盧瓊，譚睿，崔文婷，蔡少青

細(xì)胞信號(hào)通路與動(dòng)脈粥樣硬化

盧瓊，譚睿，崔文婷，蔡少青

心血管疾病是當(dāng)今世界導(dǎo)致人類死亡的頭號(hào)疾病殺手，動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是其中常見的一種血管病變。目前認(rèn)為，動(dòng)脈粥樣硬化是由單核/淋巴細(xì)胞黏附并激活內(nèi)皮細(xì)胞（EC）而開啟的由多種原因?qū)е碌募膊1]。伴隨著對(duì)其研究的深入，越來(lái)越多 AS 相關(guān)的細(xì)胞因子及信號(hào)通路被發(fā)現(xiàn)，介導(dǎo)細(xì)胞因子活性的信號(hào)通路在 AS 的發(fā)生、發(fā)展中有重要作用。對(duì)這些細(xì)胞因子及信號(hào)通路的廣泛研究將有助于我們尋找新的抗 AS 藥物，并進(jìn)一步從分子水平研究藥物抗 AS 的作用機(jī)制。本文總結(jié)了動(dòng)脈粥樣硬化中相關(guān)的信號(hào)通路，并對(duì)中藥抗 AS 作用研究進(jìn)行了展望。

1 炎癥通路與 AS

在 AS 形成發(fā)展的整個(gè)過(guò)程中，從早期炎癥反應(yīng)期、脂紋期到成熟斑塊期以及斑塊破裂期，始終都有各種炎癥細(xì)胞及因子的參與。眾多炎性細(xì)胞因子、黏附因子、趨化因子等相互作用，相互交聯(lián)，擴(kuò)大炎癥反應(yīng)的級(jí)聯(lián)，促成了 AS病變的發(fā)生和發(fā)展。“炎癥學(xué)說(shuō)”、“損傷-反應(yīng)學(xué)說(shuō)”已成為AS 發(fā)病機(jī)制的主流學(xué)說(shuō)之一[2]。核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-aetivated protein kinase，MAPK）、Janus 激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子（JAK-STAT）以及 T 細(xì)胞共刺激分子介導(dǎo)的共刺激信號(hào)通路，在炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中具有重要意義。

1.1 NF-κB 信號(hào)通路與 AS

NF-κB 是最初在鼠成熟 B 細(xì)胞和粒細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)并命名為細(xì)胞核 Kappa 輕鏈基因表達(dá)的調(diào)節(jié)子。NF-κB 是NF-κB/Rel 家族中的一員，由家族中的 p50 和 p65 組成，通常以同源或異源二聚體 p50/p65 非活性形式存在于幾乎所有類型細(xì)胞中。其中 p65 能夠使調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)，p50 則與調(diào)控基因結(jié)合的親和力有關(guān)。在胞漿內(nèi)，p50/p65二聚體與 NF-κB 抑制蛋白（IκB）結(jié)合，隱藏 p65 與靶DNA 結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸殘基，抑制 NF-κB 與靶 DNA 調(diào)節(jié)區(qū)的特異性結(jié)合。一旦被病毒、氧化劑、炎癥細(xì)胞因子等刺激劑激活，便會(huì)與抑制蛋白（IκB）解離，轉(zhuǎn)入核內(nèi)與靶基因的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子的 κB 位點(diǎn)結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控基因的表達(dá)[3]。

NF-κB 參與炎癥反應(yīng)中的多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，激活后可促進(jìn)促炎細(xì)胞因子、黏附分子、趨化因子、生長(zhǎng)因子以及環(huán)氧合酶 2（cyclooxygease-2，COX-2）和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）等氧化應(yīng)激相關(guān)酶基因的過(guò)度表達(dá)，引起明顯的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而誘導(dǎo) AS的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)脈粥樣硬化病灶的巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞中均存在活化的 NF-κB。用高脂飲食喂養(yǎng)低密度脂蛋白受體基因缺陷（LDLR-/-）的小鼠，早期即可在小鼠主動(dòng)脈根部的內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)核因子 κB的活化，并且發(fā)現(xiàn)該部位逐漸發(fā)展成為動(dòng)脈粥樣斑塊[4]。抑制 NF-κB 通路活化則有助于緩解動(dòng)脈粥樣硬化。姜黃素通過(guò)抑制 AS 過(guò)程中 NF-κB 的表達(dá)，抑制炎癥因子的產(chǎn)生，減輕 AS 炎癥反應(yīng)[5]。通過(guò) RNAi 技術(shù)沉默巨噬細(xì)胞Ana-1 NF-κB p65 基因，發(fā)現(xiàn)經(jīng) NF-κB p65 基因沉默的Ana-1 細(xì)胞受 LPS 刺激后促炎因子 TNF-α、IL-1β、IL-6 的表達(dá)明顯減少，抑炎因子 IL-10 的表達(dá)增多[6]。

