急性毒性是化妝品安全性評(píng)價(jià)最基礎(chǔ)的試驗(yàn)，通常包括經(jīng)口和經(jīng)皮途徑，必要時(shí)對(duì)某些極端的暴露途徑(如吸入)也應(yīng)給予考慮。急性毒性的主要目的是觀察化學(xué)物急性毒性效應(yīng)、劑量－反應(yīng)關(guān)系、靶器官病變及其可逆性等。自從1927年Trevan第一次引入了半數(shù)致死量(LD50)的概念以來(lái)，LD50成為急性毒性的主要指標(biāo)，但是，從上世紀(jì)70年代開始，LD50試驗(yàn)受到科學(xué)界和動(dòng)物福利主義者的廣泛批評(píng)，此后，經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)方案經(jīng)過(guò)了多次改進(jìn)。2002年，經(jīng)典的經(jīng)口LD50試驗(yàn)被廢除，取而代之以3項(xiàng)優(yōu)化方法。之后，急性吸入毒性的試驗(yàn)方法也進(jìn)行了修訂，并于2009年被法規(guī)認(rèn)可。
　　
　　一、急性毒性試驗(yàn)
　　
　　化妝品急性毒性是指經(jīng)口或經(jīng)皮膚途徑一次接觸或24小時(shí)內(nèi)多次接觸某一化學(xué)物質(zhì)，或4小時(shí)內(nèi)吸入暴露化學(xué)物所引起的不良效應(yīng)?！耙淮巍苯佑|，在經(jīng)口途徑染毒時(shí)，是指瞬間給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒，在經(jīng)呼吸道與皮膚染毒時(shí)，是指在一個(gè)規(guī)定的時(shí)間段內(nèi)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物持續(xù)接觸化學(xué)物的過(guò)程。而“多次”接觸是指當(dāng)外源化學(xué)物毒性很低時(shí)，即使一次給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最大染毒劑量仍不能觀察到毒性作用，從而需要在24小時(shí)內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行多次染毒，以達(dá)到規(guī)定的限制劑量。急性毒性試驗(yàn)可以分為兩類。一類是以死亡為毒性終點(diǎn)的經(jīng)典試驗(yàn)，主要是求得LD50。另一類實(shí)驗(yàn)不以死亡為觀察終點(diǎn)，這類試驗(yàn)可得到受試物靶器官毒性和非致死性不良反應(yīng)的數(shù)據(jù)。傳統(tǒng)的急性毒性試驗(yàn)屬于第一類。1984年，英國(guó)毒理學(xué)會(huì)首先提出不應(yīng)使用大量動(dòng)物來(lái)獲得看似精確的LD50值，1987年經(jīng)典LD50試驗(yàn)法最先被歐洲委員會(huì)廢除，2002年，被OECD指南廢除。
　　對(duì)于“急性吸入毒性試驗(yàn)”，經(jīng)典的動(dòng)物試驗(yàn)于2009年得到了修訂，增加了3R的內(nèi)容和非LD50的程序。2008年，OECD認(rèn)可了德國(guó)提出的“急性吸入毒性一急性毒性分類(ATC)方法”，其原理類似于經(jīng)口毒性試驗(yàn)的ATC法。2009年，重復(fù)劑量吸入毒性(28天或14天試驗(yàn))和亞慢性吸入物毒性(90天試驗(yàn))也按照3R的原則進(jìn)行了更新。急性皮膚毒性仍沿用動(dòng)物試驗(yàn)，它是指受試物應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不超過(guò)體表皮膚面積的10％，經(jīng)過(guò)14天觀察，病理學(xué)檢查毒性變化主測(cè)定LD50值，急性皮膚毒性試驗(yàn)對(duì)于皮膚吸收和其它亞慢性皮膚毒性試驗(yàn)的劑量確定是有用的。
