鄧旭坤, 趙湘培, 米 雪, 李 環(huán), 符若男

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074)

我國有24屬，103種番荔枝科植物(Annonaceae)，資源豐富，民間用其果實治療惡瘡腫瘤.目前從番荔枝科植物中尋找抗腫瘤藥物主要集中在紫玉盤屬(Uvaria)、哥納香屬(Goniotnalamus)、番荔枝屬、暗羅屬等植物[1-4].番荔枝科含生物堿類、萜類、黃酮類、番荔枝素、多氧環(huán)己烯和苯乙烯內(nèi)酯等成分.其中苯乙烯內(nèi)酯類、多氧環(huán)己烯類、二萜類及番荔枝內(nèi)酯類具有抗腫瘤活性，如多氧環(huán)己烯類對多藥抗性的腫瘤細(xì)胞有顯著殺傷作用[1-3]；番荔枝內(nèi)酯類抗癌活性極強，能抑制腫瘤細(xì)胞生長及逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性[5-7]；番荔枝素(polyketides) 和乙酞精寧(AGs)也是特有的抗腫瘤活性成分[8].

基于目前對番荔枝屬植物的體內(nèi)腫瘤藥理學(xué)研究較少，筆者采集了海南番荔枝屬植物番荔枝，考察其葉、枝、種子三個部位的醇提物對S180荷瘤小鼠腫瘤生長的抑制作用，并利用給藥前后小鼠的體重、胸腺和脾重量變化評價其一般毒性，為尋找番荔枝抗腫瘤的活性部位和開發(fā)抗腫瘤新藥提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑

海南番荔枝的葉、枝、種子由海南省瓊山市演豐鎮(zhèn)采集，經(jīng)中南民族大學(xué)萬定榮教授鑒定為番荔枝科番荔枝屬植物番荔枝.順鉑(Cisplatin,CDDP)注射粉針劑 (809021CE，齊魯制藥公司)，氯化鈉注射液(090325505，武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司).其它為市售分析純試劑.

1.2 實驗動物及瘤株

SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～25g，購于湖北省疾病預(yù)防控制中心，許可證號：NO.00005069.S180腹水瘤細(xì)胞購于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC).

1.3 樣品制備

浸膏的提?。簩⒎笾Φ娜~、枝、種子烘干并粉碎， 枝、種子各稱取1 kg，葉0.77 kg，用10倍95%的乙醇浸泡2 d后得澄清液，其殘渣用70%的乙醇浸泡2 d，將2次澄清液混合濃縮，得葉、枝、種子的浸膏分別為：55，116，170 g.

藥液的配制：17.5，35，70 mg種子和300，600 mg枝、葉原藥材加入生理鹽水各配成20 mL混合物.

1.4 S180荷瘤小鼠模型的建立

取生長旺盛無潰破的荷S180腹水瘤小鼠，頸椎脫臼處死，從腹腔無菌抽出乳黃色瘤液，經(jīng)臺盼蘭染色確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，將瘤液用無菌生理鹽水稀釋成106個/mL的細(xì)胞懸液，每只小鼠于右前肢腋窩皮下接種0.2 mL.

1.5 動物處理與分組

50只小鼠隨機分5組，每組10只，雌雄各半.分別為空白組(0.95%NS,ig)，順鉑組(3mg/kg,ip)，葉、枝組(300，600 mg/kg，ig)、種子組(17.5，35，70 mg/kg，ig) .接種瘤液24 h后按0.02mL/g給藥，每天1次，連續(xù)10 d，觀察記錄各組小鼠生存狀況并稱重.

1.6 指標(biāo)檢測

末次給藥24 h后，將小鼠處死，迅速剝?nèi)×鰤K、脾臟和胸腺并稱重.按以下公式計算抑瘤率、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)[9]：

抑瘤率=

脾臟指數(shù)=脾臟重(mg)/小鼠體重(g)×100%，

胸腺指數(shù)=胸腺重(mg)/小鼠體重(g)×100%.

1.7 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 番荔枝不同部位醇提物對S180荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用

番荔枝不同部位醇提物對S180荷瘤小鼠抑瘤作用見表1.由表1可見，番荔枝的葉、枝醇提物組的瘤重與空白組比較無顯著性差異(P>0.05)，說明其對小鼠體內(nèi)腫瘤無抑制作用.而種子醇提物各劑量組瘤重較空白組明顯減輕(P<0.05)，是番荔枝抗腫瘤的主要活性部位，其中高劑量組(70 mg/kg)的抑瘤率達(dá)53.31%.

表1 番荔枝不同部位的醇提物對S180荷瘤小鼠抑瘤作用

2.2 番荔枝不同部位醇提物對S180荷瘤小鼠一般毒性作用

番荔枝不同部位醇提物對S180荷瘤小鼠體重和免疫器官(胸腺、脾)的影響結(jié)果見表2.由表2可見，空白組荷瘤小鼠體重增加，而順鉑組小鼠體重降低.番荔枝的葉、枝醇提物使荷瘤小鼠體重增加，體重增長率與空白組無顯著性差異(P>0.05)，說明枝、葉毒性較低；種子醇提物各組較空白組體重減輕(P<0.01)，但減輕程度較順鉑少(P<0.01或P<0.05)，說明種子是番荔枝的主要毒性部位，但毒性較順鉑小.

就番荔枝對荷瘤小鼠的免疫器官影響而言，其葉、枝醇提物組胸腺指數(shù)和脾指數(shù)與空白組相當(dāng)(P>0.05)；而種子醇提物組和順鉑組均使胸腺指數(shù)和脾指數(shù)降低(P<0.01)，且兩者無顯著性差異(P>0.05)，說明種子醇提物對小鼠免疫器官有一定的毒性.

表2 番荔枝不同部位醇提物對S180荷瘤小鼠體重，胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的影響

3 結(jié)語

本研究通過建立S180荷瘤小鼠模型，考察了番荔枝的葉、枝和種子醇提物對腫瘤的抑瘤率，小鼠體重、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的影響.結(jié)果表明，番荔枝的種子醇提物對小鼠S180腫瘤生長有明顯抑制作用，70 mg/kg時抑瘤率達(dá)51.31%；并能使體重減輕，胸腺指數(shù)和脾指數(shù)顯著減??；而其葉和枝醇提物對S180荷瘤小鼠的腫瘤生長無抑制作用，對體重和免疫器官指數(shù)無影響.說明種子是番荔枝抗的腫瘤活性部位和毒性部位，將進一步通過化學(xué)分析明確成分，為番荔枝在抗腫瘤開發(fā)和臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù).

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