唐曉光

（赤峰學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

青藏龍膽對(duì)四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

唐曉光

（赤峰學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

目的：探討不同劑量的青藏龍膽對(duì)CCl4所致的小鼠肝損傷的保護(hù)作用.方法：先采用青藏龍膽給藥，再采用CCl4所致的小鼠肝損傷模型，用賴(lài)氏法測(cè)定小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT含量,肝臟常規(guī)切片，觀察病理組織學(xué)改變.結(jié)果：不同劑量的青藏龍膽組血清ALT含量明顯低于CCl4組，鏡下病理顯示青藏龍膽對(duì)四氯化碳所致的小鼠急性化學(xué)性肝損傷有保護(hù)作用.

青藏龍膽；ALT；急性肝損傷

青藏龍膽（Flos Gentiance）系龍膽科龍膽屬植物，是青藏高原特有的藥用植物，目前資源尚未充分利用，該植物的帶根全草民間供藥用，其味苦，性寒，有清濕熱，瀉肝火，鎮(zhèn)咳，利喉，健胃等功效，主治感冒發(fā)燒，目赤咽痛，肺炎，咳嗽，胃炎，腦膜炎，氣管炎等.本實(shí)驗(yàn)觀察青藏龍膽對(duì)CCl4所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用.

1 材料和方法

1.1 藥品和試劑

青藏龍膽：購(gòu)自青海省西寧市八一路藏藥市場(chǎng)，由中藥教研室魏全嘉教授鑒定.

藥用部位：水提取液，1g/ml.

ALT試劑盒：南京生物建成研究所操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行四氯化碳：分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)W20051218

聯(lián)苯雙酯：聯(lián)苯雙酯片，25 mg/片，上海市醫(yī)藥股份有限公司天平制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)248004

1.2 儀器

721紫外分光光度計(jì)；切片機(jī)；數(shù)碼照相顯微鏡

1.3 實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型制備

取ICR遠(yuǎn)交系小鼠，雄性，體重（20±2），由青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，將實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為4組，每組動(dòng)物10只.A正常對(duì)照組，正常飼養(yǎng)，無(wú)外加條件，B CCl4肝損傷模型組，用生理鹽水0.2ml/20g小鼠灌胃，每天一次，連續(xù)10天.C青藏龍膽預(yù)防組，用青藏龍膽提取液0.2ml/20g小鼠灌胃，每天一次，連續(xù)10天.D聯(lián)苯雙酯片組：0.2ml/20g，連續(xù)10天，第11天進(jìn)行CCl4所致實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型制備；將CCl4與植物油按1：9配制，正常組給予植物油0.2ml/20g，其余各組給予CCl4植物油溶液0.2ml/20g，24小時(shí)后，小鼠斷頭取血，分離血清待測(cè)，同時(shí)，取出各組小鼠肝臟，用10%的福爾馬林固定作病理切片.

1.4 血清相關(guān)酶學(xué)測(cè)定

1.4.1 血清肝功能酶ALT的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每鼠斷頭取血，3000r/min離心15 min，分離血清，按照ALT試劑盒說(shuō)明測(cè)定ALT活性.

1.4.2 肝病理組織學(xué)觀察

每鼠斷頭取血后，迅速摘取肝臟，取各鼠肝組織用百分之十甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，用切片機(jī)切片，片厚8um，HE常規(guī)染色，照相顯微鏡下觀察肝組織的病理變化及照相.

1.6 實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，采用±s表示

組別 鼠數(shù) ALT正常組 A組 10 57.89±7.42模型組 B組 10 243.27±26.04青藏龍膽組 C組 10 184.92±13.74聯(lián)苯雙酯組 D組 10 157.76±6.67

說(shuō)明：CCl4模型組小鼠血清ALT明顯高于正常組（P〈0.01），青藏龍膽組小鼠血清ALT明顯低于模型組，與模型組相比（P〈0.01）有顯著意義.聯(lián)苯雙酯組血清ALT與模型組相比明顯降低（P〈0.01），與模型組相比（P〈0.01）有顯著意義.聯(lián)苯雙酯組與青藏龍膽組比較明顯降低（P〈0.01）與青藏龍膽組有顯著意義.

2 結(jié)果

2.1 青藏龍膽對(duì)CCl4肝損傷小鼠血清ALT的影響

由表結(jié)果可以得出：模型組小鼠血清ALT明顯高于正常組表明對(duì)小鼠肝細(xì)胞造成嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物模型制備成功，青藏龍膽組的血清ALT明顯低于模型組，表明青藏龍膽對(duì)小鼠肝有保護(hù)作用.

2.2 肝組織的光鏡檢查

模型組；肝小葉邊界不清，肝小葉中心肝細(xì)胞氣球樣變，肝細(xì)胞體積增大，排列紊亂擁擠，除肝細(xì)胞變性和壞死外，匯管區(qū)可見(jiàn)輕度炎細(xì)胞浸潤(rùn).

青藏龍膽組：鏡下可見(jiàn)肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，肝細(xì)胞大小正常，無(wú)變性和壞死.

模型組

青藏龍膽組

討論：（1）青藏龍但作為青藏高原特有的藥物，藏醫(yī)認(rèn)為其味苦，性寒，有清濕熱，瀉肝火，鎮(zhèn)咳，利喉，健胃等功效，主治感冒發(fā)燒，目赤咽痛，肺炎，咳嗽，胃炎，腦膜炎，氣管炎等.民間一直將其作為抗肝炎的藥物使用，但其對(duì)肝臟損傷方面的治療還未見(jiàn)報(bào)道，為此我們選擇了此藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn).

（2）肝臟是體內(nèi)重要的生物代謝功能器官，CCl4在肝臟產(chǎn)生三氯甲基自由基，啟動(dòng)肝細(xì)胞膜肝微粒體膜脂質(zhì)過(guò)氧化，使肝細(xì)胞受損.ALT主要分布于肝臟，肝臟正常時(shí)，血清中其含量較低，但肝炎，肝硬化，藥理中導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死時(shí)，肝細(xì)胞通透性增加，使得血漿ALT含量升高.因此，ALT被認(rèn)為是肝受損的敏感指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)我們觀察了青藏龍膽對(duì)CCl4誘發(fā)的小鼠肝損傷的作用.預(yù)處理青藏龍膽組血清ALT水平明顯減低（P＜0.01），結(jié)合病理切片檢查結(jié)果顯示，可以說(shuō)明，青藏龍膽對(duì)CCl4所致小白鼠肝損傷具有保護(hù)作用，作用機(jī)理有待于進(jìn)一步研究.

（3）根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果知，加大對(duì)青藏龍膽的開(kāi)發(fā)進(jìn)度，積極探索其治病機(jī)理，爭(zhēng)取其再抗肝炎方面的突破，將其開(kāi)發(fā)成新藥，將是藏藥史上的一大創(chuàng)新.

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