于長春 韓 慧 陳 芳

（1山東省棗莊市臺兒莊區(qū)澗頭集鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合辦公室，山東省棗莊市 277415；2山東省棗莊市山亭區(qū)農(nóng)業(yè)局，山東省棗莊市 277200）

公豬精液的保存三法

于長春1韓 慧2陳 芳2

（1山東省棗莊市臺兒莊區(qū)澗頭集鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合辦公室，山東省棗莊市 277415；2山東省棗莊市山亭區(qū)農(nóng)業(yè)局，山東省棗莊市 277200）

公豬精液保存的原則是抑制精子活動，降低其代謝速度，以便達到延長精子存活時間的目的。本文分別闡述了保存精液的三種方法及其注意事項，對豬的人工授精工作具有較強的指導意義。

公豬；精液；保存方法

公豬精液的保存原則是抑制精子活動，降低其代謝速度，以便達到延長精子存活時間的目的。為了抑制精子活動，降低其代謝水平，普遍采用的保存方法是降溫，隨著溫度的降低，精子趨于靜止，其能量消耗也大為減少。精子降溫保存猶如動物的冬眠一樣，精子并未喪失生命力，一旦溫度升高，環(huán)境適宜，精子就會重新活動起來。保存精液的方法如果按溫度來分，可分為常溫保存、低溫保存和超低溫保存3種。從保存期限來看，前兩種保存期較短，為1～7天，后一種保存期較長，可達數(shù)月至數(shù)年。

1 常溫保存

1.1 保存溫度

指精液稀釋后保存在一般溫度下，如室溫下、冷水中、保溫瓶中或地窖中。常溫保存的溫度一般在10～25℃之間。在這種溫度下，精子運動雖明顯減弱或消失，但其代謝過程并未停止，只是有所降低。因此，只能在一定限度內(nèi)延長精子存活時間，一般可保存3天左右。此法因為不需要低溫設備，在實際生產(chǎn)中具有一定實用價值。在常溫下保存的精液，易孳生微生物，故在稀釋液中必須加入一定量的抗生素（稀釋液配方為葡萄糖6g、檸檬酸鈉0.35g、乙二胺四乙酸鈉0.37g、碳酸氫鈉0.12g、鏈霉素10萬單位、青霉素3萬單位、蒸餾水100mL），稀釋比例為精液︰稀釋液=1︰0.5）。

1.2 冷水保存法

在農(nóng)村沒有冷源條件時，可用冷水保存精液，常用的兩種方法為保溫瓶保存和水井保存。

1.2.1 水井保存法

將精液瓶用塑料袋裝好密封，放在底部穿孔的竹筒或竹籃等容器內(nèi)，再把竹筒或竹籃連同精液瓶一起放到井底保存，用時從井下取出。

1.2.2 保溫瓶保存法

將新鮮的井水裝入廣口保溫瓶（也叫冰壺）內(nèi)，精液瓶裝在塑料袋里，將塑料袋浸在冷水中，每天換水1次。

2 低溫保存

指在常溫下進一步降低溫度，使接近冰點，但使精液不致結冰。方法是把稀釋的精液（精液稀釋應在精液采出后盡快進行，而且精液與稀釋液的溫度必須調(diào)整到一致，一般是將精液與稀釋液置于同一溫度中進行稀釋，稀釋比例為精液︰稀釋液=1︰0.5。常用的豬精液稀釋液配方有葡檸稀釋液——葡萄糖5g、檸檬酸鈉 0.5g、蒸餾水100mL和葡檸乙液——葡萄糖5g、檸檬酸鈉0.3g、乙二胺四乙酸 0.1g、蒸餾水100mL）放在冰箱內(nèi)或裝有冰塊的保溫瓶中，溫度一般控制在0～5℃之間（精液在低溫保存之前，需經(jīng)預冷平衡，從30℃降至 0～5℃大約需要 1～2小時完成降溫全過程，以每分鐘降溫0.2℃左右為宜）。在這種溫度下，精子運動完全停止，代謝顯著降低，故保存時間長于常溫保存（一般能保存6～8天）。精液使用前，要鏡檢精子的活力，活力低于0.6或死精多的不要使用。此方法在超低溫冷凍豬精液未應用于生產(chǎn)之前，在豬人工授精工作中起到了重要作用。

3 超低溫保存

此方法是目前最先進的保存方法，是將精液的溫度降到冰點以下，使精液凍結后保存。

3.1 保存溫度

超低溫保存的溫度一般為-196℃（液氮）。在此溫度下，精子的代謝完全停止，保存時間較長，經(jīng)數(shù)月甚至數(shù)年后仍可應用。冷凍精液使用最普遍的冷源是液氮。應用超低溫保存法，須保證冷源（液氮）的供應不能中斷。在應用液氮罐保存時，應隔一段時間加一次液氮。

3.2 稀釋冷凍

當精液采集后，在30～32℃的溫度條件下，靜置半小時，或?qū)θ菥弘x心處理 10分鐘，轉速為1500～2000轉/分鐘，進行濃縮，除去精清。而后用1號稀釋液稀釋（1號稀釋液為等溫的脫脂乳，按精液︰稀釋液=1︰0.5的稀釋比例稀釋），經(jīng)1小時溫度降至15℃， 平均每 10分鐘下降 2.5～2.8℃；之后再用同溫的2號稀釋液進行第二次稀釋（2號稀釋液為蔗糖卵黃液，其配方是：12%的蔗糖液：卵黃液=75︰25，按原精液量1︰1的稀釋比例稀釋），再經(jīng)2～3小時，溫度降至8℃，平均每10分鐘下降0.47℃，最后再用3號稀釋液稀釋（3號稀釋液為等溫含甘油的蔗糖卵黃液，其配方是：12%的蔗糖液︰甘油︰卵黃液=75︰5︰20，按原精液量1︰1的稀釋比例稀釋），再靜置0.5～1.0小時，待溫度降至5℃時，按一定程序進行顆粒滴凍。滴凍的方法是，用5mL的注射器吸取稀釋好的精液，在盛有液氮的鋁盒內(nèi)進行滴凍，每粒0.1mL。

3.3 溫水解凍

冷凍精液在使用時，需進行解凍。解凍時取1mL解凍液（解凍需要使用解凍液，同時也是精液再次稀釋的過程，解凍液常用的配方為：葡萄糖3.7g，二水檸檬酸鈉0.6g，乙二胺四乙酸0.125g，碳酸氫鈉0.125g，氧化鉀0.075g，青霉素10萬單位，鏈霉素0.1g，加蒸餾水至100mL），裝入小試管內(nèi)，放在40～55℃的溫水中，使解凍液升溫，然后放1粒精液到解凍液中，由溫水中取出小試管，并不停的搖動，使之融化。解凍后的顆粒精液，經(jīng)顯微鏡檢查合格后，應立即給母豬輸精。