 ±0.75洛伐他汀組 14.07 ±0.87 13.49 ±0.23 13.42 ±0.81 13.88 ±0.94柿葉總黃酮高劑量組 13.69 ±0.80 13.26 ±1.62 14.77 ±0.58 13.43 ±0.18柿葉總黃酮中劑量組 13.80 ±0.54 13.39 ±1.88 12.91 ±1.53 13.79 ±1.25柿葉總黃酮低劑量組 12.39 ±1.18 12.83 ±0.62 13.36 ±1.07 14.04 ±0.33

表3 給藥期間大鼠體質(zhì)量變化(±s，n=10)

表3 給藥期間大鼠體質(zhì)量變化(±s，n=10)

組別 給藥前/g 給藥1周/g 給藥2周/g 給藥3周/g 給藥4周/g空白組 244.15 ±2.95 249.22 ±1.58 256.71 ±3.25 263.77±3.24 268.13 ±3.41高脂模型組 247.34 ±2.53 251.88 ±3.69 259.45 ±3.21 265.31 ±1.52 272.93 ±3.56洛伐他汀組 248.41 ±4.38 253.64 ±2.84 258.72 ±4.61 264.82 ±1.68 270.21 ±4.47柿葉總黃酮高劑量組 247.05 ±2.82 250.67 ±2.64 258.88 ±3.31 266.45 ±2.91 271.05 ±3.03柿葉總黃酮中劑量組 245.86 ±1.55 251.01 ±4.33 257.34 ±1.76 263.08 ±3.73 269.90 ±2.51柿葉總黃酮低劑量組 247.93 ±3.75 253.92 ±3.16 259.32 ±4.25 264.38±2.38 271.51 ±3.67

2.4 柿葉總黃酮對高脂血癥大鼠血脂水平和血液流變學(xué)的影響 灌胃4周后，禁食不禁水12 h，次日晨稱體質(zhì)量，用20%烏拉坦溶液腹腔麻醉后腹主動(dòng)脈取血5 mL。其中1 mL裝入不加抗凝劑的離心管中，4℃靜置10 min，3 000 r/min離心15 min，分離血清，用全自動(dòng)生化儀檢測TC、TG、HDLC、LDL-C水平(見表4)，以及載脂蛋白apoA I和apoB水平(見表5);其余4 mL血裝入已加抗凝劑肝素的試管中，用血液流變學(xué)分析儀檢測全血黏度(高、中、低切)、血漿黏度和HCT等血液流變學(xué)指標(biāo)(見表6、7)。

2.5 柿葉總黃酮對高脂血癥大鼠動(dòng)脈硬化指數(shù)(AI)的影響 根據(jù)單項(xiàng)的血清TC和HDL-C含量，計(jì)算AI，AI=(TC－HDL-C)/HDL-C，結(jié)果見表8。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 13.0對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。組間分析采用One-Way ANOVA兩兩比較得到相應(yīng)的P值，同組樣本前后比較采用Pared-Sample T Test。P＜0.05或P＜0.01差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表4 給藥4周后各組大鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的變化(±s，n=10)

表4 給藥4周后各組大鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的變化(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;與高脂模型組比較，#P ＜0.05，##P ＜0. 01;與洛伐他汀組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組別 TC/(mmol/L) TG/(mmol/L) HDL-C/(mmol/L) LDL-C/(mmol/L)空白組 3.01 ±0.36## 0.55 ±0.08## 1.45 ±0.15## 2.60 ±0.30##高脂模型組 6.11±0.28＊＊ 0.84±0.04＊＊ 0.47±0.04＊＊ 6.01±0.34＊＊洛伐他汀組 3.49 ±0.41＊＊## 0.51 ±0.03## 0.98 ±0.07＊＊## 3.13 ±0.44＊＊##柿葉總黃酮高劑量組 3.78±0.28＊＊## 0.57±0.04##△ 0.93±0.07＊＊## 3.73±0.39＊＊##△△柿葉總黃酮中劑量組 4.25±0.23＊＊##△△ 0.59±0.03##△△ 0.89±0.06＊＊##△△ 4.19±0.19＊＊##△△柿葉總黃酮低劑量組 4.99±0.69＊＊##△△ 0.65±0.09##△△ 0.86±0.04＊＊##△△ 4.39±0.33＊＊##△△

表5 給藥4周后各組大鼠載脂蛋白的變化(±s，n=10)

