王平，袁敏

(山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟南250014)

淋必通顆粒處方是一位老中醫(yī)在經(jīng)典方五味消毒飲、滋腎通關丸及程氏萆薢消毒飲的基礎上，結合多年的臨床經(jīng)驗化裁而來。該藥由蒲公英、金錢草、石韋、綿萆薢等組成，具有清熱利濕、散結通淋之功效，治療慢性細菌性前列腺炎、非細菌性前列腺炎、前列腺痛所致的尿頻、尿急、尿痛、腰痛、小腹痛等癥狀，療效顯著［1］。通過構建非細菌性前列腺炎模型，檢測模型大鼠使用淋必通顆粒后前列腺液中的IL-2、IL-8細胞因子的指數(shù)及白細胞數(shù)量變化情況，探討淋必通顆粒治療慢性前列腺炎的作用機理和作用效果，為開發(fā)治療慢性前列腺炎的藥物提供實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試藥物淋必通顆粒由山東省中醫(yī)藥研究院中心實驗室提供，批號20100413。淋必通顆粒提取物人日生藥量為92 g，藥液質量濃度是3.312 g/mL。使用時用水配成所需質量濃度的藥液。

1.1.2 對照藥物前列康片:浙江康恩貝制藥股份有限公司，批號090964，每片質量0.57 g?？诜?，1次3～4片，1日3次。

1.1.3 受試藥物與劑量設置70 kg人日服生藥量92 g，按體表面積折算，確定大鼠高、中、低劑量分別為16.56、8.28、4.14 g/kg(以生藥量計)，相當于70 kg人日服量的2、1、0.5倍，按1 mL/100 g體質量的體積灌胃給藥。

1.1.4 受試動物Wistar種大鼠，雄性，體質量180～220 g，購自山東省實驗動物中心，合格證號:魯動質scxk(魯)20090001號。置于不銹鋼鼠籠內(nèi)飼養(yǎng)，自由攝食飲水，室溫控制在23～25℃，通風良好。

1.1.5 儀器與試劑Mettler-Toledo基本型天平(PL303，上海梅特勒公司生產(chǎn));酶標儀(SANCO 318MC型，上海三科儀器有限公司生產(chǎn));血細胞分析儀(BC—3000，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn))。

IL-2、IL-8細胞因子檢測試劑盒細胞因子檢測試劑盒:南京建成生物有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號:201006。1%角叉菜膠:自配。

1.2 方法

1.2.1 大鼠非細菌性前列腺炎模型的建立［2-6］取健康雄性大鼠，分為正常對照組、非細菌性前列腺炎模型組、淋必通顆粒高、中、低劑量組、前列康片對照組，每組10只。除正常對照組外，其余各組建立大鼠非細菌性前列腺炎模型:取健康雄性大鼠，麻醉后，剖開腹部，向其前列腺兩葉分別注入1%角叉菜膠生理鹽水溶液各0.1 mL，形成非細菌性前列腺炎模型［2］，術后灌胃給予復方磺胺甲基異惡唑(Co SMZ)抗感染。手術7 d后分別給藥，按照淋必通顆粒高、中、低劑量組、前列康片對照組分別給大鼠淋必通顆粒提取物16.56、8.28、4.14 g/kg，前列康片0.62 g/kg，按1.0 mL/100 g體質量的體積灌胃給藥，持續(xù)4周。

1.2.2 前列腺液的獲取將大鼠在麻醉情況下，固定，剖開腹部，在膀胱的后部找到前列腺。結扎前列腺根部，將兩葉前列腺完整取出，輕輕將游離端剪開一個小口，讓前列腺液緩緩流入離心管中，密閉，待用。

1.2.3 檢測指標

白細胞計數(shù)檢測［7］最后一次給藥后，從各組大鼠眼眶靜脈取血，用Micros-60型血液生化儀檢測白細胞計數(shù)，將檢測結果進行統(tǒng)計和組間分析。

大鼠的IL-2、IL-8細胞因子檢測按照試劑盒說明采用酶標儀檢測大鼠的IL-2、IL-8細胞因子，將檢測結果進行統(tǒng)計和組間分析。

1.2.4 前列腺組織病理檢查將已取出的前列腺，經(jīng)10%中性福爾馬林48 h充分固定，梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)HE染色。HE染色切片在光鏡下觀察。

2 試驗結果與分析

2.1 白細胞計數(shù)結果各組大鼠白細胞計數(shù)情況見表1。

表1 各組大鼠白細胞計數(shù)情況(±s，n=10)

表1 各組大鼠白細胞計數(shù)情況(±s，n=10)

注:與正常對照組比較，*P＜0.05;與模型對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別劑量/(g·kg－1)白細胞數(shù)值/(109·L－1)9.96±3.02模型對照組－13.10±1.86*淋必通顆粒高劑量組16.56 10.20±1.43##淋必通顆粒中劑量組8.28 10.90±1.32##淋必通顆粒低劑量組4.14 11.40±1.63#前列康片組0.62 10.38±1.79正常對照組－##

