馬 杰， 孫 興 權(quán)， 林 維 宣

（1.大連工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，遼寧 大連 116034；2.遼寧省出入境檢驗(yàn)檢疫局，遼寧 大連 116001）

0 引 言

隨著工業(yè)的不斷發(fā)展，地球大氣臭氧層遭到了一定的破壞，更多的紫外線到達(dá)地面，由此人們對(duì)紫外線防護(hù)也越來越重視，希望得到UVB 和UVA［1］的全波段的防護(hù)。添加防曬劑的化妝品能有效地保護(hù)人體免受過量紫外線輻射，但化妝品中過量添加防曬劑會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生危害［2］，如長(zhǎng)期使用皮膚粗糙，引起光敏性皮炎等［3］。介于以上原因世界各國(guó)都對(duì)化妝品中添加防曬劑的量做出了限制，我國(guó)2007版《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》對(duì)防曬劑種類和用量也作了詳細(xì)限制［4］。亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚（UV-360）是一種性能良好的新型防曬劑，它對(duì)UVA 和UVB波段的紫外線都有良好的吸收，具有穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)［5］。衛(wèi)生部2007年頒布的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》對(duì)其只作了限量規(guī)定［4］，但未提出很好的檢測(cè)方法。國(guó)內(nèi)也沒有相關(guān)液相色譜檢測(cè)方法的報(bào)道，作者根據(jù)亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚自身特殊的物理化學(xué)特性［6］，通過查閱大量相關(guān)資料［7-10］及大量實(shí)驗(yàn)，以甲醇-水為流動(dòng)相，建立了在15min內(nèi)測(cè)定防曬劑亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的反相高效液相色譜的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀 器

Agilent 1100高效液相色譜儀；KQ-400KDV型超聲波清洗器；Mettler XS205DU 分析天平；IKA MS2型漩渦振蕩器；SIGMA 2-16K 高速冷凍離心機(jī)；Agilent 0.45μm 濾膜。

1.2 試 劑

亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚，純度大于99.9%；甲醇、四氯化碳為色譜純；水為二次去離子高純水。所有溶液在進(jìn)行高效液相色譜分析前都要經(jīng)0.45μm 濾膜過濾及超聲波脫氣。

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚（UV-360）標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0g，于10.0mL 容量瓶中，用3.0mL 四氯化碳溶解，再用流動(dòng)相V（甲醇）∶V（水）=98∶2 定容，然后取此溶液各1.00mL于10.0mL 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾待進(jìn)樣。

1.3.2 樣品提取液的配制

按V（四氯化碳）∶V（甲醇）=3∶7配制成混合溶液，待用。

1.4 樣品處理

準(zhǔn)確稱取0.500 0g化妝品樣品于10mL容量瓶中，用“1.3.2”樣品提取液定容，振蕩超聲提取10 min，4 000r／min 離 心5 min，取 上 清 液1.0mL用流動(dòng)相定容至100.0 mL，然后用0.45μm濾膜過濾，供反相高效液相色譜法分析測(cè)定，進(jìn)樣5μL。記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算。

1.5 色譜條件

色 譜 柱：WATERS Symmetryshield.C18（250mm×4.6mm，5μm）；進(jìn)樣體積5μL；流動(dòng)相V（甲醇）∶V（水）=98∶2，流速1.0mL／min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)360nm；檢測(cè)靈敏度0.05Aufs；柱溫35 ℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)及樣品前處理

亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚非水非油溶性的性質(zhì)導(dǎo)致其在一般的有機(jī)溶劑或水中的溶解度較差。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其在四氯化碳中有較大溶解度，故選擇了四氯化碳來溶解樣品，再用流動(dòng)相定容，有利于消除使用其他溶劑所造成的干擾，能增強(qiáng)樣品測(cè)定的準(zhǔn)確度，故選擇流動(dòng)相稀釋四氯化碳溶解的標(biāo)準(zhǔn)樣品，實(shí)驗(yàn)表明效果良好。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

實(shí)驗(yàn)首先參考了2007版《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》紫外線吸收劑的測(cè)定方法，但發(fā)現(xiàn)亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)無峰出，并不能滿足實(shí)驗(yàn)要求。由于亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚具有較強(qiáng)的極性，利用相似相溶原理，實(shí)驗(yàn)分別比較了乙腈、甲醇、乙醇等有機(jī)相作為流動(dòng)相的分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動(dòng)相為V（甲醇）∶V（水）=98∶2時(shí)，出峰時(shí)間和分離效果比較理想。

2.1.3 波長(zhǎng)、柱溫和流速的選擇

使用DAD 紫外光譜掃描，亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的最佳吸收波長(zhǎng)是在360nm。圖1為DAD 全吸收波長(zhǎng)掃描光譜圖。通過柱溫和流速的比較實(shí)驗(yàn)，表明實(shí)驗(yàn)結(jié)果與柱溫的高低和流速的大小無明顯聯(lián)系，只影響到峰時(shí)間。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)最終選擇柱溫35℃，流速1.0mL／min，這樣實(shí)驗(yàn)用時(shí)短，出峰效果好。

圖1 UV-360DAD全吸收波長(zhǎng)掃描光譜圖Fig.1 DAD chromatogram of the whole absorption wavelength scanning

在選定的色譜條件下所得到的亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚標(biāo)準(zhǔn)圖譜如圖2所示。

2.2 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)及檢出限

分別準(zhǔn)確移取0.1、0.3、0.5、1.0、2.0mL 標(biāo)準(zhǔn)液于10.0 mL 具塞刻度試管中，流動(dòng)相定容，5μL進(jìn)樣，進(jìn)行色譜分析（n=6），以亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚質(zhì)量濃度（X，mg／L）對(duì)相應(yīng)的峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限，結(jié)果見表1。

圖2 UV-360標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜分離圖Fig.2 Chromatogram of standard sample

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限Tab.1 Regression equations，correlation coefficients of calibration curves and detectable limits

2.3 方法的精密度和回收率

取3份防曬類化妝品進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，在選定的色譜條件下，取溶液5μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，以此計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）測(cè)定其精密度（n=6）和回收率，結(jié)果如表2所示。

表2 UV-360回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.2 Experimental results on precision of content and recovery test of UV-360preservatives（n=6）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)方法的平均回收率在98.2%～102.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.48%～3.00%，結(jié)果滿足檢驗(yàn)要求。

2.4 樣品分析

實(shí)驗(yàn)對(duì)市售9種防曬類化妝品進(jìn)行檢測(cè)，檢出含有亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的化妝品1種，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.9%；其他8種化妝品中均未檢出。我國(guó)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》2007年版中規(guī)定，亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚最大允許使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%，以上產(chǎn)品均符合標(biāo)準(zhǔn)。圖3為含有亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚化妝品的實(shí)際樣品色譜分離圖。

圖3 實(shí)際樣品的色譜分離圖Fig.3 Chromatogram of real sample

3 結(jié) 論

本方法在15min內(nèi)可快速測(cè)定，而且方法簡(jiǎn)便，從方法的準(zhǔn)確度與精密度結(jié)果看，在選定的色譜條件下，分離效果好，方法的重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，能夠?qū)崿F(xiàn)樣品的快速檢測(cè)，可用于常規(guī)防曬化妝品中亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的測(cè)定，是對(duì)目前化妝品中亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基酚的測(cè)定方法進(jìn)一步的補(bǔ)充和完善。

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