陸冠亞 王仍瑞

犬細(xì)小病毒病的最新研究進(jìn)展

陸冠亞 王仍瑞

細(xì)小病毒病，是由犬細(xì)小病毒引起的犬的一種高度接觸性傳染病，以犬急性出血性腸炎或幼犬急性心肌炎為主要特征，給養(yǎng)犬業(yè)的發(fā)展造成了嚴(yán)重的損失。本文就犬細(xì)小病毒病的病原、流行特點、臨床癥狀、病理變化、診斷和防制措施等研究近況進(jìn)行綜述。

一、病原

犬細(xì)小病毒病病原為犬細(xì)小病毒2型（CPV-2），它屬于細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒屬。病毒粒子細(xì)小，直徑20～22nm，20面體對稱，無囊膜，在氯化銫中的浮密度為1.43g/cm3。基因組為單股DNA，大小為5233bp。病毒粒子有VP1、VP2、VP3三種多肽，其中VP2是衣殼蛋白主要成分，有血凝活性，能在4℃和25℃凝集豬和恒河猴的紅細(xì)胞，但不能凝集其他動物的紅細(xì)胞。本病毒能在多種不同類型的細(xì)胞內(nèi)增殖，通常用MDCK和F81等傳代細(xì)胞分離培養(yǎng)病毒。在MDCK上常形成核內(nèi)包涵體。CPV-2易發(fā)生抗原漂移，近年來，在抗原性、宿主范圍和血凝性上都發(fā)生了變化。CPV-2有a、b、c三個亞型，但致病性無明顯差異，我國目前以CPV-2a流行為主。

病毒對外界環(huán)境有較強(qiáng)的抵抗力，室溫下可存活3個月，60℃時能存活1h，在pH值3～9和56℃條件下能穩(wěn)定1h以上，室溫下糞便中的病毒在6 個月以內(nèi)仍具感染性。CPV對甲醛、β-丙內(nèi)酯、羥胺和紫外線敏感，但對氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑和去膽堿鹽有較強(qiáng)的抵抗力。

二、 流行病學(xué)

CPV主要感染犬，偶爾也可見于貂、狐、狼等其他犬科和鼬科動物。各種年齡和品種的犬均易感，但純種犬易感性極高。2～4月齡幼犬易感性最強(qiáng)，病死率最高。3～4周齡犬感染后成急性致死性心肌炎的為多；8～10周齡以腸炎為主，但心肌細(xì)胞有核內(nèi)包涵體。小于4周齡仔犬和大于5歲齡的老犬發(fā)病率低。本病多為散發(fā)，同窩發(fā)病率高，犬場常呈地方流行，持續(xù)時間長。

病犬是主要的傳染源。在感染后3～4天，即可通過糞、尿、唾液、嘔吐物等向外界排毒，傳染性強(qiáng)。7～10天后隨著體內(nèi)抗體的增多，感染性降低。病毒主要隨污染的飼料、飲水，經(jīng)消化道進(jìn)入機(jī)體，外寄生蟲也能成為傳播媒介。病愈犬的糞尿長期帶毒，不經(jīng)嚴(yán)格消毒的車輛、用具、飼養(yǎng)和醫(yī)療人員的衣、鞋、器具等也可成為散播本病的媒介。

本病一年四季均可發(fā)生，但以冬春季多發(fā)。長途運(yùn)輸、飼養(yǎng)管理條件驟變以及寒冷、擁擠、衛(wèi)生條件差等均可促進(jìn)本病發(fā)生。

