鄧躍花

（婁底眼科醫(yī)院，湖南 婁底 417000）

宮環(huán)養(yǎng)血顆粒是由阿膠、黃芪、黨參、白芍、當(dāng)歸、茜草、仙鶴草、佛手、續(xù)斷組成的中藥復(fù)方制劑，具有益氣、養(yǎng)血、止血作用。用于氣血虧虛所致的月經(jīng)淋漓不盡、經(jīng)期延長、神疲乏力、面色無華、唇舌色淡；上環(huán)、皮埋、產(chǎn)后見上述證候者。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（1525二元泵，2487雙通道檢測器，717自動進(jìn)樣器，Empower色譜工作站；美國Waters）；SG3300HP超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司，功率160W，頻率59kHz）；AG135電子分析天平（Mettler Toledo）；色譜柱：Shim-pack VP-ODS柱（5μm，4.6×250mm）；芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，0736-200118）；宮環(huán)養(yǎng)血顆粒（湖南安邦制藥有限公司，規(guī)格：8g×8袋，批號：110301、110323、110415）。乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，水為超純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-pack VP-ODS柱（5μm，4.6×250mm），流動相：乙腈-0.05%磷酸水溶液（16∶84）；流速：1.0mL/min；檢測波長：230nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL；在上述色譜條件下，芍藥苷的保留時(shí)間為12.7min，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算為9940。色譜圖見圖1。

2.2 實(shí)驗(yàn)溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h的芍藥苷對照品4.76mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.0476mg/mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

圖1 宮環(huán)養(yǎng)血顆粒的HPLC色譜圖

取宮環(huán)養(yǎng)血顆粒2g，精密稱定，加甲醇回流提取2次，每次加甲醇50mL，提取時(shí)間30min，過濾，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用水飽和正丁醇提取3次，每次30mL，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，移?0mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.3 陰性溶液的制備

取除白芍外的其余處方量藥材，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成方法制備缺白芍的陰性溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取上述對照品溶液10、15、20、25、30μL，注入液相色譜儀測定，記錄其峰面積積分值，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸，回歸方程為：Y=1.0897X+8.2152，r=0.9996。結(jié)果表明，芍藥苷在0.0476～0.912μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液在上術(shù)色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20μL，測定芍藥苷峰面積積分值，結(jié)果RSD=0.65%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液（批號：110301）20μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定芍藥苷峰面積積分值，結(jié)果RSD=1.21%，表明方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號：110301），在室溫下放置，每隔2h測定一次芍藥苷峰面積積分值，10h共測6次，結(jié)果RSD=0.66%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn)

取已測定含量的同一批號（110301）樣品（含芍藥苷0.19mg/g）2g，精密稱定，共6份，分別精密加入芍藥苷0.0476mg/mL的對照品溶液5mL，按供試品溶液制備方法項(xiàng)下自“加甲醇回流提取2次，每次加甲醇50mL，提取時(shí)間30min，過濾，濾液置水浴上蒸干，……”，依法制備并測定，結(jié)果見表1。

2.8 樣品含量測定

精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積積分值，并計(jì)算本品每袋中芍藥苷的含量，測定結(jié)果

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3 討 論

流動相選擇：參照文獻(xiàn)報(bào)道[1-3]，試驗(yàn)選擇了甲醇-水（7∶15）、乙腈-水（14∶86）、乙腈-0.05%磷酸水溶液（16∶84）等溶劑系統(tǒng)進(jìn)行考察，根據(jù)分離情況，選擇乙腈-0.05%磷酸水溶液（16∶84）系統(tǒng)測定芍藥苷，獲得了滿意結(jié)果。

中藥復(fù)方制劑中芍藥苷的含量測定方法較多，但用HPLC法對宮環(huán)養(yǎng)血顆粒中芍藥苷的含量進(jìn)行測定的方法未見報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對宮環(huán)養(yǎng)血顆粒中芍藥苷進(jìn)行測定，方法準(zhǔn)確、快速、簡便、重現(xiàn)性好，可為其質(zhì)量控制方法提供參考。

[1]張婷婷.HPLC法測定平肝降脂膠囊中芍藥苷的含量[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2010,4(2)：10-11.

[2]陳曉燕,李順祥.HPLC法測定阿歸養(yǎng)血糖漿中芍藥苷的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009,15(3)：81-82.

[3]楊立平.HPLC法測定阿歸養(yǎng)血顆粒中芍藥苷含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,14(7)：85-86.