張春軍,董琦,董凱

(牡丹江醫(yī)學(xué)院,黑龍江 牡丹江 157011)

三七〔Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen〕,是我國(guó)的傳統(tǒng)珍貴藥材為五加科植物,以干燥的根入藥[1]。別名山膝、金不換、田漆、田七、人參三七、滇三七等。三七用于治療心血管疾病已有悠久的歷史,在《醫(yī)門秘旨》中已有記載。三七具有抗炎、抗衰老和提高免疫功能等多種作用。三七皂苷是三七的活性部位,對(duì)心血管系統(tǒng)有強(qiáng)心、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠狀血流量、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低血小板表面活性、抑制血小板活化、黏附和聚集、抗血栓形成等作用[2]。除了三七外,五加科植物竹節(jié)參(Panax japonicus),主產(chǎn)于云南、四川、貴州、廣西等省,其根、莖葉中也含有大量的皂甙,為了綜合開發(fā)利用三七及竹節(jié)參的資源。我們對(duì)三七及竹節(jié)參根、莖、葉中皂甙的提取方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究,目的在為工業(yè)化提取三七及竹節(jié)參皂甙找到更簡(jiǎn)捷、安全的新方法,并把竹節(jié)參作為一種新的醫(yī)藥資源進(jìn)行開發(fā)和利用。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 微波爐、回流裝置、減壓蒸餾裝置、恒溫水浴槽、721分光光度計(jì)、天平。

1.2 試劑 蒸餾水、50%乙醇、70%乙醇、甲醇、正丁醇、乙醚、濃H2SO4、冰醋酸 、16%香草醛醇、77%硫酸。

2 提取方法

2.1 三七粗莖葉總皂甙的提取

2.1.1 水煎醇沉法。稱20g干燥的粗莖葉于250mL燒杯中,分別用50mL水煎煮四次,每次15min,過(guò)濾合并濾液,用Libeman-burchard試驗(yàn)檢驗(yàn)無(wú)紅色。說(shuō)明沒(méi)有提取出皂甙,此方法行不通。

2.1.2 冷浸法。稱20g干燥三七粗莖葉于250mL燒杯中,分別加入水(30、30、20、20)mL,時(shí)時(shí)攪拌 1.5h,過(guò)濾,合并濾液,棄去濾渣,用 Libeman-burchard試驗(yàn),鑒定無(wú)紅色,說(shuō)明沒(méi)有提取出皂甙,此方法行不通。

2.2 三七根中皂甙的提取

稱取20g烘干粉碎的三七根粉末,5份,分別于250mL具塞錐形瓶中,其中兩份分別用甲醇,水各100mL浸泡24h,另外兩份分別用甲醇,水各 100mL浸泡36h,其余1份加50%乙醇置于微波爐中40%的火力提取四次,每次2min,分別過(guò)濾,用Libeman-burchard試驗(yàn),鑒定有紅色,分別合并濾液,棄去濾渣,并減壓回收溶劑至浸膏狀,分別用50mL蒸餾水溶解,蒸餾瓶用少量蒸餾水洗滌,合并于分液漏斗中,分別用乙醚萃取 4次(30、30、20、20)mL,棄去醚層并回收再利用,水層再用水飽和過(guò)的正丁醇萃取4次(30、30、20、20)mL,棄下層回收再利用,將上層減壓回收正丁醇溶劑至浸膏狀,用50mL蒸餾水溶解,并用100mL容量瓶定容,搖勻待測(cè)。

2.3 竹節(jié)參根、莖葉中皂甙的提取

2.3.1 冷浸法。分別稱取烘干粉末的竹節(jié)參根,莖葉粉末8g于具塞錐形瓶中,分別加人甲醇104mL,浸泡36h后過(guò)濾用 Libeman-burchard試驗(yàn)鑒定有紅色,說(shuō)明含有皂甙。棄去濾渣,濾液減壓回收溶劑至浸膏狀,分別用50mL蒸餾水溶解,蒸餾瓶用少量蒸餾水洗滌,分別合并于分液漏斗中,分別用乙醚萃取4次(30、30、20、20mL),棄上層并回收再利用,下層用水飽和過(guò)的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)。棄下層回收再利用,將上層減壓回收正丁醇溶劑至浸膏狀,分別用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,搖勻待測(cè)。

