夏新智 （青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東 青島 266109）

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豬細(xì)小病毒ELISA檢測(cè)報(bào)告

夏新智 （青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東 青島 266109）

利用豬細(xì)小病毒IgG抗體檢測(cè)ELISA試劑盒對(duì)某豬場(chǎng)妊娠母豬的38份血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，該樣本中34份血清為陽(yáng)性，3份假陽(yáng)性，1份陰性，陽(yáng)性率達(dá)到89.5%。

豬 細(xì)小病毒 ELISA IgG抗體

豬細(xì)小病毒(PPV)是以引起胚胎和胎兒感染及死亡而母體本身不顯癥狀的一種豬繁殖障礙性傳染病。該病僅發(fā)生在初產(chǎn)母豬，對(duì)經(jīng)產(chǎn)母豬往往呈隱性帶毒狀態(tài)。臨床主要表現(xiàn)為胎兒感染死亡，產(chǎn)出死胎、畸形胎、木乃伊胎及不孕等癥狀。近年來(lái)，隨著我國(guó)規(guī)?；B(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，該病毒給許多豬場(chǎng)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，這種現(xiàn)象也引起了國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者的關(guān)注[1]。目前，PPV的檢測(cè)方法很多，病毒分離鑒定是基本的檢測(cè)方法，盡管RT-PCR技術(shù)發(fā)展很快，但對(duì)大多數(shù)豬場(chǎng)還是很難達(dá)到這種條件進(jìn)行檢測(cè)。而ELISA方法因其特異性強(qiáng)，靈敏度高備受養(yǎng)殖者們的青睞。本報(bào)告利用豬細(xì)小病毒IgG抗體檢測(cè)ELISA試劑盒對(duì)某豬場(chǎng)妊娠母豬的38份血清進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性率達(dá)到89.5%。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢材料與試劑盒 38份妊娠母豬血清采自濰坊某豬場(chǎng)；豬細(xì)小病毒IgG抗體檢測(cè)ELISA試劑盒由東莞市天辰生物科技有限公司生產(chǎn)(產(chǎn)品批號(hào)10041303)

1.1.2 主要試劑

表1 主要試劑

1.1.3 試劑配制 濃縮洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫并使沉淀的結(jié)晶物質(zhì)溶解，用去離子水1:25倍稀釋。

1.2 試驗(yàn)方法

（1）使用前將試劑盒置室溫30min，恢復(fù)常溫。（2）取所需要用量包被微孔板條，設(shè)空白、陰性及陽(yáng)性對(duì)照各2孔。（3）陰性、陽(yáng)性對(duì)照空分別加陰性、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl(陰陽(yáng)性對(duì)照血清不用稀釋?zhuān)苯邮褂?；樣品孔每孔先加樣品稀釋液90μl，再加樣品10μl(或樣本1:10稀釋后加100μl)；空白對(duì)照不加?；靹?，置37℃溫育30min。（4）扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置60s后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。（5）每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白對(duì)照孔除外)。置37℃溫育30min。（6）洗滌，同上。（7）每孔(包括空白對(duì)照孔)依次加顯色液A、顯色液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10min。（8）每孔(包括空白對(duì)照孔)加終止液50μl，混勻，置酶標(biāo)儀450nm處測(cè)各孔OD值。

2 結(jié)果

2.1 被檢樣品的OD值

表2 38份血清ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.2 結(jié)果判定

正常情況下本試驗(yàn)中滿(mǎn)足陰性對(duì)照孔OD450nm值≤0.1；陽(yáng)性對(duì)照孔OD450nm值≥0.4的條件時(shí)，試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)才有效。計(jì)算時(shí)，臨界值=0.15+陰性對(duì)照孔均值；所有陰性、陽(yáng)性對(duì)照和樣品OD450nm值均須減去空白平均值后作為計(jì)算值；陰性對(duì)照孔OD450nm值大于0.10時(shí)應(yīng)舍棄，如所有陰性對(duì)照孔OD450nm值都大于0.10時(shí)須重復(fù)試驗(yàn)；陰性對(duì)照孔低于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。

檢測(cè)標(biāo)本OD450nm值≥臨界值判定為本試驗(yàn)陽(yáng)性；檢測(cè)標(biāo)本OD450nm值<臨界值判定為本試驗(yàn)陰性。

本試驗(yàn)中空白對(duì)照平均值=(0.108+0.103)/2=0.1055，陽(yáng)性對(duì)照OD450nm值=2.005-0.1055=1.8995＞0.4，陰性對(duì)照OD450nm值=0.098-0.1055=-0.0075<0.1。

所以本試驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果有效，即所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)為有效數(shù)據(jù)。根據(jù)上述方法計(jì)算可以得到12號(hào)樣品為陰性；9,10,11號(hào)樣品呈假陽(yáng)性；其余樣品均為陽(yáng)性。

3 討論與分析

用ELISA方法檢測(cè)血清抗體具有快速，準(zhǔn)確，特異性好，靈敏度高等特性，很適合現(xiàn)在一些豬場(chǎng)做常規(guī)的檢測(cè)[2]。通過(guò)對(duì)送檢38份血清的檢測(cè)，其中34份血清中細(xì)小病毒IgG抗體呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率達(dá)89.5%。經(jīng)了解，該豬場(chǎng)曾免疫過(guò)細(xì)小病毒疫苗，由此可見(jiàn)免疫效果很好，免疫保護(hù)率很高。但其中有3份血清中細(xì)小病毒IgG抗體呈假陽(yáng)性，可能是由于給仔豬免疫細(xì)小病毒弱毒疫苗時(shí)，仔豬體內(nèi)母源抗體水平比較高，疫苗與母源抗體中和而使疫苗的免疫效果大打折扣。為保證豬場(chǎng)以后各種免疫都達(dá)到很好的效果，建議除了加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高豬群的免疫力外，豬場(chǎng)中的技術(shù)人員還應(yīng)定期做一些血清學(xué)檢測(cè)，隨時(shí)了解豬體內(nèi)的各種抗體含量，這對(duì)以后制定一項(xiàng)適合本豬場(chǎng)的免疫程序會(huì)有很大的幫助。

[1] 馮春復(fù), 羅玉均. 豬細(xì)小病毒檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展研究[J]. 廣東畜牧獸醫(yī)科技, 2008, 33:3-4.

[2]劉俊輝, 郭福生, 龔振華等. 用ELISA檢測(cè)豬細(xì)小病毒血清抗體[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫, 2004, 21: 26-27.

（2011–03–04）

S858.28

A

1007-1733(2011)04-0004-02