張艷慧 郭素麗 王艷娜 司秋菊 陳鳳靜 王鑫國
(河北醫(yī)科大學中西醫(yī)結合學院,河北 石家莊 050091)
目前,隨著人們生活水平的不斷提高、飲食結構的改變及受不良飲食習慣的影響,越來越多人出現高血壓、血脂異常、冠心病、糖尿病。這些疾病血脂異常密切相關,是目前我國發(fā)病率、致殘率和死亡率高的疾病。血脂異常正是導致包括肥胖癥、糖尿病、高血壓病、動脈粥樣硬化癥等一系列病理狀態(tài)在內的代謝綜合征的共同危險因素。因此積極預防干預血脂異常顯得尤為重要。本實驗通過高脂飲食喂養(yǎng)法,建立大鼠血脂異常模型,應用大黃蟄蟲丸干預,測定血清脂聯(lián)素(APN)和瘦素(LP)水平,探求血脂異常與APN、LP關系,進一步研究大黃蟄蟲丸作用機制,為中藥治療血脂異常相關疾病提供實驗依據。
1.1 實驗動物 選用雄性清潔級Wistar大鼠(購自河北醫(yī)科大學動物實驗中心),共50只,體重180~200 g。
1.2 主要藥物、試劑 膽固醇(平頂山市東珠生物制品有限公司);膽酸鈉(河北斯邁特生物技術有限公司);丙硫氧嘧啶 (上海朝暉藥業(yè)有限公司);大黃蟄蟲丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠);血脂康(北京北大威信生物科技有限公司);大鼠脂聯(lián)素ELISA試劑盒(美國BPB生物技術公司);瘦素放射免疫分析盒(北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 動物模型制備 雄性Wistar大鼠50只,體重180~200 g,隨機分為5組:空白對照組(A組)10只、模型組(B組)10只、大黃蟄蟲丸低劑量組(C組)10只、大黃蟄蟲丸高劑量組(D組)10只、血脂康組(E組)10只。空白對照組采用普通飼料喂養(yǎng),其余4組采用高脂飼料(高脂飼料由87.6%普通飼料、2%的膽固醇、0.2%的膽酸鈉、0.2%的丙硫氧嘧啶和10%的豬油組成)喂養(yǎng)。
1.3.2 分組給藥 空白對照組(A):普通飼料+蒸餾水10 ml/kg灌胃;模型組(B):高脂飼料+蒸餾水10 ml/kg灌胃;大黃蟄蟲丸低劑量組(C):高脂飼料+大黃蟄蟲丸1 g生藥/kg灌胃;大黃蟲蟄丸高劑量組(D):高脂飼料+大黃蟄蟲丸2 g生藥/kg灌胃;血脂康組(E):高脂飼料+血脂康0.2 g/kg灌胃;連續(xù)喂養(yǎng)給藥8 w,末次給藥后,禁食12 h,斷頭取血,迅速離心,留取血清標本,-4℃保存,待用于生化指標及血清脂聯(lián)素、瘦素檢測。
1.3.3 檢測指標 血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),采用全自動生化分析儀測定;血清LP采用放射免疫分析法測定;血清APN采用雙抗體夾心ABC-ELISA檢測。
1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。各組數據均進行正態(tài)檢驗,數值變量用±s表示,各組數據比較前先進行方差齊性檢驗,滿足正態(tài)性及方差齊性,用單因素方差分析,多組比較采用方差分析(ANOVA),組間比較采用LSD檢驗。
2.1 大黃蟄蟲丸對血脂的影響 模型組與空白對照組相比,大鼠TG、TC、LDL-C均明顯升高(P<0.01),而HDL-C明顯降低(P<0.01);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與模型組相比,TG、TC、LDL-C均明顯降低(P<0.05),而HDL-C明顯升高(P<0.01);大黃蟄蟲丸高劑量組與低劑量組相比,TG、TC、LDL-C降低,有優(yōu)于低劑量組的趨勢,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05),而大黃蟄蟲丸低劑量組大鼠HDL-C升高,有優(yōu)于高劑量組的趨勢,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與血脂康組相比,大鼠TC、TG、LDL-C降低,有優(yōu)于血脂康組的趨勢,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。
表1 各組血脂水平(±s,mmol/L,n=10)
表1 各組血脂水平(±s,mmol/L,n=10)
與模型組比較:1)P<0.05,2)P<0.01;下表同
組別TC TG LDL-C HDL-C A組 5.99±0.811)0.59±0.132)1.63±0.122)1.57±0.322)B組 7.69±0.14 1.89±0.47 2.14±0.11 0.31±0.04 C組 5.47±0.582)0.53±0.142)1.50±0.302)1.40±0.452)D組 5.41±1.121)0.47±0.172)1.45±0.142)1.33±0.172)E組 6.42±0.631)0.56±0.552)1.51±0.122)1.77±0.552)
2.2 大黃蟄蟲丸對大鼠血清APN水平的影響 結果見表2,模型組與空白對照組相比,大鼠APN明顯降低(P<0.01);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與模型組相比,大黃蟄蟲丸高劑量組大鼠APN明顯升高(P<0.05),而大黃蟄蟲丸低劑量組大鼠APN升高,有優(yōu)于模型組趨勢,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05);大黃蟄蟲丸高劑量組與大黃蟄蟲丸低劑量組相比,高劑量組APN升高,有優(yōu)于低劑量組的趨勢,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與血脂康組相比,大黃蟄蟲丸高劑量組APN升高,有優(yōu)于血脂康組的趨勢,但均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
