和世平，廈國(guó)銀，王 荔

（1.麗江市古城區(qū)農(nóng)業(yè)局，云南麗江674100；2.麗江師范高等專(zhuān)科學(xué)校，云南麗江674100；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南昆明650205）

半夏[Pinellia ternata（Thunb.）Breit]為天南星科半夏屬多年生草本植物，以干燥塊莖入藥，炮制后具有抗腫瘤等功效，目前已被列為云南省重點(diǎn)發(fā)展的系列藥材之一。無(wú)糖組培快繁技術(shù)是一種全新的植物組織培養(yǎng)技術(shù)，是環(huán)境控制技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)的有機(jī)結(jié)合。目前，該技術(shù)已在非洲菊、滿(mǎn)天星等花卉和燈盞花的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中顯示出極大的優(yōu)勢(shì)。

隨著半夏藥用價(jià)值的不斷提升，市場(chǎng)需求日趨擴(kuò)大，藥農(nóng)為了追求經(jīng)濟(jì)利益，過(guò)度開(kāi)發(fā)半夏野生資源，導(dǎo)致資源逐漸枯竭。因此，建立半夏快速繁殖體系迫在眉睫。本文旨在以半夏不定芽為材料，應(yīng)用無(wú)糖組培微環(huán)境調(diào)控技術(shù)，對(duì)半夏無(wú)糖組培中誘導(dǎo)根分化的最佳基質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)液組合進(jìn)行篩選，為建立半夏快速繁殖體系打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

用昭通優(yōu)質(zhì)地珠半夏葉片通過(guò)傳統(tǒng)組培產(chǎn)生的不定芽。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)2個(gè)因子，每個(gè)因子設(shè)3個(gè)水平。營(yíng)養(yǎng)液：A1（MS）、A2（1/2MS）、A3（1/4MS），營(yíng)養(yǎng)液中除去糖及有機(jī)元素；培養(yǎng)基質(zhì)：B1（2份蛭石∶1份珍珠巖）、B2（2份泥炭∶1份珍珠巖）、B3（1份蛭石∶1份泥炭∶1份珍珠巖），基質(zhì)1、基質(zhì)2、基質(zhì)3與3個(gè)營(yíng)養(yǎng)液水平進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，共9個(gè)處理，每個(gè)處理接種一盤(pán)，每盤(pán)接種150個(gè)半夏不定芽，每個(gè)處理重復(fù)3次，以同齡半夏不定芽傳統(tǒng)組培作為對(duì)照（CK）。

1.3 接種培養(yǎng)

在超凈工作臺(tái)上，把半夏不定芽插入裝有上述9個(gè)處理的無(wú)菌基質(zhì)苗盤(pán)中，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。前3 d閉光培養(yǎng)，第4 d開(kāi)始光照培養(yǎng)并通入CO2。設(shè)置培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度為900~1 200μmol/L，光強(qiáng)為71.4μmol/m2/s，光照時(shí)間14 h/d，溫度保持在（25±2）℃，相對(duì)濕度80%±5%。

1.4 觀察記載

觀察記錄半夏不定芽生根的起始時(shí)間，培養(yǎng)至第14 d統(tǒng)計(jì)生根率，培養(yǎng)28 d后測(cè)量苗高、葉面積、主根長(zhǎng)、主根數(shù)、須根數(shù)。將生根率用Excel進(jìn)行反正弦轉(zhuǎn)換后，用SAS6.12軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

不同基質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)液組合處理對(duì)半夏不定芽無(wú)糖組培生根率的影響見(jiàn)表1。從表1可見(jiàn)，在所設(shè)的9個(gè)基質(zhì)與營(yíng)養(yǎng)液的處理組合中，處理9（1/4MS+基質(zhì)3）半夏不定芽的生根率、苗高、葉面積、主根數(shù)和主根長(zhǎng)等各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)最優(yōu)，且9個(gè)基質(zhì)與營(yíng)養(yǎng)液的處理組合，半夏不定芽的生根率均高于有糖組培苗對(duì)照（CK）。處理9（1/4MS+基質(zhì)3）半夏不定芽的平均生根率最高為87.67%±0.65%；處理2最低為68.03%±1.1%。為進(jìn)一步比較各因子對(duì)半夏不定芽無(wú)糖生根率的差異顯著性，進(jìn)行方差分析。結(jié)果表明（表2），半夏不定芽無(wú)糖培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)液間F=35.83，P<0.01，說(shuō)明3種營(yíng)養(yǎng)液間差異極顯著，半夏不定芽無(wú)糖培養(yǎng)生根率與營(yíng)養(yǎng)液的種類(lèi)有關(guān)。培養(yǎng)基質(zhì)間F=70.77，P<0.01，說(shuō)明3種培養(yǎng)基質(zhì)間差異極顯著，半夏不定芽無(wú)糖培養(yǎng)生根率與培養(yǎng)基質(zhì)的種類(lèi)也有關(guān)。

