張艷慧 郭素麗 王艷娜 司秋菊 陳鳳靜 王鑫國

(河北醫(yī)科大學中西醫(yī)結合學院，河北 石家莊 050091)

目前，隨著人們生活水平的不斷提高、飲食結構的改變及受不良飲食習慣的影響，越來越多人出現高血壓、血脂異常、冠心病、糖尿病。這些疾病血脂異常密切相關，是目前我國發(fā)病率、致殘率和死亡率高的疾病。血脂異常正是導致包括肥胖癥、糖尿病、高血壓病、動脈粥樣硬化癥等一系列病理狀態(tài)在內的代謝綜合征的共同危險因素。因此積極預防干預血脂異常顯得尤為重要。本實驗通過高脂飲食喂養(yǎng)法，建立大鼠血脂異常模型，應用大黃蟄蟲丸干預，測定血清脂聯(lián)素(APN)和瘦素(LP)水平，探求血脂異常與APN、LP關系，進一步研究大黃蟄蟲丸作用機制，為中藥治療血脂異常相關疾病提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選用雄性清潔級Wistar大鼠(購自河北醫(yī)科大學動物實驗中心)，共50只，體重180～200 g。

1.2 主要藥物、試劑 膽固醇(平頂山市東珠生物制品有限公司);膽酸鈉(河北斯邁特生物技術有限公司);丙硫氧嘧啶 (上海朝暉藥業(yè)有限公司);大黃蟄蟲丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠);血脂康(北京北大威信生物科技有限公司);大鼠脂聯(lián)素ELISA試劑盒(美國BPB生物技術公司);瘦素放射免疫分析盒(北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 動物模型制備 雄性Wistar大鼠50只，體重180～200 g，隨機分為5組:空白對照組(A組)10只、模型組(B組)10只、大黃蟄蟲丸低劑量組(C組)10只、大黃蟄蟲丸高劑量組(D組)10只、血脂康組(E組)10只。空白對照組采用普通飼料喂養(yǎng)，其余4組采用高脂飼料(高脂飼料由87.6%普通飼料、2%的膽固醇、0.2%的膽酸鈉、0.2%的丙硫氧嘧啶和10%的豬油組成)喂養(yǎng)。

1.3.2 分組給藥 空白對照組(A):普通飼料+蒸餾水10 ml/kg灌胃;模型組(B):高脂飼料+蒸餾水10 ml/kg灌胃;大黃蟄蟲丸低劑量組(C):高脂飼料+大黃蟄蟲丸1 g生藥/kg灌胃;大黃蟲蟄丸高劑量組(D):高脂飼料+大黃蟄蟲丸2 g生藥/kg灌胃;血脂康組(E):高脂飼料+血脂康0.2 g/kg灌胃;連續(xù)喂養(yǎng)給藥8 w，末次給藥后，禁食12 h，斷頭取血，迅速離心，留取血清標本，－4℃保存，待用于生化指標及血清脂聯(lián)素、瘦素檢測。

1.3.3 檢測指標 血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，采用全自動生化分析儀測定;血清LP采用放射免疫分析法測定;血清APN采用雙抗體夾心ABC-ELISA檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。各組數據均進行正態(tài)檢驗，數值變量用±s表示，各組數據比較前先進行方差齊性檢驗，滿足正態(tài)性及方差齊性，用單因素方差分析，多組比較采用方差分析(ANOVA)，組間比較采用LSD檢驗。

2 結果

2.1 大黃蟄蟲丸對血脂的影響 模型組與空白對照組相比，大鼠TG、TC、LDL-C均明顯升高(P＜0.01)，而HDL-C明顯降低(P＜0.01);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與模型組相比，TG、TC、LDL-C均明顯降低(P＜0.05)，而HDL-C明顯升高(P＜0.01);大黃蟄蟲丸高劑量組與低劑量組相比，TG、TC、LDL-C降低，有優(yōu)于低劑量組的趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而大黃蟄蟲丸低劑量組大鼠HDL-C升高，有優(yōu)于高劑量組的趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與血脂康組相比，大鼠TC、TG、LDL-C降低，有優(yōu)于血脂康組的趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 各組血脂水平(±s，mmol/L，n=10)

表1 各組血脂水平(±s，mmol/L，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

組別TC TG LDL-C HDL-C A組 5.99±0.811)0.59±0.132)1.63±0.122)1.57±0.322)B組 7.69±0.14 1.89±0.47 2.14±0.11 0.31±0.04 C組 5.47±0.582)0.53±0.142)1.50±0.302)1.40±0.452)D組 5.41±1.121)0.47±0.172)1.45±0.142)1.33±0.172)E組 6.42±0.631)0.56±0.552)1.51±0.122)1.77±0.552)

2.2 大黃蟄蟲丸對大鼠血清APN水平的影響 結果見表2，模型組與空白對照組相比，大鼠APN明顯降低(P＜0.01);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與模型組相比，大黃蟄蟲丸高劑量組大鼠APN明顯升高(P＜0.05)，而大黃蟄蟲丸低劑量組大鼠APN升高，有優(yōu)于模型組趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);大黃蟄蟲丸高劑量組與大黃蟄蟲丸低劑量組相比，高劑量組APN升高，有優(yōu)于低劑量組的趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與血脂康組相比，大黃蟄蟲丸高劑量組APN升高，有優(yōu)于血脂康組的趨勢，但均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.3 大黃蟄蟲丸對大鼠血清瘦素(LP)水平的影響 結果見表2。模型組與空白對照組相比，LP明顯升高(P＜0.01);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與模型組相比，大黃蟄蟲丸低、高劑量組大鼠LP均明顯降低(P＜0.01);大黃∏蟲丸高劑量組與大黃蟄蟲丸低劑量組相比，低劑量組LP降低，有優(yōu)于高劑量組的趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與血脂康組相比，大黃蟄蟲丸低、高劑量組LP降低，有優(yōu)于血脂康組的趨勢，但均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