泡沫細(xì)胞的形成和巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)是 AS 過(guò)程中的兩個(gè)重要事件。已證實(shí)脂肪細(xì)胞增強(qiáng)子結(jié)合蛋白 1（adipocyte enhancer-binding protein 1，AEBP1）在 AS 中扮演重要的調(diào)控作用，通過(guò)下調(diào) IκBα 誘導(dǎo)核因子 NF-κB 產(chǎn)生活性，進(jìn)而促進(jìn)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。這意味著巨噬細(xì)胞 AEBP1 可作為預(yù)防或治療 AS 潛在的治療靶點(diǎn)[7]。而炎癥反應(yīng)中常見的高度乙酰化則表明組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HATs）的小分子抑制劑有抑制炎癥的潛能[8]。研究還發(fā)現(xiàn)，miroRNAs（miR-146、miR-155、miR-181b、miR-21 以及 miR-301a）與凋亡抑制蛋白（IAP）在 NF-κB 活化中均起到一定作用[9-10]，這些都有可能為 AS 治療提供新的靶點(diǎn)。

1.2 MAPK 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與 AS

MAPK 是一類絲氨酸/蘇氨酸激酶，由多種同工酶組成，包括細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extra cellular regulated protein kinases，ERK）、c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）/應(yīng)激活化蛋白激酶（SAPK）、ERK5/大絲裂素活化蛋白激酶（BMK1）和 p38 MAPK[11]。MAPK 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以三級(jí)激酶級(jí)聯(lián)的方式進(jìn)行，首先 MAPKKK 受有絲分裂原刺激磷酸化而激活，然后 MAPKKK 磷酸化激活MAPKK，最后由 MAPKK 磷酸化激活 MAPK，進(jìn)而轉(zhuǎn)入核內(nèi)發(fā)揮作用。ERK、JNK、p38、ERK5/BMK1 可以由不同的刺激因素激活，形成不同的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，激活各不相同的轉(zhuǎn)錄因子，介導(dǎo)不同的生物學(xué)效應(yīng)，但這幾條通路存在廣泛的“cross talk”，從而導(dǎo)致通路間產(chǎn)生相互協(xié)同或抑制作用[12]。MAPK 途徑是介導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)的重要信號(hào)系統(tǒng)，普遍存在于多種生物，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、分裂、死亡以及細(xì)胞間的功能同步等多種生理反應(yīng)的過(guò)程。

其中 ERK、JNK 以及 p38 在動(dòng)脈粥樣硬化中具有重要作用，許多促炎基因包括編碼 TNF-α、IL-2、IL-6、E-選擇素、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1 和 COX-2 等的基因表達(dá)均受到這些通路的調(diào)節(jié)。郭津和徐長(zhǎng)慶[13]發(fā)現(xiàn)在大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型中，促凋亡 JNK 和 p38 蛋白激酶被激活，抗凋亡 ERK1/2 也被激活，抑制或減輕細(xì)胞凋亡可有效防止 AS 的發(fā)生與發(fā)展。血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cell，VEC）功能障礙不僅是 AS 的早期病理改變，也是使動(dòng)因素，在 AS 的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵性的作用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，在 AS 病理生理狀態(tài)下，某些病理因素如細(xì)胞因子、細(xì)菌產(chǎn)物、氧化脂蛋白、晚期糖基化終產(chǎn)物和高半胱氨酸均能夠?qū)е?VEC 中 ERKs 蛋白水平的改變，因而認(rèn)為 ERK 的激活與調(diào)節(jié)是 AS 發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)機(jī)制之一[14]。研究發(fā)現(xiàn)，多球殼菌素通過(guò)抑制 ERK 磷酸化上調(diào)肝臟載脂蛋白 A-I 表達(dá)[15]，從而達(dá)到抗 AS 的目的。抑制 JNK 和 p38 蛋白激酶同樣可達(dá)到抗 AS 的效果。與載脂蛋白 E 基因敲除小鼠比較，JNK2 缺失的載脂蛋白 E 基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化損害明顯減少[16]。當(dāng)歸補(bǔ)血湯下調(diào) p38 MAPK 活性，避免了 ox-LDL 誘導(dǎo)單核細(xì)胞聚集到血管內(nèi)皮，從而在 AS 病變的早期發(fā)展階段阻斷其進(jìn)程，緩解后期病變的發(fā)展[17]。