　　化妝品急性毒性試驗(yàn)一般選用成年健康哺乳動(dòng)物，首選大鼠，其次是小鼠，特別必要時(shí)才選擇非嚙齒類動(dòng)物(犬或猴)。試驗(yàn)前首先要了解受試物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，根據(jù)受試物的用途和有關(guān)測(cè)試規(guī)范設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。對(duì)于新化學(xué)物，還應(yīng)檢索與其化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)相似的化學(xué)物的毒性文獻(xiàn)資料，這樣既能提高動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性和準(zhǔn)確性，對(duì)于減少和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用也是必需的。急性毒性的內(nèi)涵是很豐富的，不能簡(jiǎn)單地理解為只是LD50的測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果的觀察記錄內(nèi)容主要包括4個(gè)方面，即臨床癥狀及發(fā)生過(guò)程、死亡情況和時(shí)間分布、體重和病理形態(tài)變化。觀察時(shí)間一般要求14天。
　　
　　二、急性毒性試驗(yàn)的替代方法
　　
　　從法規(guī)的角度講，化妝品急性毒性試驗(yàn)的主要目的是按照有關(guān)管理規(guī)定對(duì)其組份的固有毒性進(jìn)行基本了解和分類，目的是保護(hù)公眾健康。目前急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)的優(yōu)化方法共有3項(xiàng)，即是固定劑量程序法(OECD TG 420)，急性毒性分類方法(OECD TG 423)和上下程序法(OECD TG 425)。每種方法均需預(yù)設(shè)劑量，開始劑量的確定可基于小范圍內(nèi)的預(yù)試驗(yàn)研究、細(xì)胞毒性篩選或已有資料進(jìn)行分析。染毒后，觀察動(dòng)物明顯的毒性癥狀，包括死亡(ATC或UDP)，或毒性癥狀(如FDP)。在歐美等國(guó)家以死亡為終點(diǎn)的試驗(yàn)已被所有法規(guī)廢除，因此急性毒性試驗(yàn)中替代方法的使用已成為強(qiáng)制性的方法。三種替代方法中，ATC法最常用(在歐洲約50％的經(jīng)口毒性試驗(yàn)采用此方法)。
　　
　　1　固定劑量法
　　于1984年由英國(guó)毒理學(xué)會(huì)(BTS)最早提出。該試驗(yàn)不以動(dòng)物死亡為觀察終點(diǎn)，而是利用預(yù)先選定的或固定的一系列劑量染毒，從觀察化學(xué)物的毒性反應(yīng)體征作為終點(diǎn)來(lái)對(duì)化學(xué)物的毒性進(jìn)行分級(jí)。該方法的價(jià)值在于使估計(jì)化學(xué)品急性經(jīng)口毒性所需要的動(dòng)物量達(dá)到最小。試驗(yàn)各組選用同一性別(通常選用雌性)動(dòng)物，以5、50、300和2000mg／kg四個(gè)固定劑量(特殊需要可考慮增加5000mg／kg)順次進(jìn)行經(jīng)口染毒。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定的能夠產(chǎn)生毒性反應(yīng)但又不至于引起死亡的劑量作為起始劑量。根據(jù)毒性反應(yīng)和死亡的有無(wú)來(lái)確定是否在更高劑量或更低劑量繼續(xù)進(jìn)行試驗(yàn)。出現(xiàn)下列情況情況結(jié)束試驗(yàn)：1)當(dāng)出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)或已確認(rèn)不多于一只動(dòng)物死亡；2)最高劑量未出現(xiàn)毒性反應(yīng)；3)最低劑量動(dòng)物出現(xiàn)死亡。以初始劑量為50mg／kg為例，5只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(包括預(yù)試驗(yàn)1只)，如果死亡數(shù)≥2只，則再選擇一組動(dòng)物給予5mg／kg的受試物；如果≥1只動(dòng)物具有明顯毒性，或1只死亡，則將該受試物按GHS分類為3類物質(zhì)；如表現(xiàn)為無(wú)毒性，則再選擇一組動(dòng)物給予300mg／kg的受試物。FDP法估計(jì)LD50在一個(gè)限定的劑量間隔內(nèi)，結(jié)果可按照GHS分級(jí)系統(tǒng)對(duì)化合物進(jìn)行正確分類。