三、臨床癥狀

本病在臨床上主要以兩種形式出現(xiàn)，即腸炎型和心肌炎型。有的病犬同時具有腸炎型和心肌炎型的臨床癥狀，發(fā)病時間短，死亡率95%。

（一）腸炎型

潛伏期為7～14天，多見于青年犬。發(fā)病早期精神沉郁，食欲減少甚至廢絕，鼻鏡干燥，體溫高達(dá)40～41℃以上，成年犬發(fā)病一般不發(fā)熱。病犬常先嘔吐后腹瀉，嘔吐物中無食糜，開始為白色泡沫，繼而粘稠量少、沾取成絲，隨著脫水加重則成黃色，極個別的有淡綠色膽汁，帶血。排便次數(shù)增多，糞便呈黃色或灰黃色，稠厚惡臭，尿量減少，淡茶色。中期食欲廢絕，渴欲增加，頻繁嘔吐，腹瀉常呈噴射狀，糞便稀薄，混有大量黏液、氣泡或脫落的腸粘膜碎片。病后2～3天，糞便呈蕃茄汁樣，混有血絲，并有特殊血腥臭味。后期病犬消瘦、乏力、嗜睡、腹部蜷縮，眼球凹陷，皮膚彈性減退，因脫水致電解質(zhì)紊亂，易發(fā)生酸中毒而于數(shù)小時至兩天死亡。病程稍長的，末期體溫降低、肢端濕冷，可視粘膜蒼白，排便失禁，尾部及后腹部常被糞便污染，嚴(yán)重者肛門松弛開張，衰竭死亡。病程短的4～5天，長的1周以上。

（二）心肌炎型

多見于流行初期或缺乏母源抗體的4～6周齡幼犬。常突然發(fā)病，初期精神尚好，僅有輕度腹瀉、嘔吐和體溫升高，后發(fā)展迅速，可視粘膜蒼白，病犬迅速衰弱，呻吟、干咳、呼吸困難，聽診有心內(nèi)雜音，心律不齊，心電圖R波降低，S-T波升高。病犬常因急性心力衰竭突然死亡。病死率60%～100%，只有少數(shù)輕型病例可以治愈。

由于毒素的作用，易繼發(fā)呼吸困難、喘，最后心力衰竭死亡。毒素或作用于神經(jīng)，造成腦出血、神經(jīng)紊亂，作用于坐骨神經(jīng)，造成癱瘓。

四、病理變化

病毒侵入后，感染的頭兩天，在口咽部復(fù)制，通過血流傳播到其它器官，3～5天后出現(xiàn)病毒血癥。病毒通過血流到達(dá)腸粘膜，并發(fā)生全身性感染。

（一）腸炎型

病死犬可視黏膜蒼白，皮下干燥，血液粘稠暗紫色，犬胃內(nèi)空虛，底部有少量的出血點。小腸以空腸和回腸病變嚴(yán)重，腸壁漿膜暗紅色，漿膜下充血出血，黏膜壞死、脫落、絨毛萎縮，有時覆蓋纖維素性假膜。腸腔擴(kuò)張，內(nèi)容物水樣并混有血液和粘液，惡臭。大腸內(nèi)容物稀軟，帶血，粘膜上有許多出血點。腸系膜淋巴結(jié)腫大，切面呈彌漫性出血。組織學(xué)檢查，小腸后段粘膜上皮變性壞死，有些變性或完整的上皮細(xì)胞內(nèi)含有核內(nèi)包涵體。隱窩腫大，腸腺消失，殘存腺體擴(kuò)張，內(nèi)含壞死的細(xì)胞碎片。

（二）心肌炎型

病變主要局限在肺和心臟。肺水腫，局灶性充血、出血，使肺表面色彩斑斕。心臟擴(kuò)張，房室內(nèi)有出血快。心肌和心內(nèi)膜有非化膿性壞死灶，心肌損傷，有出血性斑紋，冠狀溝有少量出血點。組織學(xué)特征為心肌纖維彌漫性淋巴細(xì)胞浸潤，間質(zhì)水腫和局限性心肌變性，受損心肌細(xì)胞中常有核內(nèi)嗜堿性包涵體。膽囊充盈。