1.3 JAK-STAT 信號(hào)通路與 AS

JAK/STAT 途徑是細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要途徑之一，不僅參與炎癥反應(yīng)，同時(shí)也與氧化應(yīng)激、細(xì)胞損傷、凋亡等密切相關(guān)[18-19]。JAK 家族包括 JAK1、JAK2、JAK3 和TYR2 4 個(gè)成員。STAT 家族包括 STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b 和 STAT6 共 7 個(gè)成員。細(xì)胞膜上的各種細(xì)胞因子受體與相應(yīng)的配體結(jié)合，形成同源或異源二聚體后，促使細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的 JAKs 相互磷酸化而被激活，活化后的 JAKs 磷酸化其受體酪氨酸殘基，STAT 補(bǔ)位到受體復(fù)合物的酪氨酸磷酸化特異位點(diǎn)，JAKs 接近 STATs 并磷酸化 STAT 的一個(gè)羥基酪氨酸，從而激活 STAT?；罨蟮?STAT 與受體分離，形成同源二聚體或異源二聚體，然后轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核，與 DNA 上的特定調(diào)節(jié)序列結(jié)合，調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄[20]。JAK/STAT 通路調(diào)控的基因包括凋亡相關(guān)基因如 Fas、Bcl-2、Bax，炎性相關(guān)基因如 COX-2、iNOS、IL-8、IL-6 及其他如內(nèi)皮素 1（ET-1）、NADPH 氧化酶基因等[21]。

實(shí)驗(yàn)證明 JAK/STAT 信號(hào)通路在 AS 的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。Gharavi 等[22]發(fā)現(xiàn)磷酸化激活的STAT3（P-STAT3）主要存在于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊炎癥區(qū)的內(nèi)皮細(xì)胞中，而在其他炎性細(xì)胞中較少，非炎癥區(qū)則幾乎沒有。比較 STAT3-/- 小鼠（內(nèi)皮細(xì)胞敲除 STAT3 的小鼠）和 STAT3+/+ 小鼠（野生型的小鼠），發(fā)現(xiàn)在斑塊大小、巨噬細(xì)胞及 P-STAT3 的含量上 STAT3-/- 小鼠都明顯低于STAT3+/+ 小鼠。而 JAK/STAT 的抑制劑可以通過(guò)抑制INF-γ 誘導(dǎo)的人血管平滑肌細(xì)胞 Nox 的活性[21]，從而減少氧自由基的產(chǎn)生，減少細(xì)胞的氧化損傷。

此外，有研究報(bào)道 T 細(xì)胞共刺激分子介導(dǎo)的共刺激信號(hào)通路與 AS 也有密切關(guān)系。T 細(xì)胞介導(dǎo)的針對(duì)斑塊抗原的適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng)是一系列炎癥反應(yīng)的主要環(huán)節(jié)[23]。T 細(xì)胞促 AS 主要是通過(guò) T 細(xì)胞共刺激分子介導(dǎo)的信號(hào)通路。T 細(xì)胞表面的 CD40 分子，被認(rèn)為是首要的共刺激物；主要表達(dá)于某些動(dòng)脈粥樣損害部位的細(xì)胞：內(nèi)皮細(xì)胞，T 細(xì)胞，B 細(xì)胞，巨噬細(xì)胞及血管平滑肌細(xì)胞[24]。T 細(xì)胞表面的 CD40 分子與 B 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞表面的 CD40 受體配對(duì)后可上調(diào)共刺激分子（ICAM-1、VCAM-1、E-Selectin、B7-1、B7-2、MHCII 類分子和 CD40）的活性，并促進(jìn) IL-2、IL-1、IL-6 和 TNF-α等促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成[25]。