2.3 大黃蟄蟲丸對大鼠血清瘦素(LP)水平的影響 結果見表2。模型組與空白對照組相比,LP明顯升高(P<0.01);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與模型組相比,大黃蟄蟲丸低、高劑量組大鼠LP均明顯降低(P<0.01);大黃∏蟲丸高劑量組與大黃蟄蟲丸低劑量組相比,低劑量組LP降低,有優(yōu)于高劑量組的趨勢,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05);大黃蟄蟲丸低、高劑量組與血脂康組相比,大黃蟄蟲丸低、高劑量組LP降低,有優(yōu)于血脂康組的趨勢,但均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
表2 大黃蟄蟲丸對血清APN、LP水平的影響(± s,n=10)
表2 大黃蟄蟲丸對血清APN、LP水平的影響(± s,n=10)
組別 APN(μg/ml) LP(ng/ml)A組 7.86±1.402) 0.51±0.182)B組 3.59±0.98 0.77±0.13 C組 4.83±1.69 0.33±0.062)D組 5.56±1.531) 0.35±0.182)E組 5.52±0.961) 0.36±0.162)
血脂異常即脂代謝紊亂,主要表現為血TC、TG、LDL-C升高,HDL-C降低。大量流行病學研究證實,血脂異常有年輕化趨勢,血脂異常是動脈粥樣硬化、冠心病和糖尿病等慢性病的重要危險因素。
APN是脂肪細胞分泌的一種內源性生物多肽或蛋白質,最近發(fā)現的APN在正常人血漿中大量表達,是脂肪組織中最豐富的基因轉錄產物,是目前所知的唯一具有保護作用的脂肪細胞因子,其在冠心病、肥胖、糖尿病患者中均呈低水平,而且與一些心血管疾病危險因子相關。在脂肪組織分泌的脂肪細胞因子中,APN是唯一一個隨著脂肪組織的體積變大,其在血循環(huán)中的濃度反而降低的因子。即有隨體內脂肪組織逐漸增多而血漿濃度逐漸下降的特征,這表明它在血脂異常時存在一種負反饋機制。
LP又稱消脂素、苗條素,是1994年鑒定的由肥胖基因(Ob基因)編碼的產物,是一種具有146個氨基酸的蛋白質,它主要由脂肪細胞表達,通過血腦屏障作用于下丘腦的LP受體,或直接作用于靶細胞的LP受體而發(fā)揮生物學作用,其功能主要是抑制食欲和調節(jié)機體能量代謝,可使體重下降。LP水平與脂肪百分含量有很強的相關性,脂肪組織分泌LP,經過以下途徑起作用:一是作用于下丘腦的攝食中樞,產生飽脹感,從而抑制攝食行為;二則作用于分布在其他組織的瘦素受體如肝臟、腦、肺、腎臟、胰腺、睪丸和脂肪組織,使其活性增加,間接或直接起生物學效應。
大量資料證實,APN可能是將肥胖、冠心病、糖尿病與胰島素抵抗連接起來的橋梁。血清APN水平在肥胖和血脂異常狀態(tài)下顯著降低〔1~3〕。LP與血脂異常密切相關,研究顯示大多數肥胖和患糖尿病的動物或患者血漿LP水平顯著升高,當給予外源性APN后,血脂異常被改善,而且當給予一個生理濃度的LP時,血脂異常進一步改善〔4,5〕,給予外源性APN可增加胰島素對肝糖原輸出的抑制作用,降低血糖濃度,通過促進肝及肌細胞脂肪的燃燒與能量消耗,從而降低細胞內TG水平,減輕餐后血清FFA的升高,增加肝臟和外周組織的胰島素敏感性。總之,機體內環(huán)境通過LP、APN與胰島素等激素間的“瘦素-胰島素”平衡環(huán)、“胰島素-脂聯(lián)素”調節(jié)環(huán)、“瘦素-胰島素”調節(jié)環(huán)等的自身適應性調節(jié),使超重或輕度肥胖的患者基本保持了正常的血糖、血脂、血壓水平。但當機體體重大量病理性增加后,其機體內分泌體系為減少體內能量的蓄積做出的適應性調節(jié),會改變各種平衡環(huán)的內在動態(tài)平衡和相互間動態(tài)平衡,這為糖尿病、高血壓等疾病的發(fā)生發(fā)展埋下隱患。
從實驗結果中可知,模型組大鼠的血清APN水平降低,血清LP水平升高,說明血脂異常大鼠存在APN水平下降、LP水平升高;而大黃蟄蟲丸低、高劑量組大鼠血清APN水平升高,血清LP水平降低,表明大黃蟄蟲丸可增加血脂異常大鼠APN分泌,減少LP分泌,這可能是其防治血脂異常機制之一。
1 Shimizu H,Oh-I S,Tsuchiya T,et al.Pioglitazone increases circulating adiponectin levels and subsequently reduces TNF-alpha levels in type 2 diabetic patients:a randomized study〔J〕.Diabet Meb,2006;23(3):253-7.
2 Lee S,Bacha F,Gungor N,et al.Racial differences in adiponectin in youth:relationship to visceral fat and insulin sensitivity〔J〕.Diabet Care,2006;29(1):51-6.
3 Greenberg AS,Obin MS.Obesity and the role of adipose tissue in inflammation and metabolism〔J〕.Am J Clin Nutr,2006;83(2):461-5.
4 Yamauchi T,Kamon J,Waki H,et al.The fat-derived hormone adiponectin reverses insulin resistance associated with both lipoatrophy and obesity〔J〕.Nat Med,2001;7(8):941-6.
5 Delporte ML,E1 Mkadem SA,Quisquater M,et al.Leptin treatment markedly increased plasma adiponectin but barely decreased plasma resistin of ob/ob mice〔J〕.Am J Physiol Endocrinol Metab,2004;287(3):E446-53.