五、診斷

（一）臨床檢查：細(xì)小病毒病犬的嘔吐物往往是從白色、黃色到醬紅色泡沫，頻繁嘔吐，連續(xù)3～4天。待嘔吐停止，腹瀉開始。由灰黃色稀便到醬紅色血便。呈噴射狀水瀉，此時的病犬兩眼凹陷，弓背蜷縮，肛門松弛。可初診為犬細(xì)小病毒性腸炎。

（二）組織學(xué)檢查

取小腸后段和心肌病料作組織切片，腸上皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞可見核內(nèi)包涵體。

（三）血常規(guī)檢驗

自病犬耳緣靜脈采血，WBC 計數(shù)低于6.0×103/mm3明顯減少（正常值應(yīng)大于6.0×103/mm3）。

（四）快速檢驗

1.取病犬糞便，采用犬細(xì)小病毒快速診斷盒進(jìn)行檢驗，如呈陽性反應(yīng)，即可確診。

2.取糞便少許放于稀釋液中取一些滴于膠體金試紙條上5 min 后可見2 條紅線。

（五）病毒學(xué)檢查

1.電鏡檢查：采病犬糞便，直接或加等量PBS后混勻，離心，上清液加等量氯仿振動，再如前處理一次。吸取上清液滴于銅網(wǎng)上，用2%磷鎢酸負(fù)染后電鏡檢查。病初期可見大量均一直徑20～22nm圓形和六邊形散在病毒粒子。后期由于腸粘膜分泌性抗體出現(xiàn)，?？梢姶髩K聚集狀態(tài)的病毒粒子，效果欠佳。

2.免疫膠體金電鏡檢查：將接種CPV 的FK18 細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)3次凍融，加入驢抗犬細(xì)小病毒混勻，離心，用蒸餾水或PBS 懸浮沉淀物。向抗原抗體免疫復(fù)合物中加入稀釋的膠體金A蛋白液混勻，用蒸餾水或PBS充滿管，離心。將沉淀物懸浮，負(fù)染，干燥后觀察，可看到大量聚集的病毒粒子及抗體抗原免疫復(fù)合物和周圍附有的免疫金顆粒。

3.免疫電鏡檢查：用對流免疫電泳方法對犬PCV免疫復(fù)合物中抗體進(jìn)行檢測。

病毒分離與鑒定：新疫區(qū)為了對流行毒株進(jìn)行研究比較可采用此法。常用原代或次代犬胎腎或貓?zhí)ツI細(xì)胞培養(yǎng)物或它們的細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)。最簡便的病毒鑒定方法是接種3～5天后用熒光抗體檢測細(xì)胞中的病毒或測定培養(yǎng)液中病毒的血凝性。

（六）血清學(xué)檢查：常用血凝和血凝抑制試驗。發(fā)病早期，可取病犬細(xì)胞培養(yǎng)物或糞便進(jìn)行HA試驗測病毒校價。用0.5%～1%豬紅細(xì)胞作指示系統(tǒng)，HA＞1∶80可作為陽性感染指示標(biāo)準(zhǔn)。發(fā)病后期，由于IgM等抗體的出現(xiàn)，使CPV抗原失去血凝性，此時，用二巰基乙醇處理，便可檢查到糞便中的IgM等抗體和CPV抗原。血凝抑制試驗主要用于流行病學(xué)檢查，也可用于檢測糞便中的抗體。

（七）酶聯(lián)免疫吸附試驗：采用雙抗體法，應(yīng)用特制的酶標(biāo)反應(yīng)小管、板或纖維素膜。國內(nèi)外已研制出多種試劑盒。如用CPV單克隆酶標(biāo)抗體制成的CPV快速診斷盒，可在2h內(nèi)檢出糞便中的CPV抗原。