2 泛素-蛋白酶體通路與 AS

泛素-蛋白酶體（ubiquitin-proteasome system，UPS）途徑是細(xì)胞內(nèi)非溶酶體途徑蛋白質(zhì)降解通路，廣泛存在于真核生物細(xì)胞中，由泛素（Ub）、泛素活化酶（E1）、泛素偶聯(lián)酶（E2s）、泛素-蛋白連接酶（E3s）、26S 蛋白酶體以及泛素再循環(huán)酶等組成[26]。UPS 對(duì)蛋白質(zhì)的降解包括兩個(gè)連續(xù)的步驟：①在多種蛋白酶的作用下，Ub 分子結(jié)合底物蛋白并標(biāo)記；②標(biāo)記了的底物蛋白，被 26S 蛋白酶體識(shí)別并降解。UPS 除了介導(dǎo)蛋白降解外，還在抗原提呈、細(xì)胞周期、NF-κB 代謝、基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)等方面發(fā)揮重要調(diào)控作用[27]，UPS 的異常則與許多疾病如腫瘤、炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化、心功能不全、高血壓等的致病機(jī)制有關(guān)。

最近有證據(jù)顯示，在 AS 初期、發(fā)展期以及 AS 的并發(fā)癥期，都可能有 UPS 的參與。在血管平滑肌細(xì)胞（SMCs）從收縮型向增殖型轉(zhuǎn)變過(guò)程中，UPS 起著重要的作用。這可能是由于新內(nèi)膜泛素化增加，導(dǎo)致 SMCs 內(nèi)的肌原纖維蛋白降解增加所致[28]。UPS 還可聚集 ox-LDL 或 LDL，誘導(dǎo)人單核細(xì)胞泛素偶聯(lián)酶 E2-25k 表達(dá)并泛素化細(xì)胞內(nèi)蛋白，參與泡沫細(xì)胞形成。研究發(fā)現(xiàn)在人 AS 的冠狀動(dòng)脈內(nèi)，泛素與 SMCs 肌動(dòng)蛋白的免疫反應(yīng)，同時(shí)出現(xiàn)在新內(nèi)膜的基底部；而用蛋白酶體抑制劑處理 SMCs，細(xì)胞的增殖及凋亡呈劑量依賴性抑制，同時(shí) NF-kB 的活性降低而 p53和 p21 表達(dá)上調(diào)[29]，這表明 UPS 與 SMCs 內(nèi)膜增生密切相關(guān)，抑制其活性可能從某種程度上達(dá)到抗 AS 的目的。雖然外源性的蛋白酶體抑制劑己成功地用于癌癥的輔助治療，具有上調(diào) p53、p21 及 Bax 等促凋亡因子及抗增殖的作用。然而，能否防治 AS，還有待進(jìn)一步研究[30]。

3 Rho/Rho 激酶信號(hào)通路與 AS

Rho 是一種小分子 G 蛋白，包括 3 個(gè)亞型：RhoA，RhoB，RhoC。Rho 激酶（Rho-associated coiled-coil forming protein serine/threonine kinase，ROCK）是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，主要包括氨基端的催化結(jié)構(gòu)域（即激酶域，kinase domain）、中間的 α 螺旋區(qū)（包含 Rho 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域，Rho-binding domain，RBD）和羧基端富含半胱氨酸的 pH 結(jié)構(gòu)域（pleckstrin-homology domain，PHD）。ROCK的活性受細(xì)胞外信號(hào)和一些胞漿蛋白的調(diào)節(jié)。當(dāng) ROCK 接受 Rho 傳遞的活化信號(hào)后，會(huì)發(fā)生多個(gè)氨基酸位點(diǎn)的磷酸化而被激活，并介導(dǎo)其下游一系列磷酸化/脫磷酸化反應(yīng)。

