湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院 李俊雅 李 君

河南羚銳制藥股份有限公司 袁德先

HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地芍藥中丹皮酚的含量

湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院 李俊雅 李 君

河南羚銳制藥股份有限公司 袁德先

芍藥藥材來(lái)源于毛茛科植物芍藥（Paeonia lacilfora Pall）的干燥根，收載于《中國(guó)藥典》2010年版1部。中醫(yī)臨床用于治療頭痛眩暈，肋痛、腹痛，四肢攣痛，血虛萎黃，月經(jīng)不調(diào)，自汗、盜汗?，F(xiàn)代研究證明丹皮酚是芍藥藥材主要活性成分之一。本文，筆者以丹皮酚含量變化為依據(jù)，用高效液相法測(cè)定不同產(chǎn)地芍藥中丹皮酚的含量。

一、儀器與樣品

儀器為島津LC-20AT高效液相色譜儀，SPD-20A型紫外檢測(cè)器，CTO-10A S vp型柱溫箱，CBM-102型工作站。樣品為丹皮酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0708-9704），芍藥樣品于2010年11月—2011年1月分別采于湖北十堰、安徽亳州、四川雅安、河南南陽(yáng)、湖南懷化等地。甲醇、異丙醇、乙腈為色譜純，所用其他試劑均為分析純。

二、方法與結(jié)果

1.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。色譜柱SHMADZU shim-pack-vp-ODS 150mm×4.6mm（column size）serial NO 8042464，柱溫：室溫。流動(dòng)相：甲醇-水（60∶40）。流速：1.0m l·min-1。檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm，理論塔板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。在此條件下，丹皮酚與相鄰成分達(dá)到基線分離，與其他相鄰色譜峰分離度大于1.5，符合分離要求。（圖1，圖2）

2.溶液的制備。

（1）對(duì)照品溶液制備。取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1.0mL含0.02mg（實(shí)配為0.032mg/mL）的溶液，即得丹皮酚對(duì)照品溶液。

（2）樣品溶液制備。取芍藥藥材研細(xì)，取約0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇，密塞，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）45min，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.線性關(guān)系考察。分別精密吸取對(duì)照品溶液（0.032 0mg/ mL）5.0uL，7.0uL，10.0uL，12.0uL，15.0uL依次進(jìn)入色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），含量為橫坐標(biāo)（X）得回歸方程為：Y=7×106X+8384.5，r=0.9999，表明丹皮酚在0.16～0.48μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

4.精密度實(shí)驗(yàn)。精密吸取同一丹皮酚對(duì)照溶液（0.032 0mg/ mL）10μL，按上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算RSD值，得對(duì)照品溶液的RSD為0.55%，表明精密度良好。

5.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取樣品制成供試品溶液，精密量取10μL，分別在0，1，2，4，8，12h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD值，測(cè)得樣品的RSD值為0.97%，表明樣品的穩(wěn)定性良好。

6.重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。同一批樣品精密稱(chēng)取5份，分別按樣品測(cè)定方法測(cè)定，進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算RSD值，測(cè)得供試品RSD值為1.24%，表明樣品的重現(xiàn)性良好。

7.加樣回收率實(shí)驗(yàn)。精密稱(chēng)取芍藥干燥根粗粉5份，加入一定量的丹皮酚對(duì)照品，制備樣品液，進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算加樣回收率，測(cè)得供試品RSD值為1.35%，表明樣品的加樣回收率良好。

8.樣品測(cè)定。以HPLC法分別測(cè)定采收于湖北十堰、安徽亳州、四川雅安、河南南陽(yáng)、湖南懷化等地芍藥中丹皮酚的含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表 1 不同產(chǎn)地丹皮酚含量測(cè)定結(jié)果

三、討論

1.經(jīng)紫外線掃描，丹皮酚在274nm波長(zhǎng)處有最大吸收，在此波長(zhǎng)處，丹皮酚吸收靈敏，基線平穩(wěn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，故本實(shí)驗(yàn)選定274nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.本實(shí)驗(yàn)曾選用乙腈-水-冰醋酸（33∶65∶2）、甲醇-醋酸-水（60∶2∶38）、甲醇-水（80∶20）等作流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)分離效果差，丹皮酚峰變寬。經(jīng)實(shí)驗(yàn)探索，反復(fù)調(diào)整甲醇-水的比例后，發(fā)現(xiàn)采用甲醇一水（70∶30）為流動(dòng)相，丹皮酚出峰時(shí)間約為4.5min，與相鄰成分達(dá)到基線分離，出峰時(shí)間、峰形、柱效均較為滿意，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。