　　
　　2　急性毒性分類法
　　由Sumiey于1990年提出，該試驗(yàn)是以死亡為終點(diǎn)的分階段試驗(yàn)法，試驗(yàn)分步進(jìn)行，每一步使用單一性別(通常為雌性)的3只動(dòng)物，確定動(dòng)物的死活情況后再?zèng)Q定下一步試驗(yàn)。有3種可能的結(jié)局：(1)無(wú)需進(jìn)一步試驗(yàn)即可分級(jí)；(2)同一劑量水平再做3只動(dòng)物；(3)在高一級(jí)或低一級(jí)劑量水平另做3只動(dòng)物。以開始劑量300mg／kg為例，給予3只動(dòng)物染毒，如出現(xiàn)2～3只動(dòng)物死亡，則下一步試驗(yàn)降低一級(jí)劑量，以50mg／kg劑量染毒；如出現(xiàn)0～1只動(dòng)物死亡，則下一步試驗(yàn)再用同一劑量水平進(jìn)行另外3只動(dòng)物的染毒。與經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)法相比，采用ATC法僅需2～4步即可判定急性毒性分類，所用大鼠不超過(guò)12只，有效地減少了動(dòng)物的使用量。
　　
　　3　上下增減劑量法
　　又稱階梯法，序貫法。由Dixon和Mood于1948年首次提出，1985年Bruce進(jìn)行了改進(jìn)。1987年該方法被美國(guó)材料學(xué)會(huì)(ASTM)采納，2001年被OECD采納。該方法最大的特點(diǎn)是大大減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用，不但可以進(jìn)行毒性表現(xiàn)的觀察，還可以估算LD50及其可信限，適合于能引起動(dòng)物快速死亡的受試物。UDP由限度試驗(yàn)和主試驗(yàn)組成，限度試驗(yàn)分為2000mg／kg和5000mg／kg兩個(gè)劑量水平，用于受試物毒性較小的情況。主試驗(yàn)是一個(gè)預(yù)先設(shè)計(jì)的染毒程序，每次染毒1只動(dòng)物，由第1只動(dòng)物染毒后的反應(yīng)決定第2個(gè)動(dòng)物接受化學(xué)物的劑量，若動(dòng)物存活，第2只動(dòng)物給予高一級(jí)劑量，若第1只動(dòng)物死亡或出現(xiàn)瀕死狀態(tài)，第2只動(dòng)物給予低一級(jí)劑量。在對(duì)每只染毒動(dòng)物仔細(xì)觀察48h后，可以決定是否對(duì)下1只動(dòng)物染毒以及確定染毒劑量。當(dāng)滿足停止試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)可以結(jié)束試驗(yàn)。根據(jù)終止時(shí)所有動(dòng)物的狀態(tài)，用最大可能性法計(jì)算LD50值。采用上下增減劑量法確定LD50只需要6～9只動(dòng)物。
　　
　　4　急性吸入毒性－急性毒性分類法
　　是將急性經(jīng)口途徑的分類法應(yīng)用于吸入途徑，原理與試驗(yàn)過(guò)程與經(jīng)口的ATC相同，OECD列為TG436。該試驗(yàn)?zāi)軡M足大多數(shù)法規(guī)監(jiān)管的需要，提供一個(gè)對(duì)LG50和GHS分類的范圍估計(jì)。與傳統(tǒng)的急性吸入毒性相比，替代方法使用了更少的動(dòng)物。當(dāng)然，新方法無(wú)法滿足所有監(jiān)管和科學(xué)研究的需要，必要時(shí)可執(zhí)行修訂后的動(dòng)物試驗(yàn)(即TG403)。
　　
　　三、急性毒性的體外篩選方法
　　