2.3.2 回流法。分別稱取烘干粉碎的竹節(jié)參根、莖葉粉末10g置于250mL圓底燒瓶中。分別加入其中100mL甲醇,安裝好回流裝置加熱回流12h后過(guò)濾、棄濾渣。濾液減壓回收甲醇至浸膏狀,再用50mL水溶解,用少量蒸餾水洗滌圓底燒瓶合并溶液,用乙醚萃取4次(30、30、20、20mL)上層回收再利用。下層溶液用水飽和過(guò)的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)下層回收利用。上層減壓回收正丁醇至浸膏狀。用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,搖勻待測(cè)。

2.3.3 微波法。分別稱取烘干粉碎的竹節(jié)參根、莖葉粉末10g置于250mL具塞錐形瓶中加入70%的乙醇分別提取3次,每次2min,提取后用 Liberman-Burchard試驗(yàn)鑒定有紅色,說(shuō)明含有皂甙。過(guò)濾棄渣,濾液減壓回收回收溶劑至浸膏狀,用50mL蒸餾水溶解,再用少量蒸餾水洗滌蒸餾瓶。合并溶液于分液漏斗中用乙醚萃取 4次(30、30、20、20mL)。上層回收再利用,下層溶液繼續(xù)用水飽和過(guò)的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)下層回收利用,上層溶液減壓回收正丁醇至浸膏狀,用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,搖勻待測(cè)。

3 皂甙的測(cè)定

分別用移液管精密吸取各組樣品1mL稀釋至10mL備用,精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液和各組稀釋后的樣品溶液各0.5mL,分別置于10mL具塞的刻度離心試管中,將試管至于冰水浴中,分別精密加入16%香草醛醇溶液0.5mL,77%硫酸5mL搖勻,將試管置60℃恒溫水浴中加熱10min,再置冰水浴中冷卻15min于544nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度,另外平行的作一空白液進(jìn)行校正[3],按二者光密度值計(jì)算三七總皂甙含量。

4 結(jié)果

通過(guò)2.1的實(shí)驗(yàn),總結(jié)經(jīng)驗(yàn)得出用冷浸法、回流法、微波法對(duì)三七及竹節(jié)參中皂甙的提取。

表1 提取三七根皂甙的方法比較

從表1中的數(shù)據(jù)可以看出,冷浸法提取中,浸泡36h比浸泡24h提取率高。而微波法提取比冷浸法提取率高,并且,微波法較省時(shí)。

表2 不同方法對(duì)竹節(jié)參皂甙的比較

從表2中數(shù)據(jù)可看出;采用微波、回流和冷浸提取法,在相同處理?xiàng)l件下,各組皂甙得率相差不太明顯。微波、回流和冷浸法提取竹節(jié)參皂甙得率分別為:3.40%、3.20%、2.71%、莖葉得率分別為:3.28%、3.05%、2.02%。其中,微波法和回流法提取率明顯比冷浸法高。并且,從所用的時(shí)間看冷浸法提取時(shí)間為36h,回流法提取時(shí)間為12h,微波法提取時(shí)間為10min。從提取所用時(shí)間及操作看,微波法提取以乙醇為溶劑,因此提取成本低,并且安全快捷、無(wú)污染等多種優(yōu)點(diǎn)。

5 結(jié)論

本研究表明:采用微波、回流和冷浸法提取,微波法具有比傳統(tǒng)回流提取方法更高的提取率,具有簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn),更安全,無(wú)污染,可替換回流提取。并且從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出竹節(jié)參中皂甙含量與三七中皂甙含量相差不大。因此,竹節(jié)參可作為一種新的藥用資源進(jìn)行大面積的人工種植與開發(fā)利用。

[1]黃桂寬,胡細(xì)蓮,秦冰冰,等.三七莖葉皂甙提取與純化的微型實(shí)驗(yàn)研究[J].廣西師范大學(xué)學(xué)報(bào),2000,6(S1):106-107.

[2]潘俊杰,鄭琴,楊明.三七中三七總皂苷的提取、分離純化及分析方法的研究進(jìn)展[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2007,12(6):77-82.

[3]張晶,陳全成,弓曉杰,等.不同提取方法對(duì)人參皂甙甘提取率的影響[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,25(1):71-73.