耿桂香， 李小芳， 高永良

(1.成都中醫(yī)藥大學，四川成都610075;2.軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京100850)

燈盞花，又名燈盞細辛，是菊科植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz的干燥全草，具有活血通絡(luò)止痛、祛風散寒之功效，用于中風偏癱、胸痹心痛、風濕痹痛、頭痛、牙痛［1］。原系云南民間苗族、彝族等少數(shù)民族習用草藥，最早見載于《滇南本草》“燈盞花，性寒，味苦。治小兒膿耳，搗汁滴入耳內(nèi)”［2］。在我國主要分布于西部及西南部高山和亞高山的山坡草地及林緣地帶［3］。其主要有效成分是燈盞花素(breviscapine，Bre)［4］，以燈盞乙素(scutellain)-4’，5，6-三羥基黃酮-7-葡萄糖醛酸苷為主(占95%以上)，還包括少量燈盞甲素(芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷)。1980年，在昆明召開的治療癱瘓新藥燈盞花素鑒定會上，證明燈盞乙素是治療腦血管疾病所致癱瘓的有效成分［5］。

燈盞花素為一黃酮類化合物，易溶于甲醇，難溶于水，微溶于乙醇、丙酮、三氯甲烷，在強酸條件下易水解氧化，在堿性條件下會發(fā)生開環(huán)反應(yīng)，穩(wěn)定性都會受到影響。在臨床上使用的制劑主要有口服和靜脈滴注，鼻腔給藥具有使用方便、吸收迅速、生物利用度高等優(yōu)點，且具有一定的腦靶向性［6］。鑒于上述優(yōu)點，鼻腔給藥逐漸成為當今制劑學研究領(lǐng)域的熱點［7］，同時也存在難點。隨著制劑學的不斷發(fā)展，鼻腔給藥可以治療全身性疾病的這一作用倍受重視［8］，目前，燈盞花素的鼻腔給藥正處于進一步研究階段。本實驗使用現(xiàn)代制劑技術(shù)增加了燈盞花素的溶解度，將其制成水溶液。本實驗通過經(jīng)典恒溫法預(yù)測燈盞花素水溶液的有效期，其結(jié)果如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UV-2450型紫外可見分光光度計(SHIMADZU，日本產(chǎn));日本島津公司SPD-10AVP型高效液相色譜儀，10-ATVP型紫外檢測器，浙江大學N2000色譜工作站;萬分之一電子分析天平(Sartorius);十萬分之一電子分析天平(Sartorius);DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司);AC-3型多功能熔焊機(安陽市工業(yè)電器總廠);SCD-Ⅱ高純水裝置(軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生裝備研究所)

1.2 試藥 燈盞花素原料藥(批號:HB20081151，含乙素97.5%);燈盞花素水溶液(自制，C=50 mg/mL);甲醇(Caledon實驗有限公司，色譜純);冰醋酸(北京化學試劑公司，分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:ApolloC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水-冰醋酸(42∶58∶1);紫外檢測波長:335 nm;體積流量:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;進樣量:20μL。

2.2 燈盞花素水溶液的配制 精密稱取燈盞花素5.0 g及一定量的助溶劑，加入0.01%苯扎氯銨水溶液定容至100 mL，振搖使其充分溶解后，得到50 mg/mL的燈盞花素水溶液。

2.3 供試品溶液配制 精密移取燈盞花素溶液0.5 mL，加流動相稀釋至溶液質(zhì)量濃度為5 μg/mL，再用孔徑0.45 μm的微孔濾膜過濾后進樣。

2.4 標準曲線繪制 取燈盞花素對照品貯備液適量，分別加流動相制得質(zhì)量濃度為 2、6、10、16、20μg/mL 的一系列溶液，進樣測定并記錄峰面積。以峰面積A對質(zhì)量濃度C進行線性回歸，得線性方程為:A=55499C-27363(R2=0.999)，表明燈盞花素在2～20 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 日內(nèi)、日間精密度 配制高、中、低3個質(zhì)量濃度為16、10、6 μg/mL 的燈盞花素溶液，分別于0、2、4、6 h 和8 h 及0、1、2、3 d和4 d內(nèi)測定，其日內(nèi)、日間精密度均小于2%(n=5)，表明該方法穩(wěn)定性較好。

