張俊紅 李賜恩 何艷青

前列舒膠囊由黃柏、蒲公英、赤芍、梔子、車前子、地黃、甘草、野菊花等組成，具有清熱瀉火，利濕解毒等功效，臨床常用于前列腺炎、前列腺增生等。為控制前列舒膠囊的質(zhì)量，采用薄層色譜法對該制劑中的黃柏、蒲公英、梔子、赤芍等藥材進行了定性鑒別;并采用高效液相色譜法對制劑中的鹽酸小檗堿進行了含量測定，從而有效地控制前列舒膠囊的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與試藥

瑞士 CAMAG Automatic TLC Sampler4(薄層自動點樣儀)，瑞士CAMAG Reprostar3(薄層成像系統(tǒng))，硅膠G薄層板(浙江省路橋四甲生化塑料廠)，Agilent 1100(美國)高效液相色譜儀，PHENOMENEX ODS C18(4.6 ×250 mm，5 μm)色譜柱，DAD檢測器，四元梯度泵，G2170AA數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)。

試劑:乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。黃柏對照藥材(121510-200602)、蒲公英對照藥材(121195-200602)、梔子對照藥材(120986-200605)、赤芍對照藥材(121093-200402)、鹽酸小檗堿對照品(110713-200208)均購于中國藥品生物制品檢定所。前列舒膠囊(自制中試產(chǎn)品，批號:081022，081023，081024)，前列舒膠囊陰性 (自制)。

2 定性鑒別

2.1 黃柏的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物10 g，加氨水5 ml使?jié)櫇?，密閉放置30 min，加入三氯甲烷30 ml，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃柏對照藥材0.5 g，加氨水2 ml潤濕，同法制成對照藥材溶液。再按處方比例，取缺黃柏的其他各味藥，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取供試品溶液、陰性對照溶液10 μl、對照藥材溶液1 μl，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾(如圖1)。

2.2 蒲公英的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物10 g，加入乙酸乙酯30 ml，加熱回流提取30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取蒲公英對照藥材粉末1 g，同法制成對照藥材溶液。再按處方比例，取缺蒲公英的其他各味藥，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，放置3 h后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾(如圖2)。

圖1

圖2

2.3 梔子的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物10 g，加水飽和正丁醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取梔子對照藥材1 g，加數(shù)滴水使?jié)櫇?，加水飽和正丁?0 ml，同法制成對照藥材溶液。再按處方比例，取缺梔子的其他各味藥，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上使成條帶，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性無干擾(如圖3)。

圖3

圖4

2.4 赤芍的TLC鑒別 取“2.3”項下供試品溶液作為供試品溶液。另取赤芍對照藥材粉末1 g，加水飽和正丁醇30 ml，同法制成對照藥材溶液。再按處方比例，取缺赤芍的其他各味藥，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾(如圖4)。

3 含量測定

3.1 色譜條件 色譜柱:PHENOMENEX ODS C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)(每100 ml含十二烷基磺酸鈉0.1 g);檢測波長:345nm;流速:1 ml/min;柱溫:30℃。

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24 h的鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 ml含鹽酸小檗堿16.3 μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 取本品10粒，傾出內(nèi)容物，研勻，取約1 g，精密稱定，置100 ml三角燒瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性對照試驗 處方中除去黃柏，按制劑工藝制備，制得供試品陰性對照樣品，按供試品溶液制備的方法制備供試品陰性對照溶液。吸取上述溶液各10 μl，分別按上述色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，陰性對照圖譜與對照品、供試品圖譜中鹽酸小檗堿相應的保留時間無色譜峰，表明選擇性良好，陰性無干擾。

3.5 標準曲線的制定 分別精密吸取對照品溶液(1 ml含鹽酸小檗堿16.3 μg)2、5、8、12、15、20 μL，按上述色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，根據(jù)鹽酸小檗堿峰的積分值繪制標準曲線，以進樣量為橫坐標(X)，以色譜峰面積為縱坐標(Y)進行回歸，回歸方程為Y=428.2X+8.016，r=0.9993。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在32.6～326.0 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μl，分別連續(xù)進樣5次，測定鹽酸小檗堿峰面積，其RSD為1.21%，表明儀器精密度良好。

3.7 重復性試驗 取同一批樣品(批號:081022)的內(nèi)容物粉末5份，分別制備供試品溶液，注入液相色譜儀測定，結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為0.27 mg/g，RSD為1.39%，結(jié)果表明方法的重復性較好。

3.8 穩(wěn)定性試驗 精密取供試品溶液(批號:081022)各10 μl，分別于 0，2，4，6，8 h 注入液相色譜儀測定 5 次，結(jié)果鹽酸小檗堿色譜峰面積基本無變化，RSD為1.85%(n=5)，表明8 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品(批號:081022)內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，按其所含鹽酸小檗堿的質(zhì)量分數(shù)的80%、100%、120%分別精密加入鹽酸小檗堿對照品，按供試品制備與測定方法平行試驗，結(jié)果鹽酸小檗堿平均回收率為96.84%，RSD為1.30%(n=6)，結(jié)果見表1。

3.10 樣品含量測定 精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10 μl，分別按上述色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，根據(jù)供試品吸收度積分值與對照品積分值，外標兩點法計算，即得。結(jié)果見表2。

表1 鹽酸小檗堿回收率測定結(jié)果(n=6)

表2 前列舒膠囊含量測定結(jié)果(n=3)

4 討論

前列舒膠囊為多種中藥配制而成的中藥復方制劑，成分較為復雜。在制備含量測定供試品時，曾對比了超聲法、回流法，以及乙醇和甲醇為提取溶媒對供試品制備的影響，結(jié)果表明，采用超聲法制備供試品雖然比回流法簡便快捷，但其鹽酸小檗堿的提取量約為回流法的80%，故采用回流法作為本實驗中供試品溶液的制備方法;而甲醇的提取率稍高于乙醇，相對提取的更完全，故選用甲醇作為提取溶劑。結(jié)果表明薄層色譜鑒別斑點清晰，陰性無干擾;含量測定方法簡單、靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于前列舒膠囊的質(zhì)量控制。

［1］都日娜，烏日娜.黃柏的研究進展.中國民族醫(yī)藥雜志，2008，14(3):75-76.

［2］中華人民共和國藥典委員會.《中國藥典》.第1部.北京:化學工業(yè)出版社，2005.