表5 給藥4周后各組大鼠載脂蛋白的變化(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;與高脂模型組比較，##P ＜0. 01;與洛伐他汀組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組別 apoA I/(mmol/L) apoB/(mmol/L)apoA I/apoB空白組 0.58 ±0.10## 0.33 ±0.08## 1.83 ±0.48##高脂模型組 0.26±0.03＊＊ 0.63±0.06＊＊ 0.41±0.07＊＊洛伐他汀組 0.46 ±0.04＊＊## 0.39 ±0.03*## 1.18 ±0.12＊＊##柿葉總黃酮高劑量組 0.43 ±0.05＊＊## 0.41 ±0.02＊＊## 1.06 ±0.12＊＊##柿葉總黃酮中劑量組 0.41±0.02＊＊##△ 0.43±0.04＊＊## 0.96±0.10＊＊##柿葉總黃酮低劑量組 0.42±0.03＊＊##△△ 0.42±0.04＊＊## 1.01±0.12＊＊##△

表6 給藥4周后各組大鼠全血黏度的比較(±s，n=10)

表6 給藥4周后各組大鼠全血黏度的比較(±s，n=10)

注:與空白組比較，＊＊P ＜0. 01;與高脂模型組比較，##P ＜0. 01;與洛伐他汀組比較，△△P ＜0.01。

組別 高切/(mPa.s) 中切/(mPa.s) 低切/(mPa.s)空白組 3.22 ±0.13## 4.76 ±0.14## 7.35 ±0.24##高脂模型組 6.95±0.18＊＊ 9.15±0.19＊＊ 14.22±0.13＊＊洛伐他汀組 4.54 ±0.20＊＊## 6.70 ±0.27＊＊## 10.00 ±0.33＊＊##柿葉總黃酮高劑量組 4.48±0.24＊＊##△△ 6.30±0.13＊＊##△△ 9.90±0.53＊＊##柿葉總黃酮中劑量組 4.91±0.16＊＊##△△ 7.02±0.11＊＊##△△ 10.18±0.11＊＊##柿葉總黃酮低劑量組 5.14±0.18＊＊##△△ 7.28±0.17＊＊##△△ 10.33±0.14＊＊##△△

表7 給藥4周后各組大鼠HCT、血漿黏度的比較(±s，n=10)

表7 給藥4周后各組大鼠HCT、血漿黏度的比較(±s，n=10)

注:與空白組比較，＊＊P ＜0. 01;與高脂模型組比較，##P ＜0. 01;與洛伐他汀組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組別 HCT/% 血漿黏度/(mPa.s)空白組 35.16 ±1.75## 1.18 ±0.06##高脂模型組 49.72±1.69＊＊ 1.71±0.04＊＊洛伐他汀組 43.52 ±1.80＊＊## 1.38 ±0.04＊＊##柿葉總黃酮高劑量組 42.88 ±1.24＊＊## 1.35 ±0.06＊＊##△柿葉總黃酮中劑量組 43.71 ±0.66＊＊## 1.42 ±0.04＊＊##△柿葉總黃酮低劑量組 45.11 ±1.08＊＊##△△ 1.50 ±0.03＊＊##△△

表8 給藥4周后各組大鼠AI的變化(±s，n=10)

表8 給藥4周后各組大鼠AI的變化(±s，n=10)

注:與空白組比較，＊＊P ＜0. 01;與高脂模型組比較，##P ＜0. 01;與洛伐他汀組比較，△△P ＜0.01。

組別AI空白組 1.10 ±0.38##高脂模型組 12.13 ±1.72＊＊洛伐他汀組 2.55 ±0.34＊＊##柿葉總黃酮高劑量組 3.09 ±0.27＊＊##柿葉總黃酮中劑量組 3.81 ±0.54＊＊##△△柿葉總黃酮低劑量組 3.87 ±0.27＊＊##△△

3 討論

高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的病理、生化基礎(chǔ)［5-7］。AS脂肪斑塊主要由TC和膽固醇酯構(gòu)成，所以TC和AS之間有緊密的關(guān)系。TG是除TC之外導(dǎo)致冠心病(CHD)的又一獨(dú)立危險(xiǎn)因子，高TG血癥可導(dǎo)致小而密的LDL-C增多，HDL-C降低，并有促使AS斑塊破裂的作用［8］。HDL-C具有將外周組織中的TC清除入血，并逆向轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行轉(zhuǎn)化排泌的功能，阻礙TC在細(xì)胞內(nèi)堆積，抑制細(xì)胞攝取LDL和抑制平滑肌細(xì)胞的增生，對AS的形成起拮抗作用［9］。apoA I和apoB分別為HDL-C和LDL-C的主要載脂蛋白，血清apoA I和apoB水平可反應(yīng)HDL-C和LDL-C水平，apoA I/apoB比值與判斷CHD及病變程度有較好的線性關(guān)系［10］。AI也是與AS獨(dú)立相關(guān)的危險(xiǎn)因素，有研究資料表明［11］，AI能夠準(zhǔn)確反映血脂水平與AS、CHD之間的關(guān)系，是預(yù)測AS、CHD危險(xiǎn)性的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柿葉總黃酮能改善高脂血癥大鼠的脂質(zhì)代謝紊亂狀況，能有效升高HDLC、apoA I、apoA I/apoB 的比值;不同程度降低 TC、TG、LDLC、apoB、AI的水平。柿葉總黃酮高劑量組降低高脂血癥大鼠TC、TG、AI水平，升高apoA I和apoA I/apoB比值水平與陽性對照藥洛伐他汀相當(dāng)。柿葉總黃酮改善高脂血癥大鼠血脂紊亂的作用可能與其對載脂蛋白的調(diào)節(jié)有關(guān)。