2.6 回收率試驗 為考察方法的準確性，進行了高、中、低3個質(zhì)量濃度的回收率試驗。分別精密移取燈盞花素對照品貯備液0.4、0.5、0.6 mL 至9 個10 mL 量瓶，每個 3 份，并按處方比例加入燈盞花素水溶液劑的空白輔料，流動相定容，搖勻，溶液依法測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一濃度的燈盞花素對照品溶液，重復(fù)6次注入色譜儀，記錄燈盞乙素的色譜峰面積，得出其RSD 為0.19%。

表1 回收率試驗結(jié)果 (n=3)

2.8 經(jīng)典恒溫試驗［9］將燈盞花素樣品溶液灌裝于2mL安瓿中，熔封，分別置于70、80、90、100℃的恒溫烘箱中，各溫度按試驗設(shè)計時間取樣，每次分別取出3支安瓿，自然冷卻至室溫，按2.3項下配制成供試品溶液，進樣20μL測定，結(jié)果見表2、表3。

表2 燈盞花素水溶液在不同溫度下的分解數(shù)據(jù)

表3 燈盞花素水溶液在不同溫度下的回歸方程及分解速度常數(shù)

根據(jù) Arrhenius指數(shù)定律:lgK=-E/2.303RT+lgA，以lgK對1/T做線性回歸，得回歸方程:lgK=-3767.82/T+8.038;|r|=0.9593。由此推算室溫(25℃)的分解速度常數(shù) K 及有效期為:K25℃=2.51636 × 10-5h-1，t0.925℃=0.48 年。

3 討論

3.1 燈盞花素難溶于水，本試驗通過加入助溶劑，在很大程度上增加了燈盞花素在水中的溶解度，可達到50 mg/mL，但是該溶液穩(wěn)定性不佳，對今后的上市流通環(huán)節(jié)不甚理想，可是高濃度燈盞花素水溶液的制備將為其臨床上多種溶液劑型和給藥途徑的開發(fā)和研究奠定基礎(chǔ)。

3.2 本試驗制備的燈盞花素水溶液的質(zhì)量濃度為50 mg/mL，通過經(jīng)典恒溫實驗預(yù)測燈盞花素水溶液的有效期為0.48年。該水溶液的穩(wěn)定性可能受此助溶劑的影響，由于燈盞花素在堿性溶液中易發(fā)生開環(huán)反應(yīng)，且該制劑濃度較高，可能從而導致了該溶液的穩(wěn)定性不佳。如何有效地提高該溶液的穩(wěn)定性有待于進一步的研究。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:138.

［2］竺芷庵.滇南本草［M］.上海:上海世界書局，1937:99.

［3］中國科學院植物研究所.中國高等植物圖鑒:第4冊［M］.北京:科學出版社，1985:444.

［4］衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑(第20冊)［S］.1990:103.

［5］宮碧琴.治療癱瘓新藥燈盞花素鑒定會在昆明召開［J］.中草藥，1980，11(10):480.

［6］蔣新國.藥物的鼻黏膜吸收［J］.中國新藥雜志，2003，12(11):902.

［7］王東興，高永良.鼻腔給藥新劑型研究進展［J］.中國新藥雜志，2002，11(8):589-592.

［8］陳新梅.用于全身治療的鼻腔給藥系統(tǒng)的研究概況［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學雜志，2007，24(1):23-27.

［9］彭賢東，唐志立.鹽酸普魯卡因注射液的穩(wěn)定性考察［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2005，21(12):1500-1501.