　　早在上世紀(jì)50年代，利用體外細(xì)胞系統(tǒng)預(yù)測(cè)體內(nèi)急性毒性效應(yīng)的研究就開始了，人們發(fā)現(xiàn)體外細(xì)胞毒性與動(dòng)物急性毒性死亡劑量之間具有相關(guān)高度性，還有研究表明誘發(fā)體外細(xì)胞毒性的化學(xué)物濃度與人血液該物質(zhì)的致死濃度之間存在相關(guān)性。體外細(xì)胞毒性的用途，首先是代替LD50試驗(yàn)中的劑量確定試驗(yàn)用于預(yù)測(cè)急性經(jīng)口毒性的開始劑量，其次作為系列組合試驗(yàn)的一部分，做為新化學(xué)物質(zhì)分類和標(biāo)識(shí)的依據(jù)，以減少或替代現(xiàn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，此外，還可用于毒性機(jī)制的研究中。
　　
　　1　預(yù)測(cè)體內(nèi)毒性的開始劑量
　　最早由替代方法驗(yàn)證中心(ZEBET)提出了利用體外細(xì)胞毒性預(yù)測(cè)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)的策略，在細(xì)胞毒性的IC50和急性經(jīng)口毒性的LD50數(shù)據(jù)之間建立標(biāo)準(zhǔn)回歸方程，用細(xì)胞毒性估計(jì)體內(nèi)經(jīng)口毒性的LD50的值，作為體內(nèi)試驗(yàn)的開始劑量。目前經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的兩項(xiàng)細(xì)胞試驗(yàn)方法分別BABL／c 3T3成纖維細(xì)胞中性紅攝取試驗(yàn)和正常人角質(zhì)細(xì)胞(NHK)中性紅攝取試驗(yàn)。經(jīng)過(guò)大量已有體內(nèi)和體外毒理學(xué)數(shù)據(jù)的分析，目前公認(rèn)的預(yù)測(cè)模型是公式：log(LD50)=0.435×log(IC50x)+0.625。
　　對(duì)于改良后的經(jīng)口毒性試驗(yàn)，如果都能從細(xì)胞毒性試驗(yàn)資料獲得最佳開始劑量的合理預(yù)測(cè)，則可以減少1～3個(gè)劑量的試驗(yàn)步驟。對(duì)于一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，如何將細(xì)胞毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)用于ATC、UDP等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法開始劑量的計(jì)算呢?Spielman提出4步建議：第一步，從細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇10－20種參考化學(xué)物質(zhì)，用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞毒性試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)試，最好用BABL／c 3T3中性紅攝取法；第二步，用細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中得到的IC50值與細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)庫(kù)中的LD50值進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算出本實(shí)驗(yàn)室的回歸方程；第三步，將本實(shí)驗(yàn)室得到的回歸方程與公認(rèn)的回歸方程比較，判斷是否與之一致，并處于確定的預(yù)測(cè)區(qū)間內(nèi)；第四步，如果符合上述條件，則可能用于體內(nèi)毒性試驗(yàn)的預(yù)測(cè)，否則，建議改進(jìn)細(xì)胞種類或試驗(yàn)方法以調(diào)整試驗(yàn)方法的敏感性。
　　
　　2　預(yù)測(cè)急性毒性的組合試驗(yàn)
　　細(xì)胞毒性試驗(yàn)可作為組合試驗(yàn)的一部分，用于急性毒性的預(yù)測(cè)。這幾項(xiàng)細(xì)胞試驗(yàn)采用的是3種人類細(xì)胞系，由以下4個(gè)實(shí)驗(yàn)組合而成：