高血脂又是造成血液高黏、高滯、高聚狀態(tài)的因素之一。當(dāng)TC量增加時(shí)，血漿LDL可將游離TC帶入紅細(xì)胞膜中，使膜中的TC量增加，引起膜中膽固醇和磷脂的比值增加，使膜的流動(dòng)性降低，使全血黏度增高［12］，加速形成AS，發(fā)生栓塞，發(fā)生心腦血管疾病。因此，治療高脂血癥及其相關(guān)疾病一個(gè)重要方面就是改善血液流變學(xué)，降低全血黏度、HCT、血漿黏度和紅細(xì)胞剛性指數(shù)等，提高紅細(xì)胞的變形能力。本實(shí)驗(yàn)對高脂血癥大鼠的全血黏度(高切、中切、低切)、血漿黏度、HCT進(jìn)行了測定，結(jié)果高脂模型組以上指標(biāo)均顯著性升高(P＜0.01);PLF高劑量組與洛伐他汀組比較升高無顯著性差異(P＞0.05);其余各組全血黏度(高切、中切、低切)、血漿黏度、HCT都有不同程度的降低，說明PLF對高脂血癥大鼠的血液流變學(xué)有顯著的改善作用，這可能是其治療高脂血癥取得較好療效的作用途徑之一。

［1］Chen O G，Lu H，Wang C，et al.Effect of triterpenoid compounds isolated from leaves of Diospyros kaki on stimulus induced superoxide generation and tyrosyl phosphorylation in human polymorphonuclear leukocytes［J］.Clin Chim Acta，2002，320(1-2):11-16.

［2］Han J，Kang S，Choue R，et al.Free radical scavengling effect of Diospyros kaki Laminaria japonica and Undaria pinnatifida［J］.Fitoterapia，2002，73(7-8):710-712.

［3］徐叔云，卞如濂，陳 休，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.3版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:1201-1206.

［4］韓志濤.堿性電解水對大鼠抗氧化及抗纖維蛋白原作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國老年學(xué)雜志，2003，23(10):683-684.

［5］Knouff C，Briand O，Lestavel S，et al.Defective VLDL metabolism and severe atherosclerosis in mice expressing huanapolipoprotein E isoforms but lacking the LDL receptor［J］.Biochim Biophys Acta，2004，1684(1-3):8-17.

［6］Engler MB.Familial hypercholesterolemia:genetic predisposition to atherosclerosis［J］.Medsurg Nurs，2004，13(4):253-257.

［7］Kullo IJ，Bailey KR，Mc Connell JP，et al.Low-density lipoprotein particle size and coronary atherosclerosis in subjects belonging to hypertensive sibships［J］.Am J Hypertens，2004，17(9):845-851.

［8］Kosuge K，Miida T，Takahashi A，et al.Estimating the fasting triglyceride concentration from the postprandial HDL-cholesterol and apolipoprotein CIII concentrations［J］.Atherosclerosis，2006，184(2):413-419.

［9］王開發(fā)，陸 明.花粉的植物甾醇研究［J］.蜜蜂雜志，2006，(9):5-6.

［10］Edelstein D，Brownlee M.Mechaistic studies of advanced glycosylation end product inhibition by aminoguanidine［J］.Diabetes，1992，41(1):26-29.

［11］胡 琳.血脂綜合指數(shù)與冠心病的關(guān)系［J］.青海醫(yī)藥雜志，2004，34(09):16-17.

［12］向 甄，楊繼慶，劉永英.健康成人血液流變學(xué)與血脂相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志，2006，23(4):271-272.

R285.5

B

1001-1528(2011)08-1397-04

2011-01-12

陳 麗(1977—)，女，講師，碩士，主要從事藥劑學(xué)、藥理學(xué)教學(xué)工作。E-mail:chenlilzyz@163.com