結果表明:淋必通顆粒對非細菌性前列腺炎模型大鼠的白細胞升高有明顯的降低作用，其中，與正常對照組相比，模型對照組白細胞數(shù)值有顯著性差異，說明造模成功;與模型對照組相比，高、中劑量組和前列康組分別有非常顯著性差異(P＜0.01)，低劑量組有顯著性差異(P＜0.05)。

2.2 IL-2檢測結果各組大鼠前列腺液中的IL-2檢測結果見表2。

表2 各組大鼠的IL-2因子的測定結果(±s，n=10)

表2 各組大鼠的IL-2因子的測定結果(±s，n=10)

注:與正常對照組比較，＊＊＊P＜0.001;與模型對照組比較，#P＜0.05。

組別劑量/(g·kg－1)IL-2/(ng·L－1)－163.92±13.80模型對照組－115.29±12.12＊＊＊淋必通顆粒高劑量組16.56 134.86±15.57＊＊#淋必通顆粒中劑量組8.28 123.38±8.94＊＊＊淋必通顆粒低劑量組4.14 121.67±9.37＊＊＊前列康片組0.62 129.38±12.25正常對照組＊＊

結果表明:淋必通顆粒對非細菌性前列腺炎模型的IL-2水平降低有明顯的升高作用，與正常對照組相比，模型對照組數(shù)值有極其顯著性差異(P＜0.001)，說明造模成功;與模型對照組相比，淋必通顆粒高劑量組有顯著性差異(P＜0.05)，淋必通顆粒高劑量組的數(shù)值高于前列康組。

2.3 IL-8檢測結果各組大鼠前列腺液中的IL-8檢測結果見表3。

結果表明:淋必通顆粒對非細菌性前列腺炎模型的IL-8水平升高有明顯的降低作用，其中，與正常對照組相比，模型對照組有非常顯著性差異(P＜0.01)，說明造模成功;與模型對照組相比，高劑量組和前列康組均有非常顯著性差異(P＜0.01)。

表3 各組大鼠的IL-8測定結果(±s，n=10)

表3 各組大鼠的IL-8測定結果(±s，n=10)

注:與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;與模型對照組比較，##P＜0.01。

組別劑量/(g·kg－1)IL-8/(ng·L－1)－64.66±8.25模型對照組－99.59±19.31＊＊淋必通顆粒高劑量組16.56 74.17±10.41##淋必通顆粒中劑量組8.28 79.92±17.67淋必通顆粒低劑量組4.14 84.77±26.44前列康片組0.62 70.87±11.04正常對照組##

2.4 大鼠前列腺病理組織學檢查結果正常對照組前列腺正常，模型對照組前列腺細胞出現(xiàn)萎縮、變性、壞死，細胞間質可見慢性炎細胞浸潤;各組前列腺組織可見間質不同程度的水腫，腺管間隙增大，其間有大量炎性細胞浸潤，腺腔縮小，腔內(nèi)有炎性滲出物，部分可見結締組織增生。見圖1。淋必通顆粒高劑量組易見前列腺細胞，未見明顯的萎縮、變性、壞死出現(xiàn);中劑量組前列腺細胞減少，細胞輕度水腫。低劑量組前列腺細胞減少，可見細胞水腫。前列康組前列腺細胞未見變性壞死。從組織學上可見，淋必通顆粒各治療組與模型對照組相比，病變較輕，表明淋必通顆粒對前列腺組織具有良好的保護作用。見圖2。

圖1 前列腺組織肉眼觀察照片

3 討論

本實驗采用向雄性大鼠的前列腺兩葉分別注入1%角叉菜膠生理鹽水溶液，造成前列腺細胞損傷和炎癥，形成非細菌性前列腺炎模型［8］。這種動物模型操作簡單，實驗效果好，符合臨床實際病理情況，并創(chuàng)新性地從活體動物身上取得了潔凈度高、數(shù)量多的前列腺液，為獲取大鼠前列腺液探索到了一種新的方法。

目前，國內(nèi)對前列腺炎治療的考察多集中在炎性指標上，對于直接反映治“本”效果的細胞因子的研究非常少。本實驗結果表明，淋必通顆粒不僅對非細菌性前列腺炎模型大鼠血液中的白細胞升高有明顯的降低作用，而且對慢性前列腺炎模型大鼠前列腺液中降低的IL-2因子水平有增高作用、增高的IL-8因子水平有降低作用，提示淋必通顆?？梢曰謴吐郧傲邢偌毎墓δ?，減少促炎性細胞因子的數(shù)量，重新使體內(nèi)被破壞的免疫系統(tǒng)趨于平衡［9］;光鏡下觀察到對大鼠前列腺組織發(fā)生的病變均有顯著的改善，表明淋必通顆粒對前列腺組織具有良好的保護作用。

圖2 淋必通顆粒對非細菌性前列腺炎模型治療病理照片

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