吳卉

目前感染乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的檢測方法主要有 ELISA法檢測免疫學(xué)血清標(biāo)志物和熒光定量PCR法檢測 DNA。ELISA法主要檢測 HBV血清標(biāo)志物，即乙肝五項(xiàng)(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)，反映病毒的表達(dá)水平，也間接地反映了病毒復(fù)制水平，在乙型肝炎的病因分析、疾病進(jìn)程和預(yù)后判斷上有著不可替代的作用，是臨床診斷、治療、分析和判斷HBV感染者病程及傳染性的重要依據(jù)。熒光定量PCR法檢測的是體內(nèi)病毒的拷貝數(shù)，具有高度的靈敏性和特異性，并且重復(fù)性好、檢測范圍寬，其目的主要是判斷目前患者病毒復(fù)制程度的大小、傳染性大小，尤其在判斷乙肝的轉(zhuǎn)歸以及用藥前后的療效判斷上有很重要的作用，同時(shí)也是重要的抗病毒治療用藥指征之一。

本研究就以上兩種方法對HBV檢測結(jié)果進(jìn)行分析，以探討ELISA法與PCR法檢測結(jié)果的相關(guān)性及不同的臨床意義，從中了解乙型肝炎感染情況，為臨床判斷乙型肝炎患者病情和療效觀察提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年6月至2009年6月間吉林省醫(yī)院住院及門診乙型肝炎患者500例，其中男334例，女166例，年齡10～70歲，診斷符合2000年9月西安全國傳染病寄生蟲病學(xué)術(shù)會議修訂《病毒性肝炎防治方案》所定的標(biāo)準(zhǔn)［1］。同時(shí)收集100例乙肝病毒標(biāo)志物全陰性的健康體檢者血清標(biāo)本作為對照組。根據(jù)檢出的常用模式將研究對象分為10組，見表1的分組欄(每組中的項(xiàng)目均為陽性)。

1.2 試劑與儀器 ELISA檢測試劑由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供。HBV DNA含量檢測試劑盒由深圳匹基生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。羅氏熒光定量PCR儀LightCycler。

表1 ELISA檢測HBVm和FQ-PCR檢測HBV DNA的結(jié)果

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 HBV DNA含量檢測及乙肝病毒感染血清學(xué)標(biāo)志物檢測均嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析，HB-sAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)組與其他各組的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

通過 χ2檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn) HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)組患者血清HBV DNA陽性檢出率明顯高于除 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb-IgM(+)組以外的其他各組(P＜0.001)見表1。HBeAg和HBV DNA陽性檢出率見表2。

表2 HBeAg和HBV DNA陽性檢出率比較

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)組患者血清HBV DNA的陽性檢出率最高，為91.8%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與其他各組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，說明HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)患者 HBV DNA 具有較高的復(fù)制水平，是具有傳染性的重要標(biāo)志。這一結(jié)果還說明HBeAg陽性與HBV DNA陽性存在一致性。值得注意的是，在HBeAg陽性患者血清中仍有13例HBV DNA結(jié)果為陰性，考慮可能是由于患者體內(nèi)HBV DNA復(fù)制水平低，而在此之前所表達(dá)的HBeAg尚未被完全降解，仍處于較高水平，故形成了HBV DNA與HBeAg時(shí)相分離的現(xiàn)象［2］。這就提示僅以HBV DNA的檢測來判斷是否感染可能存在漏診的情況。

180 例 HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)組患者血清HBV DNA陽性檢出率為 38.3%;57例 HBsAg(+)、HBcAb(+)組患者血清HBV DNA陽性檢出率為59.7%，這一結(jié)果說明 HBeAg陰性、HBeAb或 HBcAb陽性者仍可以有 HBV DNA陽性檢出，提示患者體內(nèi)仍有 HBV存在或復(fù)制，故HBeAg的消失，HBeAb或HBcAb的出現(xiàn)并不能代表病毒停止復(fù)制或病情好轉(zhuǎn)，只能說明復(fù)制水平的降低。分析其原因可能與HBV發(fā)生前C區(qū)基因突變或機(jī)體發(fā)生特異性的免疫耐受有關(guān)［3］。

31例 HBsAb(+)患者中 HBV DNA陽性率為9.7%，其原因可能為:長期多次反復(fù)小劑量接觸 HBV未見或少見發(fā)病，出現(xiàn) HBsAb(+)，但體內(nèi)仍可存在低拷貝的HBV顆粒;或者存在其他 HBV血清學(xué)亞型感染［4］。

陰性對照組也檢出8例 HBV DNA陽性，檢出率為8.0%，其原因可能是:①HBV發(fā)生前C區(qū)基因突變或機(jī)體發(fā)生特異性免疫耐受有關(guān)。②HBsAg確已清除，但 HBV DNA仍持續(xù)存在［5］。③PCR方法存在假陽性。

綜上所述，F(xiàn)Q-PCR和ELISA兩種檢測方法具有良好的相關(guān)性和互補(bǔ)性。長春市的500例患者各模式分組中HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)組患者血清 HBV DNA 陽性檢出率和含量明顯高于其他各組。HBeAg和HBV DNA陽性檢出率有較高的一致性。

［1］病毒性肝炎防治方案(試行)(2000年西安全國傳染病寄生蟲病學(xué)術(shù)會議修訂).中華傳染病雜志，2000，8(6):324.

［2］丁柳，劉麗，雷學(xué)忠.5600例血清標(biāo)本乙肝病毒 DNA定量與免疫學(xué)標(biāo)志物檢測的對比分析.四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2006，37(2):313.

［3］朱傳武.HBV前C/C基因變異與宿主T細(xì)胞免疫的關(guān)系.國外醫(yī)學(xué)免疫學(xué)分冊2001，24(6):289.

［4］朱艷賓，劉增佑.乙型肝炎孕婦早期血清 HBV DNA含量與胎兒宮內(nèi)感染關(guān)系研究.河北醫(yī)藥，2008，30(12):1928-1929.

［5］湯立新.血清HBV DNA熒光定量 PCR檢測與乙肝病毒標(biāo)志物模式的相關(guān)性.職業(yè)衛(wèi)生與病傷，2007，22(2):141.