（八）PCR診斷技術(shù)：采用PCR試劑盒，簡便、靈敏、特異，可檢出微量CPV的DNA。

另外還可用熒光抗體試驗、免疫擴(kuò)散試驗、核酸探針技術(shù)等法診斷本病。

六、預(yù)防

預(yù)防本病主要依靠注射疫苗和嚴(yán)格犬的檢疫制度。目前國內(nèi)使用的疫苗有同源的和異源的滅活苗和弱毒苗兩類。異源苗是指貓泛白細(xì)胞減少癥滅活苗或弱毒苗，安全可靠。國外多傾向使用犬細(xì)小病毒滅活苗或弱毒苗。國內(nèi)多生產(chǎn)單苗、二聯(lián)苗、三聯(lián)苗和五聯(lián)苗。一般幼犬于6～8周齡首免，滅活苗接種9次，間隔2～3周；弱毒苗接種1次，以后每年加強(qiáng)免疫1次。母犬則在產(chǎn)前3～4 周免疫接種。

新購進(jìn)犬要問清防疫情況，隔離觀察，確保無病后再混群飼養(yǎng)。未經(jīng)免疫的犬應(yīng)先注射犬細(xì)小病毒單抗和犬瘟熱單抗，3周后再去接種疫苗，能起到很好地預(yù)防作用。

平時要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高抗病能力。在飼養(yǎng)方面，飼喂富有營養(yǎng)的飼料，提高犬的抗病力，減少疾病的發(fā)生。在管理方面，犬舍要做好清潔衛(wèi)生工作，減少病原體的存在與傳播，控制疫病的發(fā)生和流行。

畜主要做好定期檢疫工作，一旦發(fā)現(xiàn)本病，應(yīng)立即采取緊急隔離措施，固定飼養(yǎng)人員及工具，注意進(jìn)行犬舍、用具及環(huán)境的徹底消毒，對犬舍和飼養(yǎng)用具用2%～4%燒堿液、1%福爾馬林、0.5 %過氧乙酸反復(fù)消毒。對無治愈希望的病犬，應(yīng)盡早捕殺，焚燒深埋。

七、治療

本病早發(fā)現(xiàn)、早診治效果理想，治愈率可達(dá)90%以上。犬齡越大，治愈越快，心臟功能低下者、脫水嚴(yán)重者多預(yù)后不良。以提高動物機(jī)體免疫功能，調(diào)節(jié)機(jī)體滲透壓，防止脫水和繼發(fā)感染為原則。

（一）增強(qiáng)免疫

早期大劑量應(yīng)用抗犬細(xì)小病毒高免血清、單克隆抗體或球蛋白等生物制品可以中和體內(nèi)病毒。高免血清用量為0.5～1ml/kg 體重，連用3～5天。使用單抗等2～5ml/kg，每天1次，連用3天以上。同時配合轉(zhuǎn)移因子3～6萬或胸腺肽5～10mg，每日或隔日1次，連用3～5次。使用犬細(xì)小病毒性腸炎免疫球蛋白治療病犬治愈率高，平均達(dá)90.05%，尤其是小于3 月齡的幼犬，治愈率高達(dá)93.88%。

（二）合理補(bǔ)液

病犬常因劇烈嘔吐、腹瀉、脫水，造成機(jī)體電解質(zhì)平衡紊亂并發(fā)酸中毒，引起機(jī)體衰竭而短期死亡，因此補(bǔ)液是關(guān)鍵。應(yīng)根據(jù)脫水程度與全身狀況，確定補(bǔ)液量和所需添加的成分。一般靜脈補(bǔ)液量輕度脫水時為40～50ml/kg ，中度 50～80ml/kg ，重度 80～120ml/kg。