　?、貶epG2細(xì)胞蛋白容量試驗(yàn)：肝細(xì)胞瘤細(xì)胞系Hep G2暴露于測(cè)試物中，通過(guò)Lowry法測(cè)定蛋白容量的改變，檢測(cè)細(xì)胞毒性。作為序列試驗(yàn)的一部分，與②、③和④組合，或僅與試驗(yàn)②組合，可減少經(jīng)口急性毒性的動(dòng)物數(shù)量。
　?、贖L-60細(xì)胞ATP含量試驗(yàn)：HL-60細(xì)胞(人類急性前髓細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)暴露于測(cè)試物質(zhì)中，采用(Lucifer-LU試劑盒)熒光素－熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生的生物發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)ATP含量(Kangas，1984)。作為序列試驗(yàn)的一部分，與①、③和④組合，或僅與試驗(yàn)①組合，可減少經(jīng)口急性毒性的動(dòng)物數(shù)量。
　　③張氏肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)試驗(yàn)：該方法最早由Paul于1975提出。Chang肝細(xì)胞培養(yǎng)于石蠟封固的96-孔微孔板中，細(xì)胞形態(tài)變?yōu)榧従E狀表明生長(zhǎng)存在缺陷，以此作為生長(zhǎng)抑制的判斷依據(jù)。再培養(yǎng)7天收獲培養(yǎng)物，可用于試驗(yàn)④。作為序列試驗(yàn)的一部分，與①、②和④組合，可減少經(jīng)口急性毒性的動(dòng)物數(shù)量。
　　④張氏細(xì)胞pH改變?cè)囼?yàn)：試驗(yàn)③的培養(yǎng)物經(jīng)168h后記錄培養(yǎng)基(酚紅指示劑的)pH顏色變化，正常為黃色，紫色可判斷為完全受抑制，介于紅色和黃色之間判斷為部分受抑制。用于序列試驗(yàn)的一部分，與①、②和③組合，可減少經(jīng)口急性毒性的動(dòng)物數(shù)量。
　　
　　3、QSAR模型
　　有許多軟件包用于預(yù)測(cè)人類健康的影響和相關(guān)的毒性，這些系統(tǒng)能夠直接從化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)其毒性。由于其使用方便和快速的特點(diǎn)，已經(jīng)在實(shí)踐中得到應(yīng)用，如TOPKAT系統(tǒng)。
　　
　　四、化妝品急性毒性預(yù)測(cè)的決策程序
　　
　　在目前急性毒性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)仍不可避免的情況下，建立科學(xué)合理的預(yù)測(cè)模型十分必要。目前已經(jīng)開發(fā)出多種決策樹(decision-tree)的方法，可避免大量急性毒性測(cè)試，通過(guò)最大化的利用現(xiàn)有的信息以預(yù)測(cè)其它化學(xué)物的可能效應(yīng)。當(dāng)現(xiàn)有信息的收集不能滿足于危害評(píng)估所需資料的要求時(shí)，決策樹的作用特別重要。由于化學(xué)物質(zhì)的毒性效應(yīng)主要受其化學(xué)結(jié)構(gòu)的影響，因此，可按照大多數(shù)基于結(jié)構(gòu)或廣泛已知的理化特性的數(shù)據(jù)，將每種結(jié)構(gòu)明確的化學(xué)物分類建立決策樹分類系統(tǒng)。
　　決策樹的毒性評(píng)估評(píng)估可覆蓋與化學(xué)品危險(xiǎn)性評(píng)估相關(guān)的全部毒性終點(diǎn)，運(yùn)用的方法包括體外試驗(yàn)和計(jì)算機(jī)方法。對(duì)于急性毒性的決策樹評(píng)估策略，特別應(yīng)強(qiáng)調(diào)最高閾值濃度——階層向下的方法(簡(jiǎn)稱UTC)，體內(nèi)試驗(yàn)只是最后的選擇。具體決策步驟如下：