ROCK 的異?；罨c許多心血管疾病包括 AS 的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。近年來(lái)關(guān)于 ROCK 在 AS 中作用的研究發(fā)現(xiàn)：① Rho/ROCK 通路參與的各種細(xì)胞功能在 AS 的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用；② Rho/ROCK 通路通過(guò)多種血管活性物質(zhì)，參與 AS 的病理生理過(guò)程；③他汀類藥物的降脂作用，也與抑制 Rho/RocK 相關(guān)[31]。ROCK 通過(guò)參與細(xì)胞遷移、黏附、炎癥反應(yīng)、平滑肌細(xì)胞收縮，胞質(zhì)分裂及下調(diào)一氧化氮合酶（eNOS）合成和表達(dá)導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化[32]。抑制ROCK 的活性，能夠減少相關(guān)黏附分子的表達(dá)，阻止 AS 的發(fā)展。在 ROCK1 基因敲除小鼠中，ROCK1 活性抑制可以減少細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）和血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）的表達(dá)，從而減少血管損傷后新內(nèi)膜的形成[33]。張曼等[34]的研究也證實(shí)了 Rho 激酶抑制劑法舒地爾可通過(guò)下調(diào) ICAM-1、VCAM-1 以及 Rho 激酶 mRNA 的表達(dá)，抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成。

4 TGF-β/Smads 信號(hào)通路與 AS

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β（transforming growth factor-β，TGF-β）是一組具有多種調(diào)節(jié)細(xì)胞功能作用的結(jié)構(gòu)相似的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子。在哺乳動(dòng)物中，TGF-β 超家族有 3 種同分異構(gòu)體：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3，主要通過(guò) Smad 家族蛋白進(jìn)行信號(hào)傳遞。根據(jù)功能的不同 Smad 蛋白分為 3 種：①受體調(diào)節(jié)型，包括 Smad1、Smad2、Smad3、Smad5 和 Smad8；②公共型，包括 Smad4；③抑制型，包括 Smad6 和Smad7[35]。在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中，TGF-β 活化后首先與 TβR-II 結(jié)合，形成異源二聚體復(fù)合物，TβR-I 識(shí)別并結(jié)合該二聚體復(fù)合物。TβR-II 磷酸化 TβR-I 胞漿區(qū) GS 結(jié)構(gòu)域的絲氨酸/蘇氨酸激活 TβR-I，R-Smads 蛋白被活化的 TβR-I 磷酸化后與 Co-Smad 結(jié)合成為轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)，與DNA 上的 Smad 結(jié)合元件相結(jié)合，從而激活特定的靶基因[36]。

TGF-β/Smads 通路在 AS 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。TGF-β 控制的細(xì)胞增殖，細(xì)胞遷移，基質(zhì)合成，傷口收縮，鈣化和免疫應(yīng)答，均是動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中的重要過(guò)程。在 AS 早期，Smad3 高表達(dá)可以促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增生，內(nèi)膜增生，參與 AS 的發(fā)生發(fā)展；在 AS 后期，TGF-β/Smads 通過(guò)促纖維化以及抗炎作用起到穩(wěn)定斑塊的作用[37]。TGF-β/Smads 通路還能夠抑制 MCP-1 的表達(dá)，從而抑制 MCP-1 介導(dǎo)的單核/巨噬細(xì)胞聚集以及趨化，防止內(nèi)膜增生、內(nèi)皮活化。其機(jī)制是 Smad3 與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子c-jun 結(jié)合，進(jìn)而抑制活化蛋白 1（activator protein-1，AP-1）結(jié)合 DNA[38]。在野生型小鼠中，血管緊張素 II（angiotensin II，Ang II）通過(guò) TGF-β 信號(hào)通路上調(diào) Smad3，促使血管平滑肌細(xì)胞中膠原合成增多，從而引起血管纖維化；但是這種現(xiàn)象在 Smad3 基因敲除小鼠中并未出現(xiàn)[39]。

5 Toll 樣受體信號(hào)通路與 AS

Toll 樣受體（Toll-like receptor）是人們?cè)谘芯抗壟咛グl(fā)育過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的 dToll 基因所編碼的一種跨膜受體蛋白，到目前為止 TLR 家族至少已包括了 12 個(gè)成員。其中TLR4 是介導(dǎo)內(nèi)毒素/脂多糖（lipopo-lysaccharide，LPS）應(yīng)答的最主要受體[40]。TLR 激活后信號(hào)途徑大致可分為MyD88 依賴途徑和非 MyD88 依賴途徑。其中 MyD88 是除 TLR3 外所有 TLRs 的銜接蛋白。MyD88 依賴途徑主要引起核因子 κB 易位進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)而誘導(dǎo)免疫基因如單核細(xì)胞趨化蛋白、細(xì)胞黏附分子、白細(xì)胞介素等的轉(zhuǎn)錄；非 MyD88 依賴途徑主要激活干擾素調(diào)節(jié)因子 3（interferon regulated factor 3，IRF-3）并引起 I 型干擾素（type 1 interferons，IFNs）的轉(zhuǎn)錄[41]。