發(fā)生脫水的性質(zhì)以低滲和等滲為主。初期多屬低滲性脫水，補(bǔ)鹽為主，補(bǔ)糖為輔，臨床上以2份復(fù)方生理鹽水，1份5%的葡萄糖為宜。酌情加入ATP、輔酶A、VC、肌苷等。中后期發(fā)生等滲性脫水，甚至休克，應(yīng)補(bǔ)充等滲液或混合液（2∶2∶1）（2份生理鹽水、2份GS，1份1.5%NaCO3）。發(fā)生休克時，應(yīng)先用6%的右旋糖酐或代血漿20ml/kg靜注，然后滴注2∶2∶1混合液，也可肌注地塞米松5～15mg。同時應(yīng)注重補(bǔ)鉀，采取少量，多次、慢速、不宜過早的原則，一般每天靜注10%氯化鉀5～10毫升 2～3 天。病犬后期伴有震顫、抽搐時，應(yīng)考慮及時補(bǔ)鈣，用10%的CaGS 1～2ml/kg+5%GS 20～40ml/kg 緩慢靜注或滴注?；謴?fù)期組織細(xì)胞處于饑餓狀態(tài)，機(jī)體低血糖，宜以25%GS、10%KCL、VC、VB6、肌苷、氨基酸等幫助肝功能的恢復(fù)和組織細(xì)胞的生成與釋放。

在整個輸液過程中，須掌握以下原則：缺什么補(bǔ)什么，缺多少補(bǔ)多少；先鹽后糖，先快后慢；見尿補(bǔ)鉀，見酸補(bǔ)堿，見驚補(bǔ)鈣。

亦可采取腹腔補(bǔ)液，避免因靜脈輸液引起心肺負(fù)擔(dān)加重，出現(xiàn)輸液反應(yīng)。一般犬的腹腔補(bǔ)液量80m1/kg體重為宜，臨床上常用糖鹽水150ml～1500ml、VC 注射液1000mg～3000mg 、地塞米松注射液6mg～20mg腹腔注入。VK3 注射液5ml～10Mi，林可霉素注射液60萬～300萬單位或用頭孢唑林鈉0.5g～0.6g，肌注。體溫下降用肌苷2ml～8ml、樟腦磺酸鈉注射液1ml～3ml、阿托品注射液3mg～20mg，8小時肌注1次。

（三）對癥治療

1.止吐：可選用阿托品和維生素B6等。應(yīng)注意：當(dāng)病犬胃腸空虛且便血時，不宜選用動力性止吐藥，如胃復(fù)安、嗎丁啉會加重胃腸炎出血癥狀，可選用使胃腸活動靜息的止吐藥，如愛茂爾、阿托品和氯丙嗪等。

2.止瀉：主要著重于消炎。臨床用于治療的抗生素有氨基糖甙類、四環(huán)素類、喹諾酮類，共同特點是對最易引起腸炎的革蘭氏陰性菌有抑制或殺滅作用。但當(dāng)腹瀉為出血性時，不宜選用氯霉素；伴有頻繁嘔吐時，不應(yīng)選用對胃腸黏膜強(qiáng)刺激，易引起嘔吐的土霉素和四環(huán)素；喹諾酮類的吡哌酸和氟哌酸療效顯著，但常因口服給藥引起嘔吐。因此，選用氨基糖甙類抗生素，肌肉或靜脈注射較合理。對嚴(yán)重的腸道感染，可聯(lián)合應(yīng)用廣譜半合成青霉素，及短期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素。同時適時用藥減緩腸蠕動，如與氨基糖甙類抗生素混合肌注阿托品或口服普魯本辛、顛茄或復(fù)方苯乙哌啶等抗膽堿藥。

3.止血：止胃腸出血常用止血藥有：安絡(luò)血、止血敏、維生素K3 、止血芳酸等。發(fā)病初期用安絡(luò)血或止血敏，可降低毛細(xì)血管通透性、促使血小板釋放凝血因子；中期可用VK3 ，促使血漿凝血因子的生成；后期用止血芳酸或氨甲苯酸，抑制纖維蛋白溶解。同時補(bǔ)充適量CaGS和維生素，可降低消化道黏膜通透性，提高療效，促進(jìn)損傷愈合。

（四）抑制病原與預(yù)防繼發(fā)感染

以選用抗病毒藥為主，如病毒靈、病毒唑等。同時，使用抗菌藥如氨芐西林、慶大霉素等防止繼發(fā)細(xì)菌感染。但不要長時間使用，以防腸道正常菌群失調(diào)，反而延緩腸道消化功能的恢復(fù)。