　?、偈欠裼幸阎娜祟惢騽?dòng)物數(shù)據(jù)來(lái)顯示該物質(zhì)是急性毒素?(數(shù)據(jù)包括以往體內(nèi)外急性毒性測(cè)試、流行病學(xué)研究結(jié)果、毒物單位數(shù)據(jù)、藥物不良反應(yīng)等)；如果數(shù)據(jù)質(zhì)量與數(shù)量足以達(dá)到分類標(biāo)識(shí)或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的要求，則不要求做測(cè)試；若否，進(jìn)入第2步。
　　②評(píng)估理化性質(zhì)：理化性質(zhì)數(shù)據(jù)有助于確定生物活性及在第7步PBPK研究中劃分的，進(jìn)入第3步；
　　③可否用計(jì)算機(jī)方法預(yù)測(cè)急性毒性?例如應(yīng)用局部QSAR或適宜專家系統(tǒng)(如TOPKAT、MultiCASE、OASIS、ToxBoxes、DEREK)。如可成功應(yīng)用一種以上的預(yù)測(cè)方法，則預(yù)測(cè)可被接納與否?受試物急性毒性預(yù)測(cè)可應(yīng)用于第7步的PBPK研究的，進(jìn)入第4步。
　?、芸煞裼糜?jì)算機(jī)及體外方法預(yù)測(cè)可能的代謝產(chǎn)物及其毒性?代謝產(chǎn)物及其毒性預(yù)測(cè)可應(yīng)用于第7步的PBPK研究的，進(jìn)入第5步。
　?、葸M(jìn)行一般細(xì)胞毒性試驗(yàn)(見前文)，測(cè)試結(jié)果可應(yīng)用于第7步的PBPK研究的，以及要求確立體內(nèi)研究初始劑量的，進(jìn)入第6步。
　?、抟泽w外細(xì)胞試驗(yàn)預(yù)測(cè)化學(xué)物的代謝能力。例如，腸吸收模型、血腦屏障模型。結(jié)果可應(yīng)用于第7步PBPK研究的，進(jìn)入第7步。
　?、哌M(jìn)行PBPK及生物動(dòng)力學(xué)模擬以預(yù)測(cè)主要靶器官毒性代謝作用、體內(nèi)吸收。以PBPK模擬研究結(jié)果確定靶器官及第8步進(jìn)一步體外試驗(yàn)的體內(nèi)劑量濃度。
　?、噙M(jìn)行體外靶器官毒性測(cè)試，例如，包括肝、腎、神經(jīng)、心、肺細(xì)胞毒性試驗(yàn)。靶器官研究結(jié)果可用于證據(jù)權(quán)重評(píng)估的，進(jìn)入第9步。
　?、釋⑵駷橹顾袛?shù)據(jù)進(jìn)行證據(jù)權(quán)重評(píng)估。如證據(jù)足以顯示物質(zhì)是否具急性毒性，進(jìn)行分類和標(biāo)識(shí)或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，不再要求做其它試驗(yàn)，否則進(jìn)入第10步。
　　⑩進(jìn)行優(yōu)化的急性毒性試驗(yàn)，以中性紅攝取法及其它相關(guān)研究預(yù)測(cè)初始劑量，再進(jìn)行優(yōu)化的動(dòng)物試驗(yàn)(經(jīng)口和吸入)或傳統(tǒng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(經(jīng)皮膚)。
　　急性毒性實(shí)驗(yàn)的主要目的是為了預(yù)測(cè)化學(xué)物質(zhì)對(duì)人體的作用，目前的研究結(jié)論認(rèn)為基于人類細(xì)胞進(jìn)行的檢測(cè)與體內(nèi)試驗(yàn)具有較好的相關(guān)性，因此，可以把體外細(xì)胞試驗(yàn)方法用于監(jiān)管目的，以評(píng)價(jià)化合物的危害水平。首先需要正確了解急性暴露化學(xué)物質(zhì)后引起的致死效應(yīng)，其次才是對(duì)特定器官的損害。因此，科學(xué)可行的方法是采用分步驟的方案代替目前的急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)，即通過(guò)建立組合試驗(yàn)或階梯試驗(yàn)預(yù)測(cè)化合物對(duì)人體的作用，具體包括簡(jiǎn)單的細(xì)胞毒性試驗(yàn)、生物動(dòng)力學(xué)(代謝)試驗(yàn)和器官特異性實(shí)