外源性配體 LPS 和內(nèi)源性配體脂蛋白等均可通過(guò)TLR 刺激免疫細(xì)胞在內(nèi)引起持續(xù)的慢性炎癥反應(yīng)，促進(jìn)AS 的形成。張代娟等[42]研究發(fā)現(xiàn)中藥成分青心酮可通過(guò)TLR4 途徑下調(diào) LPS 活化的小鼠平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞 TLR4 mRNA 和蛋白的表達(dá)，在一定程度上減少AS 病灶的形成。單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）是單核細(xì)胞遷移到血管的重要細(xì)胞因子，與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)在野生型小鼠的骨髓源性巨噬細(xì)胞出現(xiàn)了MCP-1 的誘導(dǎo)，而在 TLR2 的基因敲除小鼠中則沒有[43]。用 ox-LDL、LPS 刺激 APOE 基因敲除小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，可以誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞的形成，細(xì)胞內(nèi) TLR4 的表達(dá)顯著升高[44]。這些基因敲除鼠研究結(jié)果均提示 TLR 在 AS 的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。

此外，越來(lái)越多的證據(jù)發(fā)現(xiàn) Wnt 信號(hào)通路在 AS 中參與涉及多個(gè)過(guò)程。Wnt 信號(hào)通路不僅調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能障礙和血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移，而且還具有調(diào)節(jié)炎癥、泡沫細(xì)胞的形成、病理血管生成和鈣化的能力，這些都是斑塊形成和穩(wěn)定的關(guān)鍵過(guò)程[45]。雖然 Wnt 信號(hào)通路在動(dòng)脈粥樣硬化的系統(tǒng)分析尚未完成，但很明顯，對(duì) Wnt 信號(hào)通路更深入地了解可能揭示血管疾病新的治療靶點(diǎn)。

6 結(jié)語(yǔ)

隨著時(shí)代的進(jìn)步，科技的發(fā)展，生物技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域中發(fā)揮了越來(lái)越重要的作用。在國(guó)際上，斑馬魚模式生物由于其繁殖能力強(qiáng)、體外受精發(fā)育、胚胎透明、個(gè)體小、易養(yǎng)殖以及可以進(jìn)行大規(guī)模的正向基因飽和突變與篩選等諸多特點(diǎn)，正逐漸被應(yīng)用于多種疾?。ㄈ缟窠?jīng)退行性疾病、遺傳性心血管疾病、糖尿病等）的研究和小分子化合物的大規(guī)模新藥篩選[46]。此外，運(yùn)用細(xì)胞及分子生物學(xué)手段構(gòu)建含有編碼信號(hào)通路目的基因片段的重組質(zhì)粒（質(zhì)粒通路模型），進(jìn)行大規(guī)模的新藥篩選，也成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。大量研究發(fā)現(xiàn)許多中藥提取物、中藥單體成分、單味中藥和復(fù)方中藥對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化都有顯著療效[5,17,42]，但很多中藥的作用機(jī)制并不是很清楚；而靶向于細(xì)胞因子及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的抗 AS 治療方法直接針對(duì)疾病的本質(zhì)，作用機(jī)制清晰。因此，將新興的生物技術(shù)應(yīng)用于中藥研究，將有助于發(fā)現(xiàn)新的抗 AS 中藥成分，闡明中藥成分的作用機(jī)制，并促進(jìn)中藥的現(xiàn)代化。對(duì) AS 相關(guān)細(xì)胞信號(hào)通路的深入了解以及從細(xì)胞和分子水平開展前瞻性的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究，可望給 AS及中藥作用機(jī)制研究帶來(lái)突破性進(jìn)展。

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國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81173594）；“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2009ZX09502-023）；中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金（SWJTU11ZT26）

610031 成都，西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院（盧瓊、譚睿、崔文婷）；100191，北京大學(xué)藥學(xué)院（蔡少青）

譚睿，Email：tanrui@swjtu.edu.cn

2012-03-06