（五）輔助療法

1.灌腸：因病犬的嘔吐中樞反應(yīng)靈敏, 口服用藥一般不宜采用，可將藥物灌腸吸收，對于應(yīng)用腸道止血藥效果更佳。可先用0.1%高錳酸鉀溶液不保留灌腸,清洗腸內(nèi)糞便和瘀血。然后用諾氟沙星、小兒瀉痢停、鞣酸苦參堿膠囊、甲硝唑片、云南白藥膠囊、安絡(luò)血片碾成粉末混合加入止血敏注射液，口服補(bǔ)液鹽水(ORS)中，應(yīng)保留灌腸20分鐘以上，使藥液達(dá)到整個小腸。也可用白頭翁湯合郁金散加減，水煎灌腸。每天1次，連用2～3次，具有良好的止瀉、止血、消炎的效果。

2.輸血療法：采用相合血試驗選擇供血犬，取抗凝血10～15ml加入5%葡萄糖生理鹽水和1支地塞米松一次靜注，再作一般抗病毒治療1～2天便可治愈不復(fù)發(fā)。因為輸血可補(bǔ)充受血病犬的凝血因子，迅速刺激機(jī)體的造血機(jī)能，提高機(jī)體的免疫抗病力，所以起到了加快戰(zhàn)勝病毒的效果。

（六）中醫(yī)治療

綜合臨床癥狀及病理變化，可將其病理病機(jī)概括為：濕熱之毒內(nèi)郁脾腑，侵入營血，傷脾耗血。第一病位是小腸，第二病位是心。小腸屬脾，治療當(dāng)以調(diào)理脾腑運(yùn)化水濕為基礎(chǔ)，宣化清解濕毒為主，涼血益陰解血毒為輔。

1.藥物治療：發(fā)病初期為濕毒內(nèi)郁，脾氣受損。治療以化濕解毒為主，輔以健脾理氣、清熱涼血。藥用石菖蒲、木通、連翹、茵陳、生白術(shù)、白頭翁、苦參、茜草、虎杖等。 發(fā)病中期為濕毒擁盛，氣機(jī)逆亂，毒入心營、耗血傷氣。治療宜化濕解毒清熱、止嘔、涼血、補(bǔ)陰益氣。藥用川連、苦參、飛滑石、玄參、雙花、藿香、蛇舌草、穿心蓮、生地、黨參、虎杖、茜草、地榆、郁金、朱砂、紫草等。發(fā)病后期為陰竭陽脫、氣陰兩敗。治療用益陰回陽之法，宜重陰重陽兼以益氣。用洋參附子湯一般可使危重病情得到緩解。在病犬精神、體力恢復(fù)后，再配以化濕解毒、益陰涼血之藥調(diào)理，可參照黃連解毒湯、藿香正氣散與炙甘草湯的組方適當(dāng)加減，將三方化為一方用，可得良效。

2.針灸療法：針灸脾俞、胃俞、三焦俞、大腸俞、關(guān)元俞、小腸俞、后海穴。

（七）中西醫(yī)結(jié)合治療

合理用藥效果更佳。

（八）加強(qiáng)護(hù)理

病初要禁食禁水1～2天，若出現(xiàn)好轉(zhuǎn)再給予少量易消化的營養(yǎng)餐，采用多酶片、復(fù)合維生素B等促進(jìn)消化機(jī)能藥物，以促進(jìn)患犬恢復(fù)食欲，達(dá)到疾病康復(fù)的目的；出現(xiàn)體溫下降的病犬可用250W的紅外線燈加熱以利于體溫回升。

(作者單位：陸冠亞，南京出入境檢驗檢疫局，211106；王仍瑞，廈門出入境檢驗檢疫局，361012）

（編輯：李 冰）