劉海軍 孫晉民 賈蘭玲 (中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中心一部暨中藥工程實(shí)驗(yàn)室，遼寧 沈陽 000)

細(xì)葉杜香(Ledum palustre L.Var.Angustum E.Busch)是杜鵑花科杜香屬(Ericaceae ledum)常綠直立小灌木，主要分布于我國(guó)東北(大、小興安嶺，長(zhǎng)白山)、朝鮮、日本、西伯利亞、北美、歐洲等地，生于比較濕潤(rùn)的溝谷和水甸子，種子繁殖。細(xì)葉杜鵑的葉、枝、花和果實(shí)中含有揮發(fā)油。揮發(fā)油可以入藥，有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、擴(kuò)張血管、降壓、殺菌止癢等作用，對(duì)慢性支氣管炎、結(jié)腸炎、急性鼻炎、流感、咳嗽、皮膚病有一定療效〔1，2〕。我國(guó)對(duì)杜香油的利用始于60年代，主要用于醫(yī)藥、香料行業(yè)。關(guān)于其體內(nèi)外抗腫瘤作用至今未見報(bào)道。本研究主要探討杜香提取物熊果酸的抗腫瘤作用。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑 H22小鼠肝癌細(xì)胞株由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所提供，用昆明種小鼠傳代保種;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用昆明種小鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;杜香采集地為黑龍江省加格達(dá)奇克河地區(qū)，由齊齊哈爾大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院劉慶華教授饋贈(zèng)。

1.2 杜香提取物熊果酸的制備 采用水蒸氣蒸餾法，置杜香于圓底燒瓶?jī)?nèi)于67℃回流提取，合并流液，過濾冷藏備用。

1.3 H22荷瘤小鼠模型建立 取H22細(xì)胞，加入含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞密度為5 ～6×106/ml，取0.2 ml細(xì)胞懸液接種于昆明種小鼠背部皮下，建立實(shí)體瘤小鼠模型。

1.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 建立實(shí)體瘤小鼠模型后，將小鼠平均分成4組，每組15只，實(shí)驗(yàn)組(熊果酸組)腹腔分別注射0.25、0.5、1.0 mg/kg熊果酸;正常對(duì)照組給予生理鹽水，按0.1 ml/g等容注入。連續(xù)給藥5 d后停藥，觀察20 d，取皮下接種的實(shí)體瘤組織稱重，計(jì)算腫瘤抑制率，實(shí)體瘤腫瘤抑制率(%)=(對(duì)照組小鼠瘤質(zhì)量-實(shí)驗(yàn)組小鼠瘤質(zhì)量)/對(duì)照組小鼠瘤質(zhì)量×100%。

2 結(jié)果

腹腔注射杜香提取物對(duì)小鼠荷瘤H22腹水瘤的生長(zhǎng)具有明顯抑制作用，呈一定劑量依賴關(guān)系，且對(duì)荷瘤動(dòng)物的體重增長(zhǎng)沒有影響，提示杜香提取物無毒性。見表1。

表1 杜香提取物對(duì)小鼠荷瘤H22腹水瘤的生長(zhǎng)抑制作用(± s，n=15)

表1 杜香提取物對(duì)小鼠荷瘤H22腹水瘤的生長(zhǎng)抑制作用(± s，n=15)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.05

組別 劑量(g/kg)動(dòng)物體重用藥前 用藥后瘤重(g)抑瘤率(%)對(duì)照組 － 19.1 30.5 3.456±0.929 －實(shí)驗(yàn)組 0.25 18.6 28.6 2.456±0.7431) 25.93 0.50 18.9 29.9 1.862±0.8061) 44.39 1.00 20.0 28.9 1.862±0.8061)65.56

3 討論

談華等〔3〕報(bào)道杜香揮發(fā)油對(duì)青霉菌和金黃色葡萄球菌有抑制和殺滅作用，不同菌類、菌體對(duì)杜香揮發(fā)油的敏感程度不同，酵母菌最敏感，青霉菌和金黃色葡萄球菌次之。Tomohiko〔4〕等研究發(fā)現(xiàn)杜香中熊果酸提取物對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞株有抑制作用;Murakami〔5〕等認(rèn)為杜香成分中含有一種抗氧化活性成分。關(guān)爽等〔6〕研究表明杜香熊果酸提取物對(duì)遺傳損傷有保護(hù)作用。Thaloor等〔7〕發(fā)現(xiàn)熊果酸能抑制細(xì)胞微管的形成和破壞已形成的微管，降低53 kD和72 kD金屬蛋白酶的明膠降解活性，減少72 kD金屬蛋白酶的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，認(rèn)為熊果酸的抗血管生成作用是通過調(diào)節(jié)血管生成中蛋白水解酶的活性而實(shí)現(xiàn)的。杜香熊果酸提取物能降低細(xì)胞微核的發(fā)生率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同濃度杜香提取物0.25、0.5、1.0 mg/kg對(duì)荷瘤H22小鼠腹水瘤的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，且與陰性對(duì)照組有顯著差異，可見在不同劑量下，杜香提取物有明顯抗腫瘤作用。

有關(guān)中藥杜香有效成分的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)有一定成果，但仍然存在不足，如中藥有效成分的分離和純化還需進(jìn)一步加強(qiáng)，以及中藥有效成分抗腫瘤機(jī)制尚需進(jìn)一步闡明等;這是我們后續(xù)探究的重點(diǎn)。

1 林克勤.杜香生物活性物質(zhì)〔J〕.國(guó)土與自然資源研究，1995;17(1):73-6.

2 Huang MT，Ho CT，Wang ZY，et al.Inhibition of skin tumorigenesis by rosemary and its constituents carnosol and ursolic acid〔J〕.Cancer Res，1994;54(3):701.

3 談 華，劉慶華.細(xì)葉杜香揮發(fā)油抑菌和殺菌作用的研究〔J〕.齊齊哈爾大學(xué)學(xué)報(bào)，2005;21(3):33-6.

4 Tomohiko Kutsuna，Zheng HC，Hekmat Osman Abdel-Aziz，et al.High JC virus load in tongue carcinomas may be a risk factor for tongue tumorigenesis〔J〕.Virchows Archiv，2008;452(4):405-10.

5 Murakami S，Takashima H，Sato-Watanabe M，et al.Ursolic acid，an antagonist for transforming growth factor TGF-1〔J〕.FEBS Lett，2004;566(1):55-9.

6 關(guān) 爽，盧 靜，劉 靜.杜香熊果酸提取物對(duì)小鼠遺傳損傷的保護(hù)作用〔J〕.癌變畸變突變，2009;21(1):68-9.

7 Thaloor D，Singh K，Sidhu GS，et al.Inhibition of angiogenie differentiation of human umbilieal vein endothelial cells by cureumin〔J〕.Cell Growth Differ，1998;9(4):205-12.