表2 大黃蟄蟲丸對血清APN、LP水平的影響(± s，n=10)

表2 大黃蟄蟲丸對血清APN、LP水平的影響(± s，n=10)

組別 APN(μg/ml) LP(ng/ml)A組 7.86±1.402) 0.51±0.182)B組 3.59±0.98 0.77±0.13 C組 4.83±1.69 0.33±0.062)D組 5.56±1.531) 0.35±0.182)E組 5.52±0.961) 0.36±0.162)

3 討論

血脂異常即脂代謝紊亂，主要表現為血TC、TG、LDL-C升高，HDL-C降低。大量流行病學研究證實，血脂異常有年輕化趨勢，血脂異常是動脈粥樣硬化、冠心病和糖尿病等慢性病的重要危險因素。

APN是脂肪細胞分泌的一種內源性生物多肽或蛋白質，最近發(fā)現的APN在正常人血漿中大量表達，是脂肪組織中最豐富的基因轉錄產物，是目前所知的唯一具有保護作用的脂肪細胞因子，其在冠心病、肥胖、糖尿病患者中均呈低水平，而且與一些心血管疾病危險因子相關。在脂肪組織分泌的脂肪細胞因子中，APN是唯一一個隨著脂肪組織的體積變大，其在血循環(huán)中的濃度反而降低的因子。即有隨體內脂肪組織逐漸增多而血漿濃度逐漸下降的特征，這表明它在血脂異常時存在一種負反饋機制。

LP又稱消脂素、苗條素，是1994年鑒定的由肥胖基因(Ob基因)編碼的產物，是一種具有146個氨基酸的蛋白質，它主要由脂肪細胞表達，通過血腦屏障作用于下丘腦的LP受體，或直接作用于靶細胞的LP受體而發(fā)揮生物學作用，其功能主要是抑制食欲和調節(jié)機體能量代謝，可使體重下降。LP水平與脂肪百分含量有很強的相關性，脂肪組織分泌LP，經過以下途徑起作用:一是作用于下丘腦的攝食中樞，產生飽脹感，從而抑制攝食行為;二則作用于分布在其他組織的瘦素受體如肝臟、腦、肺、腎臟、胰腺、睪丸和脂肪組織，使其活性增加，間接或直接起生物學效應。

大量資料證實，APN可能是將肥胖、冠心病、糖尿病與胰島素抵抗連接起來的橋梁。血清APN水平在肥胖和血脂異常狀態(tài)下顯著降低〔1～3〕。LP與血脂異常密切相關，研究顯示大多數肥胖和患糖尿病的動物或患者血漿LP水平顯著升高，當給予外源性APN后，血脂異常被改善，而且當給予一個生理濃度的LP時，血脂異常進一步改善〔4，5〕，給予外源性APN可增加胰島素對肝糖原輸出的抑制作用，降低血糖濃度，通過促進肝及肌細胞脂肪的燃燒與能量消耗，從而降低細胞內TG水平，減輕餐后血清FFA的升高，增加肝臟和外周組織的胰島素敏感性。總之，機體內環(huán)境通過LP、APN與胰島素等激素間的“瘦素-胰島素”平衡環(huán)、“胰島素-脂聯(lián)素”調節(jié)環(huán)、“瘦素-胰島素”調節(jié)環(huán)等的自身適應性調節(jié)，使超重或輕度肥胖的患者基本保持了正常的血糖、血脂、血壓水平。但當機體體重大量病理性增加后，其機體內分泌體系為減少體內能量的蓄積做出的適應性調節(jié)，會改變各種平衡環(huán)的內在動態(tài)平衡和相互間動態(tài)平衡，這為糖尿病、高血壓等疾病的發(fā)生發(fā)展埋下隱患。

從實驗結果中可知，模型組大鼠的血清APN水平降低，血清LP水平升高，說明血脂異常大鼠存在APN水平下降、LP水平升高;而大黃蟄蟲丸低、高劑量組大鼠血清APN水平升高，血清LP水平降低，表明大黃蟄蟲丸可增加血脂異常大鼠APN分泌，減少LP分泌，這可能是其防治血脂異常機制之一。

1 Shimizu H，Oh-I S，Tsuchiya T，et al.Pioglitazone increases circulating adiponectin levels and subsequently reduces TNF-alpha levels in type 2 diabetic patients:a randomized study〔J〕.Diabet Meb，2006;23(3):253-7.

2 Lee S，Bacha F，Gungor N，et al.Racial differences in adiponectin in youth:relationship to visceral fat and insulin sensitivity〔J〕.Diabet Care，2006;29(1):51-6.

3 Greenberg AS，Obin MS.Obesity and the role of adipose tissue in inflammation and metabolism〔J〕.Am J Clin Nutr，2006;83(2):461-5.

4 Yamauchi T，Kamon J，Waki H，et al.The fat-derived hormone adiponectin reverses insulin resistance associated with both lipoatrophy and obesity〔J〕.Nat Med，2001;7(8):941-6.

5 Delporte ML，E1 Mkadem SA，Quisquater M，et al.Leptin treatment markedly increased plasma adiponectin but barely decreased plasma resistin of ob/ob mice〔J〕.Am J Physiol Endocrinol Metab，2004;287(3):E446-53.