表1 不同基質(zhì)與營(yíng)養(yǎng)液處理對(duì)半夏不定芽營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的影響

表2 半夏不定芽生根率方差分析

表3 不同因子各水平SSR檢驗(yàn)

營(yíng)養(yǎng)液間多重比較結(jié)果表明（表3），營(yíng)養(yǎng)液A3（1/4MS）對(duì)半夏不定芽生根最好，極顯著高于營(yíng)養(yǎng)液A1、營(yíng)養(yǎng)液A2；營(yíng)養(yǎng)液A2顯著高于營(yíng)養(yǎng)液A1。培養(yǎng)基質(zhì)多重比較結(jié)果表明，基質(zhì)B3極顯著高于基質(zhì)B2，顯著高于基質(zhì)B1；基質(zhì)B1極顯著高于基質(zhì)B2。

通過(guò)對(duì)表1~3分析得出，處理9（1/4MS+基質(zhì)3）為半夏無(wú)糖生根的最佳營(yíng)養(yǎng)液和基質(zhì)組合。

3 討論

植株的生長(zhǎng)不僅受空間環(huán)境因素的影響，也受根際環(huán)境的影響。傳統(tǒng)組織培養(yǎng)中，由于植株是以兼養(yǎng)的方式生長(zhǎng)，就必須在培養(yǎng)基中加入蔗糖、激素、維生素等化學(xué)物質(zhì)。由于蔗糖的存在，為了防止微生物大量繁殖，要求有糖組培必須在密封的小容器內(nèi)進(jìn)行。且傳統(tǒng)組培中一般都以瓊脂等凝膠劑作為支撐物，在瓊脂中植株根系發(fā)育通常瘦小、脆弱，當(dāng)植株移栽到土壤中時(shí)容易死亡。本研究以多孔的無(wú)機(jī)材料如蛭石、珍珠巖、泥炭等作為無(wú)糖組培培養(yǎng)基質(zhì)，該基質(zhì)有良好的空氣擴(kuò)散系數(shù)，使培養(yǎng)基質(zhì)中有較高的氧濃度，從而促進(jìn)植株的根系生長(zhǎng)發(fā)育，長(zhǎng)出大量須根，提高無(wú)糖組培苗的成苗率，且無(wú)機(jī)材料的價(jià)格便宜，可以反復(fù)使用，有效降低了生產(chǎn)成本。

在植物無(wú)糖培養(yǎng)中，利用營(yíng)養(yǎng)液為組培苗提供養(yǎng)分是關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)。在充分滿(mǎn)足植株生長(zhǎng)所需的光、溫、水、氣、肥的條件下，適當(dāng)噴施低濃度的MS營(yíng)養(yǎng)液對(duì)提高植株的光合能力、增加干物質(zhì)累積是有利的，從而增強(qiáng)植株對(duì)病蟲(chóng)害及逆境的抗性。張金蓮等通過(guò)研究MS、1/2MS對(duì)誘導(dǎo)盾葉薯蕷組培苗生根的影響，得出MS、1/2MS培養(yǎng)基對(duì)盾葉薯蕷組培苗生根影響差異不顯著，但MS培養(yǎng)基更有利于提高盾葉薯蕷組培苗根系生長(zhǎng)的質(zhì)量。而本研究通過(guò)MS、1/2MS、1/4MS營(yíng)養(yǎng)液對(duì)誘導(dǎo)半夏不定芽生根的影響研究發(fā)現(xiàn)，半夏組培苗在1/4MS營(yíng)養(yǎng)液中較MS、1/2MS生根效果好，并長(zhǎng)出大量須根，半夏組培苗長(zhǎng)勢(shì)最好。

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